支原体肺炎诊断及病原学检测.ppt

支原体肺炎诊断及病原学检测 肺炎支原体肺炎的诊断 临床表现影像学表现病原学诊断 临床表现及实验室检查 潜伏期1 3周起病形式多样 多数患者仅以低热 疲乏起病部分患者可以突发高热并伴有明显的头痛 肌痛 恶心等全身中毒症状 呼吸道症状以干咳最突出 常持续4周以上 多伴有显著咽痛 偶有胸痛 痰中带血 呼吸道以外的症状中 以耳痛 麻疹样或猩红热样皮疹较多见 阳性体征以显著的咽部充血和耳鼓膜充血较多见外周血白细胞总数和中性粒细胞比例多正常 有些患者可升高 病变多为边缘模糊 密度较低的云雾样片状浸润影 从肺门向外周肺野放射 肺实质受累时也可呈大片实变影 肺部阳性体征少而影像表现明显是支原体肺炎的一个重要特点 与普通细菌性肺炎通常表现为下肺单一的实变影或片状浸润影相比 支原体肺炎累及上肺者或同时累及双肺者更多一些 且吸收较慢 肺部影像学表现 病原学诊断 血清特异性抗体检测传统检测方法 明胶凝集法 补体结合试验 无法区分IgG和IgM酶免疫试验或免疫荧光法 可以分别检测特异性IgG和IgM 1周出现 3周高峰 但部分反复发生肺炎支原体感染的成年患者 特异性IgM可能持续阴性血清冷凝集试验 不再做为肺炎支原体感染的诊断参考快速培养鉴定法基于核酸技术的肺炎支原体检测方法 最早采血时间应在起病后的7 10天 这样才能确定是否MP感染 血清学诊断标准 诊断 金标准 急性期及恢复期的双份血清标本中 肺炎支原体特异性抗体滴度呈4倍或4倍以上增高 均可确诊肺炎支原体感染明胶颗粒凝集试验特异性抗体滴度 l 160 或补体结合试验特异性抗体滴度 1 64 或特异性IgM阳性 也可作为诊断肺炎支原体近期感染或急性感染的依据 MP IgM阳性代表着近期感染 MP IgG阳性一般代表着既往感染 人类对Mp无先天免疫性 尚无可实际应用的有效疫苗 感染后也不能产生完全的保护性免疫Mp特异性的IgM抗体在发病后不久即可出现升高 1 4周内达到峰值 然后在几个月内逐渐下降到没有临床意义的水平 急性感染后IgM的持续时间在不同个体中差异较大 儿童的IgM反应一般强于成人 约50 的成人患者无法在Mp感染后测到IgM的升高IgG的出现时间晚于IgM 5周左右达到峰值 上升速度较慢且在体内的持续时间较长 4年左右 但在感染数月后就会下降到较低水平 有些儿童无法测得明显的IgG反应特异性IgA的免疫反应与IgM类似 但其在成年人尤其是老年人中的反应水平更高 MP的免疫性 血清学检测原理 冷凝集试验 MP感染患者血清中常含有较高滴度的寒冷红细胞凝集素 简称冷凝集素 它能与患者自身红细胞或 O 型人红细胞于0 4 条件下起凝集反应 在37 时已凝集的红细胞呈可逆性的完全散开 凝集试验与ELISA的原理比较 补体结合实验 冷凝集试验 冷凝集素是对Mp最早的体液反应 50 的病人在Mp感染第2周时的滴度可达到1 32以上 而6周内即降至感染前的水平 冷凝集试验虽然简便 快速 但它不是针对Mp的特异性试验 多种其他微生物感染 如EB病毒 巨细胞病毒 肺炎克雷伯菌 和自身免疫性疾病时冷凝集素滴度均可升高 同时 该试验的敏感性也只有50 60 对于12岁以下的儿童其敏感性则更差补体结合试验 CFT 十几年前 CFT仍是Mp血清学试验的标准方法 但越来越多的研究表明该方法的敏感性和特异性都不够高 CFT所用的抗原为Mp的氯仿 甲醇糖脂抽提物 它可与人类 细菌及植物的某些抗原表位发生交叉反应 如脑膜炎时 CFT滴度可明显升高 CFT测定的主要是IgM 对IgG不很敏感 导致其整体敏感性偏低 各血清学检测方法的特点 间接血凝试验 PHA 将提纯的Mp抗原连接到红细胞 禽类或羊 上 与血清中的抗Mp抗体可发生凝集反应 该试验的敏感性和特异性均明显优于CFT PHA不能区分抗体的类型 因此单份测定出现低滴度的抗体阳性结果并不能确定是既往感染还是新近感染 明胶颗粒凝集试验 PA 其原理与间接血凝试验基本相同 只是用人工合成的明胶颗粒取代了红细胞作为凝集试验的载体 从而使结果判定更清晰 静置稳定性更好 非特异性反应大大减少 检测的敏感性也有了进一步提高 对IgM和IgA更敏感 酶联免疫吸附试验 ELISA 是目前Mp血清学试验中常用的方法 可分开检测IgM IgG和IgA 敏感性和特异性均能达到较高的水平 虽然单次测定IgM 或IgA 阳性即可基本判定为Mp的新近感染 但阴性时却无法排除感染的可能性 IgG一般须进行间隔2周以上的双份血清测定 有4倍以上滴度上升时才能做出Mp新近感染的诊断 因此 在ELISA测定中应强调同时检测IgG和IgM 或IgA 且最好能对间隔2周以上的双份配对血清进行抗体转化情况的测定 从而做出明确的诊断其它方法 间接免疫荧光试验 IFA 乳胶凝集试验 LA 免疫印迹测定 WB 黏附抑制试验 放射免疫沉淀试验 补体介导的杀伤试验等 其他病原学检测方法 PCR 单克隆抗体法等检测分泌物中抗原及DNA 敏感性 特异性高 可用于早期诊断 但操作复杂 同位素 假阳性的问题限制了推广和使用 PCR实验条件要求严格 只限于实验研究 MP的分离培养和鉴定是支原体检测的金标准 MP对培养条件要求苛刻 生长缓慢 一般为7 10天 作出判定需3 4周 利用肺炎支原体生长过程中分解葡萄糖并产酸的特点设计了快速培养鉴定方法 通过观察培养基颜色的变化来早期发现肺炎支原体的生长 谢谢