生物实验室常用试剂的配制.ppt

生物实验室常用试剂的配制一 检验酸碱性的试剂1 酚酞试液取0 1酚酞 溶解在100mL60 90 的乙醇溶液里 装在试剂瓶内密闭保存 酚酞试液在碱性溶液中呈红色 2 麝香草酚酞 百里酚酞 试液把0 1g白色的麝香草酚酞溶解在100mL90 乙醇里制得 当pH值由9 4 10 6时 颜色为无色至蓝色 3 溴甲酚紫指示剂将0 1g溴甲酚溶于9 25mL的0 02mol L氢氧化钠溶液中 加蒸馏水稀释至250mL制得 当pH值由6 2 6 8时 颜色由淡黄色变为淡紫色 变色点在pH6 7 二 定性鉴定某些物质的试剂1 鉴定葡萄糖的试剂 1 班氏 Benedict 试剂a 在600mL蒸馏水中溶解173g柠檬酸钠和100g无水碳酸钠 冷却后稀释到850mL b 在100mL热蒸馏水中溶解17 4g无水硫酸铜 冷却后稀释到150mL 把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠 碳酸钠溶液中 边加边搅拌 如产生沉淀 要过滤 班氏试剂配制后能长期使用 如存放较久而产生沉淀时 可取上层清液使用 不必重配 2 裴林氏 Fehling sSolution 试剂a 取35g硫酸铜溶解在400mL蒸馏水里 加蒸馏水到500mL b 取85g氢氧化钾 或70g氢氧化钠 和175g酒石酸钾钠 溶解在400mL蒸馏水里 加水馏水到500mL 上述两种溶液耍分别保存 使用时再等量地混和并搅拌 如溶液里有葡萄糖 加等量裴林试剂 煮沸 会产生红色的氧化亚铜沉淀 2 鉴定淀粉用的碘液取2g碘化钾 溶解在10mL蒸馏水中 再加1g碘 待溶解后用蒸馏水稀释到300mL 即成碘液 溶液在光亮处容易变成氢碘酸 须保存在棕色玻瓶里 因为I2 不易溶于水 当加入KI后可大大增加I2的溶解度 3 鉴定蛋白质用的双缩脲试剂分别配制10 氢氧化钠溶液和1 硫酸铜溶液 待用 在3毫升待测液中加入1mL10 氢氧化钠溶液和1滴1 硫酸铜溶液 如果有蛋白质 会出现紫色反应 4 鉴定脂肪的试剂苏丹IV溶液的配制 取0 2g苏丹IV 放入无水乙醇中 加热 使它充分溶解 成为饱和乙醇溶液 过滤后倒迸试剂瓶内密闭保存备用 苏丹 溶液的配制 0 1g苏丹 粉末加入95 乙醇100mL待全部溶解后便可使用 5 鉴定DNA的二苯胺试剂A液 1 5g二苯胺溶于1OOmL冰醋酸中 再加1 5mL浓硫酸用棕色瓶保存B液 体积分数为0 2 的乙醛溶液 实验前 将0 1mL的B液加入到10mL的A液中 现配现用 6 鉴定二氧化碳的试剂 1 石灰水取饱和石灰水澄清液 密闭瓶内备用 2 氢氧化钡 Ba OH 2 在蒸馏水中加氧化钡 氢氧化钡遇到二氧化碳 也会生成碳酸钡白色沉淀 使溶液浑浊 3 溴代麝香草酚蓝溶液取0 1溴代麝香草酚蓝 溶解在100mL蒸馏水里 滴入少量0 1 氢氧化钾溶液 使它成为碱性溶液而呈蓝色 本溶液pH值变化范围是6 0 黄 至7 6 蓝 待测物中如有二氧化碳 会形成碳酸而使溶液变成黄色 三 分离液1 用于分离肌纤维的试剂 1 马克凯郎 MaecalIum 氏液也叫硝酸甘油溶液 取1份浓硝酸 2份甘油 2份水混合制得 适于分离横纹肌和心肌组织 2 30 氢氧化钾溶液或30 氢氧化钠溶液肌肉小块浸泡时间0 5一1小时 2 用于分离神经细胞的试剂 1 甲醛 生理盐水溶液称取58 44g氯化钠 用蒸馏水溶解 再稀释到1000mL加入2g40 甲醛溶液 可得甲醛 生理盐水溶液 这种溶液也是很好的上皮细胞分离液 既分离迅速 又能保护纤细的上皮细胞纤毛 在上述溶液里 分离小肠和气管上皮组织需2小时 口腔和皮肤上皮组织需3天 2 硼酸 生理盐水溶液在0 75 生埋盐水中加入硼酸 使成为饱和溶液 可用来分离脊髓灰质或脑灰质部位的神经组织 3 用于分离神经纤维的试剂硝酸银溶液 取0 5G硝酸银 溶解在100mL水中即成 4 用于分离植物根尖细胞的试剂 1 盐酸乙醇溶液在1份95 乙醇中徐徐加入1份浓盐酸 即成盐酸乙醇溶液 密闭保存 2 4 盐酸溶液 5 用于细胞质壁分离的试剂 1 30 蔗糖液 2 5 氯化钠溶液 3 5 硝酸钾溶液 4 24 尿素溶液 5 1mol L氯化钙溶液 四 染色剂有些动植物组织和大多数细胞及细胞器是无色透明的 必须经染色剂染色 才能在显微镜下观察清楚 常用染色剂的制法和适用范围见 122表 五 干燥剂干燥剂对游离水往往具有化学结合的作用 物理吸附作用或两种作用兼有 选用干燥剂应注意其本身和被干燥的物质有无化学作用 以免引起被干燥物质的破坏或吸收 常用干燥有 1 氧化钙 cao 白色固体 碱性氧化物 可干燥氧 氨 氨 胺等气体 不可用来干燥酸性气体 如二氧化碳 氯化氢 硫化氢 2 碱石灰白色固体 呈碱性 它由氧化钙粉末加入氢氧化钠溶液 经充分混和后置铁皿中于200 250 下干燥而成 可以干燥氨 胺等气体 常用于避免水或二氧化碳进入反应系统的装置中 3 硅胶半透明 内表面很大的多孔性固体 对水有强烈的吸附作用 可干燥氧 氮 氨 胺等气体 常用于干燥器中 含有钴盐的硅胶 叫变色硅胶 干燥时呈蓝色 吸水后呈粉红色 硅胶吸附水后可以在120 烘干再用 其他的干燥剂还有五氧化二磷 氯化钙 硫酸钙 氧化铝 氧化钡 硫酸镁 硫酸钠 碳酸钾和高氯酸镁等 六 生理盐水1 各类动物实验常用的生理盐水两栖类生理盐水是0 65 的氯化钠溶液 鸟类是0 75 的 哺乳类和人是0 9 2 任氏 Ringer s 生理盐水先把6 5g氯化钠 0 14g氯化钾 0 2g碳酸氢钠和0 01g磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中 混和后用蒸馏水稀释到980mL 取0 12g氯化钙溶解在20mL的蒸馏水中 把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液中 边滴边搅拌 以免产生不溶性的磷酸钙沉淀 常用于变温动物 如两栖类 3 乐氏 Locke s 生理盐水先把9g氯化钠 0 42g氯化钾 0 1 0 3g碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解 混和后加蒸馏水到980mL 再取0 24g氯化钙溶解在20mL蒸馏水中 逐滴加入上述溶液中 常用于恒温动物 如哺乳类 七 固定液和保存液固定液能把有生命的材料迅速杀死 并尽可能保持它原有的形态和结构 具有防腐和保存和作用 1 甲醛也叫福尔马林液 Fomalin 固定材料常用5 甲醛溶液 保存生物标本常用4一5 的 消毒常用3 的 市售的是40 甲醛溶液 加7 9 12倍水分别稀释成5 4 3 甲醛 溶液 甲醛溶液无色透明 有刺激性气味 味灼烈 是良好的动 植物材料固定液 有强烈的杀菌能力 穿透力大 仅次于乙酸 防腐性强 固定速度快 效果好 缺点是固定后可使材料少许膨胀 有浓度过高 能使材料发硬发脆 因此对于精细的解剖标本 最好用甲醛与甘油 乙醇 石炭酸等混和使用 2 乙醇 C2H5OH 有强烈的杀菌作用 渗透力较大 但固定效果不及甲醛溶液 可使蛋白质凝固 并有较强的脱水作用 因此 单纯用乙醇固定的材料会产生硬化和收缩 而使体积变小 对含水量多的材料 固定应从低浓度开始 逐步转入高浓度 从经济和效果来考虑 乙醇宜与甲醛等固定液混和使用 常用的乙醇固定液或保存液浓度都是70 左右 3 乙酸带有刺激味的无色液体 纯乙酸在16 7 以下凝固 故名冰乙酸 乙酸固定液的常用浓度是0 3 0 5 乙酸能凝固细胞核内的蛋白质 核蛋白 对染色质或染色体的固定 染色较好 用乙酸溶液固定材料 可使细胞膨胀和防止收缩 组织也不会硬化 它常跟乙醇 甲醛 铬酸等易引起硬变的收缩的液体组成混合固定液 效果较好 4 乙酸 乙醇溶液由冰乙酸1份与纯乙醇3份混和而成 适用于动 植物组织和细胞核内DNA的测定 动物的组织固定需1 5 3小时后 即移入纯乙醇中15分钟 再透明 根尖固定需15分钟 花药固定需1小时 八 脱水剂材料中含有水分 就会降低透明度 脱水剂有利于材料透明 也有利于材料的永久保存 脱水剂的种类很多 如乙醇 丙酮 甘油 正丁醇和叔丁醇等 中学生物实验最常用的乙醇 而甘油则常用于菌类和藻类等 在用乙醇脱水时 为了避免材料萎缩 僵硬 应从低到高使用不同的浓度 逐渐脱水 有时还用无水乙醇脱水 一般组织 除神经组织 柔软组织外 可从70 乙醇开始经80 95 100 乙醇 使它逐步脱水 对一些柔软组织如胚胎组织 低等无脊椎动物组织 要从50 或30 或20 乙醇开始 否则组织收缩较严重 九 透明剂材料经脱水后 须经透明剂透明 方能浸蜡包埋或在树胶中封藏 其目的在于使组织中的乙醇或丙酮被透明剂所替代 使石蜡能很顺利进进入组织和增强组织的折光系数 便于显微镜的观察 并能和封藏剂混和进行封藏 透明剂的种 类很多 常用的有二甲苯 甲苯 苯 氯仿和香柏油 如二甲苯是应用最广的廉价透明剂 易溶于乙醇又能溶解石蜡 能与封减剂树胶混和 但不能和水混合 透明力强 作用较快 用二甲苯透明时 先经纯乙醇和二甲苯等量混合浸1 2h 以置换材料中的乙醇 冉置于纯二甲苯中透明 全部时间不宜超过3h 如是染色后的制片 在二甲苯中经过5 10min即可透明 十 封藏剂材料经脱水 透明或染色后 须经封藏才能长期保存 1 加拿大树胶半透明的固体树脂 溶于二甲苯或苯里 用以封片透明度很好 干后坚硬牢固 可长期保存 2 甘油临时封片常用的封藏剂 材料先用10 的甘油浸润数日 待水分蒸发 浓缩成纯甘油时 再加盖玻片 3 松香取纯松香将其磨碎 放入烧杯内 置于80 100 处加热1 2h后 待松香熔解时其中挥发性杂质和气泡外逸 加入约为松香重量一半的二甲苯 搅拌均匀即成松香封藏剂 本品原料易得 效果与加拿大树胶相同 缺点是材料不纯或调制不好时 易发生结晶和褪色 十一 消毒剂优良的消毒剂应具有杀菌力强 性质稳定 易于溶解和穿透力大的特性 此外还要求对人和动物组织的毒性低 对器具衣服没有腐蚀性 且价格低廉 1 乙醇它可使蛋白质脱水和变性 故有消毒和防腐的作用 70 乙醇的杀菌力最强 可在3 5mim内杀死细菌 且对人毒性小 适用于皮肤及器械等消毒 95 100 乙醇能引起菌体表层蛋白质凝固 形成保护层 使乙醇分子不易继续透入 杀菌能力反而减弱 2 碘酒它是碘和碘化钾的乙醇溶液 有稀碘酒和浓碘酒两种 市售的是2 的稀碘酒 在10min内能杀死细菌及芽抱 可用于消毒皮肤 但对皮肤的刺激性很大 故用后应以70 乙醇拭净 浓碘酒多用于手术后创面消毒 自配碘酒时 可取5g碘化钾和7g碘溶解在5mL蒸馏水中 再加无水乙醇到1OOmL 3 高锰酸钾强氧化剂 遇到有机物即放出新生态氧而使有机物氧化 其杀菌作用强于过氧化氢 高浓度时有刺激及腐蚀作用 0 1 水溶液可作创口或粘膜洗涤剂 使皮肤消毒 2 5 水溶液能在24h内杀死细菌芽孢 本液在空气中易分解 失去氧 化能力 要现配现用 4 甲醛溶液它常用来杀灭细菌 病毒 通常以2 5 溶液消毒器具 本品又可作实验室熏蒸消毒 5 漂白粉本品含有效氯为25 30 有强杀菌力 能消毒 防腐 防臭和溶解坏死组织 但作用时间短 十二 麻醉剂它可分挥发性 如乙醚 和非挥发性 如氨基甲酸乙酷 两类 前者作用时间短麻醉深度容易掌握 动物麻醉后也容易苏醒 后者作用的时间比较长 用法简单 但麻醉后苏醒较慢 不大容易掌握麻醉的深浅程度 在中学生物实验申 使用较多的是乙醚和氨基甲酸乙酷两种 1 乙醚无色液体 味灼烈 有强挥发性和易燃性 乙醚能使中枢神经系统发生暂时性机能麻痹 乙醚吸入法是最常用的麻醉方法 2 氨基甲酸乙脂它是无色的柱状结晶或白色颗粒粉末 其水溶液是比较温和的麻醉药 安全度大 多数实验动物都可使用 更适用于小动物 作为麻醉剂 氨基甲酸乙脂常配成20 水溶液注射入动物体内 剂量是 狗 猫 兔直肠灌注1 5g g体重 皮下静脉或腹腔注射0 75 1g Kg体重 蛙类2g Kg体重 由背部淋巴囊注射 作静脉注射时必须溶在生理盐水 哺乳类用8 5 9 0 中 配成10 的溶液 每Kg体重注射10mL 十三 防腐剂防腐剂多用于剥制标本 现将其中的防腐剂分述如下 如最简单的无毒防腐剂是用硼酸粉130g 明矾粉60g和樟脑粉60g 三种粉末混和后撤在动物皮内 效果一般 但使用安全 十四 密封剂它常用来封标本瓶口 1 石蜡取石蜡 熔点52 1份 松香1份 甘油数滴 溶化后趁热使用 2 赛潞咯取赛潞咯 如碎 废乒乓球剪碎后 浸入在乙醚 丙酮或氯仿等有机溶剂中加盖后静置二三天 等溶化成糊状时 涂在瓶口和瓶塞外面 形成不透气的薄膜 十五 培养液和培养基1 植物无土栽培完全培养液配方 1 配方一 称取硝酸钙0 812g 硝酸钾0 506g 磷酸二氢钾0 136g 硫酸镁0 120g 酒石酸铁0 005g 把这些盐类溶解在少量水里 稀释到1000mL 2 配方二 称取1g硝酸钙 0 25g磷酸二氢钾 0 25g硫酸镁和0 25g硝酸钾 把这些盐类先分别用少量水溶解 然后混和在一起用水稀释到1000mL最后加1滴1氯化铁溶液 2 配制缺氮 缺磷和缺钾的不完全营养液 1 缺氮培养液 硫酸钙0 52g 磷酸二氢钾0 25g 硫酸镁0 25g 氯化钾0 08g 氯化铁微量 2 缺磷培养液 硫酸钙0 5g 硝酸铵0 16g 硝酸镁0 25g 硝酸钾0 20g 氯化铁微量 3 缺钾培养液 硫酸钙0 34g 硝酸铵0 24g 硫酸镁0 25g 磷酸氢钙0 17g 氯化铁微量 以上3种不完全营养液都用水稀释到1000mL 2 土壤浸出液把肥沃的土壤放在等量清水申 用玻璃棒充分搅拌后静置 使土壤沉淀 取上清液用滤纸过滤即得 3 牛肉膏蛋白胨培养基 用于细菌培养 牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl5g 琼脂15g 水1000mL PH7 4 7 6 4 高氏1号培养基 放线菌培养 可溶性淀粉20g kno31g NaCl0 5g K2HP04 3H2O0 5g MgS04 7H2O0 5g FeS04 7H2O0 01 水1000mL pH7 4一7 6 配制时注意 可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中 5 马丁氏 Martin 培养基 用于从土壤中分离真菌 K2HPO41g MgS04 7H2O0 5g 蛋白陈5g 葡萄糖10g 1 30000孟加拉红水溶液100mL 水900mL 自然pH 121 湿热灭菌30min 待培养基融化后冷却至55 60 时加入链霉素 含量30 g mL 6 马铃薯培养基 PDA 用于霉菌或酵母菌培养 马铃薯 去皮 200g 蔗糖 或葡萄糖 20g 琼脂15 20g 水1000mL PH值自然 配制万法如下 马铃薯去皮 切成小块 煮沸30min 然后用双层纱布过滤 取其滤液加糖及琼脂溶化后再补足水至 1000mL 霉菌用蔗糖 酵母菌用葡萄糖 7 乳酸菌培养基 用于乳酸发酵 肉膏5g 酵母膏5g 蛋白胨10g 葡萄糖10g 乳糖5g NaCl5g 水1000mL pH6 8 12l 湿热灭菌20min8 酒精发酵培养基 用于酒精发酵 蔗糖10g MgSO4 7H2O0 5g NH4NO30 5g 20 豆芽汁2mL KH2PO40 5g 水100mL 自然pH 9 无氮琼脂培养基 用于从土壤中分离自生固氮菌 葡萄糖 或蔗糖 10g 磷酸氢二钾0 2g 氯化钠0 2g 硫酸镁0 2g 硫酸钾0 2g 碳酸钙5 0g 琼脂20g 蒸馏水1000mL10 花粉萌发培养基蔗糖10g 硼酸lmg 琼脂0 5g 水90mL 放入烧杯中 在100 水浴中溶化 冷却后加水至100mL备用