2019-2020年高中生物人教版选修1教学案：专题二 课题1 微生物的实验室培养(含答案).doc

2019-2020年高中生物人教版选修1教学案：专题二 课题1 微生物的实验室培养(含答案)1培养基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质。2消毒的目的是杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，灭菌则是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。3实验室常用煮沸消毒法、巴氏消毒法和使用紫外线或化学药剂进行消毒，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等。4固体培养基的配制过程为：计算称量溶化灭菌倒平板。5微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。6长期保存菌种可以采用甘油管藏法。一、培养基1.概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。2.种类：(按物理性质分) 液体培养基固体培养基3.营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 二、无菌技术1.获取纯净培养物的方法获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下：(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。2消毒和灭菌(1)概念：填表比较项目理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和物体表面或内部的部分微生物不能灭菌强烈物体内外所有的微生物能(2)常用方法：连线三、大肠杆菌的纯化培养1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算称量溶化灭菌倒平板。2.纯化大肠杆菌(1)纯化原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 (2)接种方法：平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。(3)培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37_恒温箱中，培养，12 h和24 h后，分别观察、记录。四、菌种的保存连线1不同培养基的具体配方不同，但一般都含()A碳源、磷酸盐和维生素B氮源和维生素C水、碳源、氮源和无机盐D碳元素、氧元素、氢元素、氮元素解析：选C培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机 盐，此外还应考虑pH、特殊营养物质及O2等条件。2获得纯净培养物的关键是()A将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌B接种纯种细菌C.适宜环境条件下培养D防止外来杂菌的入侵解析：选D获得纯净培养物的关键是防止外来微生物 的污染。3下列关于消毒和灭菌方法的选择，对应错误的是()A培养基高压蒸汽灭菌B牛奶煮沸消毒C接种环灼烧灭菌D实验者双手化学消毒解析：选B对牛奶应采用巴氏消毒法进行消毒。4制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是()A计算、称量、倒平板、溶化、灭菌B计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C计算、称量、溶化、灭菌、倒平板D计算、称量、灭菌、溶化、倒平板解析：选C制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，应先根据需 要计算各成分用量，然后称量、溶化、灭菌、倒平板。5下列有关稀释涂布平板法的叙述，错误的是()A首先将菌悬液进行一系列的梯度稀释B然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C在适宜条件下培养D结果都可在培养基表面形成单个的菌落解析：选D稀释涂布平板法是将菌悬液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。只有在稀释度足够高的菌悬液里，聚集在一起的微生物才能被分散成 单个细胞，从而在培养基表面形成单个的菌落。1培养基配制的原则(1)目的要明确：不同的微生物需求不同，根据培养目的进行配制。(2)营养要协调：营养物质的浓度和比例要适宜。营养物质浓度过低不能满足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用。(3)pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同，如细菌的适宜pH约为6.57.5、放线菌的适宜pH约为7.58.5、真菌的适宜pH约为5.06.0。为维持pH的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，常用的缓冲剂是磷酸氢二钾磷酸二氢钾。2培养基的成分营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供碳元素的物质构成生物体细胞的物质和一些代谢产物，有些也是异养生物的能源物质无机碳源：CO2、NaHCO3等；有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源凡能提供氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机氮源：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的微量有机物是酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定培养基、空气、代谢产物无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素和微量元素是细胞的组成成分、生理调节物质、某些化能自养菌的能源，酶的激活剂等无机化合物名师点拨几种微生物的营养和能量来源微生物碳源氮源能源蓝藻CO2NH、NO等光能硝化细菌CO2NH3NH3的氧化根瘤菌糖类等有机物N2有机物大肠杆菌糖类、蛋白质等有机物蛋白质等有机物3几种常用灭菌和消毒方法的比较灭菌和消毒种类主要方法应用范围灼烧灭菌酒精灯火焰灼烧微生物接种工具，如接种环、接种针或其他金属用具等，接种过程中的试管口或瓶口等干热灭菌干热灭菌箱160170 加热12 h玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等凡不适宜用其他方法灭菌而又能耐高温的物品高压蒸汽灭菌100 kPa、121 维持1530 min培养基及多种器材、物品煮沸消毒法100 煮沸56 min家庭餐具等生活用品的消毒巴氏消毒法7075 煮30 min或80 煮15 min牛奶、啤酒、果酒和酱油等不宜进行高温灭菌的液体紫外线消毒30 W紫外灯照射30 min接种室、接种箱、超净工作台化学药物消毒用体积分数为70%75%的酒精、碘酒涂抹，来苏尔喷洒等用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒和空气、手术器械、塑料或玻璃器皿等的消毒题组冲关1下列关于微生物营养物质的描述，正确的是()A同一种物质不可能既作碳源又作氮源B除水以外的无机物仅提供无机盐C凡是碳源都能提供能量D无机氮源也能提供能量解析：选D对同一种物质来说，含C、H、O、N四种元素的化合物既是碳源，又是氮源，如蛋白胨。除水以外的无机物种类繁多，对不同的微生物起的作用可能不同，如 CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量；NaHCO3 可作为自养型微生物的碳源。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用于化能合成作用的能量。2下列对灭菌和消毒的理解，不正确的是()A灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子B消毒和灭菌实质上是完全相同的C接种环用灼烧法灭菌D常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法解析：选B消毒是使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部一部分微生物，不包括芽孢和孢子。灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。1操作步骤2.倒平板操作的注意事项(1)培养基要冷却到50 左右时开始倒平板。温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。(2)要使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。(3)倒平板时，要用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。(4)平板冷凝后，要将平板倒置。因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，培养基表面的温度也较高，平板倒置后，既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(5)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，那么这个平板不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。(6)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。题组冲关3下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C加热溶化琼脂时应不断用玻璃棒搅拌D待培养基冷却至50 左右时倒平板解析：选A制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。在溶化时，加入琼脂后应不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。待培养基冷却至50 左右，并且培养基处于溶化状态时开始倒平板。4下列有关倒平板操作的叙述，错误的是()A将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置解析：选C整个倒平板过程要防止外来杂菌的入侵，因此灭过菌的培养皿应放在火焰旁，打开的锥形瓶瓶口应迅速通过火焰，培养皿应打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不能将培养皿盖完全打开，等待平板冷却凝固后需要倒过来放置。1平板划线法(1)操作步骤(2)注意事项第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样才能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。(3)平板划线操作中几次灼烧接种环的目的项目第一次划线前灼烧每次划线前灼烧划线结束灼烧目的避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种均来自上次划线的末端杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者2稀释涂布平板法(1)操作步骤系列稀释操作：a将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按101106的顺序编号。b用移液管吸取1 mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀。c从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复b步的混匀操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。涂布平板操作：(2)注意事项每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离酒精灯火焰12 cm处。涂布器用体积分数为70%酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体。 名师点拨平板划线法和稀释涂布平板法的比较(1)单细胞菌落的获得： 利用平板划线法接种时，单细胞菌落从后划线的区域挑取；利用稀释涂布平板法接种时，只有合适的稀释度才能得到单细胞菌落。 (2)两种接种方法的应用： 两种方法都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单细胞菌落，达到分离纯化微生物的目的；稀释涂布平板法还能对微生物进行计数，而平板划线法不能用于微生物的计数。 3.实验结果分析与评价(1)未接种的培养基表面若有菌落生长，说明培养基被污染；若无，则说明未被污染。(2)在接种大肠杆菌的培养基上可观察到独立的菌落。有光滑型菌落，菌落边缘整齐，表面有光泽，湿润、光滑、呈灰色；也有粗糙型菌落，菌落扁平，干涩、边缘不整齐；还有黏液型菌落，为含荚膜菌的菌落。(3)培养12 h和24 h，菌落大小不同，培养24 h，菌落大，灰色深，光泽度强。(4)若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液不纯、混入其他杂菌或在实验操作过程中被杂菌污染。题组冲关5下列关于平板划线操作的叙述，正确的是()A使用已灭菌的接种环、培养皿，在操作过程中不需要再灭菌B打开含菌种的试管，需通过酒精灯火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可D最后将平板倒置，放在培养箱中培养解析：选D在平板划线时，已灭过菌的接种环在每次划线后，必须用灼烧灭菌法灭菌，以杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种；盛有菌种的试管在打开或重新塞棉塞前，都需将试管口通过酒精灯火焰灼烧灭菌；在平板内划三至五条平行线后应盖上皿盖，并灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域划线，并按此操作继续往三、四、五区域划线；接种完成后，需将平板倒置放入培养箱，以防培养皿皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。6下列关于微生物接种的描述，正确的是()A平板划线法只用于固体培养基的接种，而稀释涂布平板法只用于液体培养基的接种B平板划线法不能用于微生物的计数，而稀释涂布平板法可用于微生物的计数C利用平板划线法不能得到单菌落，而利用稀释涂布平板法能得到单菌落D平板划线法所用的接种工具不需要灭菌，而稀释涂布平板法所用的接种工具需要灭菌解析：选B这两种接种方法都可用于固体培养基的接种，都能用于形成单菌落，接种工具都要进行严格灭菌处理。 随堂基础巩固1下列关于培养基的说法，正确的是()A任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例解析：选D不同微生物对营养物质的需求不同，如自养 微生物的培养基不需要加碳源，自生固氮菌的培养基不 需要加氮源。按不同的分类标准，培养基可有不同的种 类和作用，其中固体培养基是在液体培养基里加入琼脂 等凝固剂配制而成的。配制培养基时要注意各种养分的 浓度和比例。2下列操作与消毒灭菌无关的是()A接种前用酒精灯火焰灼烧接种环B接种前用酒精擦拭双手C将平板倒置，放入培养箱中培养D接种在酒精灯的火焰旁完成解析：选C接种用具、器皿、空气中都存在大量微生物，必须严格地消毒灭菌。A、B、D三项都是实验操作过程 中消毒或灭菌的措施。将平板倒置，放入培养箱中培养与灭菌无关。3采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌()A接种环、吸管、培养基、接种室B吸管、接种环、培养基、接种箱C培养基、吸管、接种环、接种箱D培养皿、吸管、培养基、双手解析：选B干热灭菌是将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160170 下加热12 h，适用于耐高温且需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等；灼烧灭菌是利用酒精灯火焰的充分燃烧层灭菌，如接种针、接种环等；高压蒸汽灭菌用高压蒸汽灭菌锅，一般在压力为100 kPa，温度为121 的条件下，维持1530 min，主要用于培养基灭菌；紫外线照射适用于物体表面灭菌和空气灭菌，如接种室、接种箱、超净工作台等，使用前用紫外线照射约30 min。4不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述，不正确的是()A氮源物质为该微生物提供必要的氮元素B碳源物质也是该微生物的能源物质C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D水是该微生物的营养要素之一解析：选B由题干以CO2为唯一碳源可知，该微生物可以利用CO2合成有机物，CO2不能为微生物提供能量，其能源来自于光能或氧化无机物释放出的化学能。5将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 恒温箱的目的是()A对比观察培养基有没有被微生物利用B对比分析培养基是否被杂菌污染C没必要放入未接种的培养基D为了下次接种时再使用解析：选B对未接种的培养基进行培养，起到对照作用，可确定培养基是否被杂菌污染。6下列有关平板划线操作的描述，不正确的是()A将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红B接种环在平板上划线的位置是随机的C在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰D最后一区的划线不能与第一区相连解析：选B将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红；接种环在平板上划线的位置不是随机的；在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰；最后 一区的划线不能与第一区相连。7下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：(1)图甲是利用_法进行微生物接种，图乙是利用_法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是_和_；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是_和酒精消毒。(2)平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少，每次划线都要从_开始，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线_。(3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？ _。(4)下图是接种后培养的效果图解，其接种方法是_(填“图甲”或“图乙”)。(5)假设用图乙所示方法接种培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？_。解析：(1)图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物接种，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。(2)平板划线时，每次划线前都要从上一次划线的末端开始，最后一次划线不能与第一次划线相连。(3)由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。(4)培养基上的菌落分布均匀，接种方法为稀释涂布平板法。(5)采用稀释涂布平板法进行菌种分离时，稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。答案：(1)平板划线稀释涂布平板接种环涂布器灼烧灭菌(2)上一次划线的末端相连(或相接、相交、交叉等)(3)火焰附近存在着无菌区域(4)图乙(5)稀释倍数不够，菌液的浓度太高课时跟踪检测一、选择题1下列对常用的无菌操作的描述，错误的是()A无菌操作的目的是防止杂菌污染B对操作者进行消毒的方法是用酒精擦拭双手C实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行D玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭进行灭菌解析：选D无菌技术的主要目的是防止培养物被其他外来微生物污染。对操作者应用较温和的方法进行消毒。实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行，防止瓶口空气中的微生物污染培养基。对无菌操作用到的玻璃器皿要用干热灭菌法灭菌。2培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是() 化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线消毒 高压蒸汽灭菌巴氏消毒ABC D解析：选A培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底地灭菌的效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；为不破坏牛奶中的营养成分，可采用巴氏消毒。3(江苏高考)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是()A高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上解析：选D在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，待压力表的压力降到零时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子。倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边。接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后，再用其挑取菌落。在微生物的培养中，一般在皿底上用记号笔做标记。4下列有关平板划线法操作的叙述，不正确的是()A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种C在每一区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细胞污染环境和感染操作者解析：选C在用平板划线法分离大肠杆菌的实验中，接种环取菌种前灼烧的目的是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种；划线结束后仍需灼烧接种环，是为了避免细菌污染环境和感染操作者。从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。5为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是()A对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C临时保藏菌种容易被污染或产生变异D对于需要长期保存的菌种，可以采用低温4 保藏的方法解析：选D对于需要长期保存的菌种，可采用甘油管藏法，即在3 mL甘油瓶中加入1 mL甘油后灭菌，将1 mL 培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20 的冷冻箱中保存。6用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时() 可以用相同的培养基都需要使用接种针进行接种 都需要在酒精灯火焰旁进行接种都可以用来计数活菌A BC D解析：选C平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基；平板划线法采用接种针或接种环进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作；进行接种操作时，要进行无菌操作，需要在酒精灯火焰旁接种，避免空气中的微生物污染培养基；平板划线法一般用于分离菌体而不能计数活菌。7下表是对四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，正确的是()选项项目硝化细菌乳酸菌根瘤菌衣藻A能源NH3乳酸N2光能B碳源CO2糖类等糖类等CO2C氮源NH3N2N2NOD代谢类型自养需氧型异养厌氧型自养需氧型自养需氧型解析：选B从能源来看，硝化细菌的能源是氧化氨气为硝酸盐过程释放的能量，乳酸菌和根瘤菌需糖类等有机物供能；从氮源看，乳酸菌需要NH、NO；从代谢类型看，根瘤菌为异养需氧型；从碳源看，硝化细菌与衣藻需CO2，乳酸菌和根瘤菌需要糖类等有机物。8下面是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5。下列叙述正确的是()A在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌B划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上C接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的D第1区和第5区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数解析：选C在每次划线前后都要对接种环进行灭菌；进行划线操作时，左手将培养皿的皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行 线，盖上皿盖；注意接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的；第1区和第5区的划线不能相连。9平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，下列描述正确的是()A都要将菌液进行一系列的梯度稀释B平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作C稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养D都可在培养基表面形成单个的菌落解析：选D平板划线法不需要进行梯度稀释，稀释涂布平板法需要将不同稀释度的菌液涂布到固体培养基的表面。平板划线法和稀释涂布平板法都可在培养基表面形成单菌落。10某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理，下列叙述正确的是()A培养基分装到培养皿后进行灭菌B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D培养过程中每隔一周观察一次解析：选B在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板；转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌，杀灭接种环上残留的菌种，再进行划线；接种后的培养皿应放置在恒温培养箱中培养；微生物生长、繁殖较快，在培养过程中一般要隔天观察一次。二、非选择题11在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。实验基本步骤如下：请回答下列有关问题：(1)配制培养基时，各成分含量确定的原则是_。不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是_。(2)倒平板的适宜温度是50左右，原因是_。待平板冷凝后，要将平板倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止_。(3)纯化菌株时，若使用稀释涂布平板法进行接种，应选择的涂布工具是图中的_；若使用平板划线法进行接种，应选择的接种工具是图中的_。(4)划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_。(5)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。解析：培养基中各成分含量要根据微生物的生长需要来确定。微生物生长需要一定的pH，所以培养基装瓶前需要调节pH。由图可知，A为接种环，B为涂布器，C为胶头滴管，D为接种针，故稀释平板法应选择的涂布工具应是B，平板划线法应选择的接种工具是A。由题意分析可知，造成此现象的原因可能有两个：一是接种环灼烧后未冷却，菌种接触到高温的接种环而死亡；二是划第二划线区域第一条线时未从第一区域末端开始。有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，因此，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。答案：(1)所培养微生物对各营养成分的需要量调整pH(2)温度过高会烫手，过低培养基又会凝固皿盖上的水珠落入培养基，造成污染(3)BA(4)接种环灼烧后未冷却划线未从第一区域末端开始(5)灭菌12下表是培养某微生物的培养基的配方，请回答下列问题：试剂牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂加水定容至用量5 g10 g5 g20 g1 000 mL(1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、_和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是_。培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行_处理。(2)在配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。(3)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行_(填“消毒”或“灭菌”)；操作者的双手需进行清洗和_；空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质_，还能损伤DNA的结构。(4)分离纯化微生物最常使用的接种方法是_和_。(5)在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。解析：(1)培养基中都应含有水、无机盐、碳源、氮源。培养基配制完成后要调pH和灭菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作为有机碳源。(2)配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。(3)灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，所以要对培养基和培养皿进行灭菌。消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物，故操作者的双手需要进行清洗和消毒。紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构。(4)分离纯化微生物常采用平板划线法和稀释涂布平板法。(5)培养微生物时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。答案：(1)氮源牛肉膏和蛋白胨灭菌(2)温度酸碱度(3)灭菌消毒变性(4)平板划线法稀释涂布平板法(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生13请回答下列有关微生物培养与分离的问题：(1)微生物的培养都需要培养基，在配制固体培养基时加入的凝固剂一般是_。(2)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般流程包括：上述流程中A代表_，实验室中这个步骤常用的方法有_；流程中B代表_，该步骤进行的适宜温度是_左右。(3)某微生物纯化培养的结果如下图甲，在_(填图中编号)区域出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细菌数目是_个，据图分析，在培养基上划线接种时，划线的顺序依次是_(用编号表示)。某研究者接种培养后得到的平板如图乙所示，推测接种时可能的操作失误是_。(4)将分离纯化的菌种进行临时保存时，可在低温下使用试管斜面保存，但该方法除保存时间短外，菌种还易_；若需较长时间保存菌种，可用的方法是_。解析：(1)琼脂是制备固体培养基最常用的凝固剂。(2)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的流程包括：计算称量溶化灭菌倒平板；灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌是实验室中常用的灭菌方法。(3)从图甲可知，号区域出现了单个菌落；1个菌落由1个细菌繁殖形成；根据线条数量可判断，划线的顺序依次是。由图乙可知，菌落分布不均匀，推测接种时可能的操作失误是涂布不均匀。(4)试管斜面保存菌种，菌种易被污染或产生变异，若需较长时间保存菌种，可采用甘油管藏法。答案：(1)琼脂(2)灭菌灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌倒平板50(3)1涂布不均匀(4)被污染或产生变异甘油管藏法