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病毒感染的检查方法 与防治原则,1,.,目的与要求,了解病毒的诊断，抗病毒治疗，病毒感染的预防。,2,.,第一节 病毒感染的检查方法,3,.,病毒感染的检查,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒病毒抗原病毒核酸病毒酶类：如逆转录酶,电镜直接观察光镜检查包涵体分离培养,4,.,一、标本的采集与送检,原则基本与细菌相似，但应注意：1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检3.血清学诊断采双份血清,5,.,二、病毒的分离与鉴定,（一）病毒的分离培养细胞培养（cell culture）鸡胚接种（egg inoculation）动物接种（animal inoculation）,6,.,1.鸡胚培养 采用孵化914天的鸡胚绒毛尿囊膜痘苗病毒、人类疱疹病毒尿囊腔 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔流感病毒的初次分离卵黄囊嗜神经病毒,7,.,8,.,1、鸡胚培养,优点：易管理，不带微生物，成本较低 缺点：操作程序复杂,9,.,10,.,2.动物接种应用：尚无敏感细胞的病毒培养动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高，动物体内常带有潜伏病毒,11,.,病毒的分离培养3.细胞培养单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类悬浮细胞培养（suspended cell culture）原代细胞（primary cell） 细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）传代细胞系（continuous cell line）,12,.,病毒的细胞培养,细胞培养瓶,单层细胞,13,.,1病毒增殖鉴定(1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ）细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。,（二）病毒的鉴定,14,.,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落,15,.,麻疹病毒感染细胞,呼吸道合胞病毒感染细胞,形成多核巨细胞或称融合细胞,(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),16,.,形成包涵体(inclusion body),(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),17,.,腮腺炎病毒感染细胞,(2)红细胞吸附（hemadsorption）,病毒囊膜表面血凝素(HA) 红细胞表面HA受体,18,.,(3)干扰现象（interference）,风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),人胚肾细胞,风疹病毒？ 埃可病毒,CPE(-)风疹病毒(+)埃可病毒(-) CPE(+)风疹病毒(-)埃可病毒(+),19,.,2. 病毒数量与感染性测定,1.蚀斑形成试验（plaque formation test） 2.50组织细胞感染量（50 tissue cultureinfectious dose, TCID50）,感染性病毒量,20,.,2.病毒形态学鉴定,电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），对一般病毒检测意义不大,21,.,3.病毒血清学鉴定,用已知的抗体，鉴定病毒种、型、亚型(1)血凝抑制试验-正粘病毒型与亚型鉴定病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集（血凝抑制试验）,(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）多种病毒鉴定,22,.,三、病毒分子生物学鉴定,抗原变异病毒基因的鉴定核酸扩增核酸杂交基因芯片基因测序,23,.,四、病毒感染的血清学诊断,应用： 采取标本分离病毒为时已晚 目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒 为证实所分离的病毒的临床意义 进行血清流行病学调查等,24,.,1.中和试验（neutralizing test）,病毒中和抗体 病毒失去感染性特点：特异性高，抗体维持时间长 应用：人群免疫情况的调查临床诊断少用,25,.,五、病毒感染的快速诊断,数小时内出结果 病毒颗粒 病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（IgM）,26,.,病毒的快速诊断,光镜-包涵体,电镜,免疫荧光,ELISA,分子生物学技术,杂交,Southern blot,PCR,Northern blot,27,第二节 病毒感染的防治原则,28,.,灭活疫苗（inactivated vaccine） 活疫苗（living vaccine） 重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine） 亚单位疫苗（subunit vaccine）化学提取或人工合成疫苗重组疫苗（recombinant vaccine） 核酸疫苗（nucleic acid vaccine）,一、人工主动免疫常用生物制品,29,.,二、人工被动免疫常用生物制品,免疫球蛋白血清丙种球蛋白细胞免疫制剂IFN-、细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的杀伤细胞LAK细胞,30,.,三、病毒感染的治疗,核苷类药物非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂2.干扰素和干扰素诱生剂 3.中草药 4.基因治疗剂 5.治疗性疫苗,1.抗病毒化学制剂,反义寡核苷酸 干扰RNA 核酶（ribozyme）,31,.,核苷类药物作用机制,HSV/VZV 无环鸟苷（NA）病毒胸苷激酶 NA一磷酸宿主细胞激酶 NA三磷酸（缺乏糖环3-OH基）病毒DNA聚合酶 核酸链延伸被迫终止,32,.,
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