HPV检测目的及最佳检测方法ppt课件

HPV病毒检测的目的及最佳检测方法1、 HPV检测的目的是什么？2、 HPV检查的最佳方法检查的最佳方法 ？3、德同产品介绍2主要内容 只是 为了查有没有 HPV病毒感染？ 是 为了查 HPV感染型别，检测型别越多越好？ 是 为了发现已经存在的为了发现已经存在的 CIN2+病变病变和预和预 CIN2+ 的的风险人群？风险人群？3HPV检测的目的是什么？专家对 HPV检测是否要临床验证如何看待？HPV检测的目的是什么？1个 HIV/HBV = AIDS/HBV1个 HPV CIN或宫颈癌 （ 80-90%的女性 HPV感染是一过性的，可在 6-24个月通过自体免疫清除）高危型 HPV持续感会导致宫颈癌从 HPV感染到宫颈癌，一般需要 10 20年高分析敏感度 检测与临床无关的病毒水 平（假阳性）一过性的感染会自身清除恢复阶段：免疫响应早期感染会自身清除Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6HPV检测的目的是什么？HPV病毒含量与临床病变的关系CIN病变进展为高级病变无 CIN病变CIN转归WHO指南对于 HPVCutoff有明确推荐 检测阳性判断值6WHO guidelines for screening and treatment of precancerous lesions for cervical cancer prevention. World Health Organization 2013l 阳性判断值（ Cutoff）的设定，在 2013年的 WHO宫颈癌筛查和管理指南中是有具体建议的，其推荐高危型 HPV 检测 cut-off 值 1.0 pg/mlHPV检测的目的是什么？HPV检测的目的是什么？HPV检测的目的是什么？7n 不再是单纯的病毒检测，而是强调 “临床 ”，不再是制造商说了算，而是临床说了算n 阳性判断标准是要获得理想临床敏感度和特异度的临界值，制造商不能仅凭简单的病毒检测数据来制定，建议使用 ROC曲线的方式进行评估，这需要大量临床检测数据才能最终找到理想的临界值2015年 CFDA针对 HPV检测试剂阳性判断值的规定： 临床灵敏度特异度的 Cutoff值HPV检测的目的是什么？82015年欧洲 IPV大会：宫颈癌筛查 HPV检测目的l HPV检测不是为了检测病毒，不是一过性感染，而是检测感染病毒后的进展风险l HPV检测 需要关注临床敏感度 ，最大化的保护低风险人群，最大化的辨别高风险人群2015 IPV Conference， Mark. Stoler2016年 CSCCP会议Greater China Commerical Summit 9n HPV检测不是仅仅为了检出 HPV感染，而是为了发现已经存在的 CIN2+病变和预测CIN2+的风险；n 对于 HPV检测来说，最重要的是临床灵敏度和阴性预测值HPV检测的目的是什么？WHO / IRAC 明确检测 13种 HPVTitle, Location, Date 10n 从流行病学和致癌机制证据方面， WHO/IRAC 明确检测 13种 HPV型别：HPV16、 18、 31、 33、 35、 39、 45、 51、 52、 56、 58、 59、 68最强的致癌型别，几个致癌位点已经明确充足流行病学证据证实会导致宫颈癌缺乏宫颈癌流行病学证据，但从致癌机制上有强的证据支持2009 WHO IARC Special Report Policy A review of human carcinogens Part B2015年中国 CFDA明确 HPV检测型范围11高危型 13种 ： HPV16、 18、 31、 33、 35、 39、 45、51、 52、 56、 58、 59、 68若可检测的 HPV基因型别不能涵盖上述 13种高危型，则可能造成阴性预期值无法达到临床要求，因此不能用于宫颈癌筛查。 -不能少！可包含不确定其风险的 “中等风险型 ”5种： HPV26、 53、 66、 73、 82另外最多可包含 5种不确定风险的 HPV型别宫颈癌相关检测必须包含 13种高危 HPV型别n HPV检测型别太少的产品如只检测 5种 型别、 2种 型别（如 HPV16/18）等，将不能再注册HPV检测的目的是什么？HPV检测的目的是什么？Title, Location, Date 12如申报的宫颈癌相关 HPV核酸检测产品涉及上述 18种以外的其他 HPV基因型，则需提出明确理由和依据且应得到国际有关权威机构的文献支持。不建议将低危型 HPV检测用于宫颈癌筛查若申请人提出低危型 HPV检测相关产品注册， 则应详细解释其临床意义和适应症，并提供充分的证据 。限制申报其他型HPV限制申报低危型HPVn 不能盲目的追求过多的 HPV检测型别n 不建议将低危型 HPV检测用于宫颈癌筛查中国 CFDA明确限制低危型 HPV检测2015最新 CFDA指导原则以服务临床为最终目的13设定与临床风险相关的阳性判断标准Cutoff阳性判断值以 CIN2+为临床终点的敏感度和特异度临床敏感度、特异度初筛联合筛查ASCUS分流临床适应症一项检测技术，要想满足以上要求，必须基于长时间大量的临床验证才能实现2015年 CFDA新的指导原则，从临床目的出发，精确注册标准要求答案： 只是 为了查有没有 HPV病毒感染？NO 是 为了查 HPV感染型别，检测型别越多越好？ NO 是 为了发现已经存在的 CIN2+病变和预 CIN2+ 的风险人群 ？ yes14HPV检测的目的是什么？1、 HPV检测的目的是什么？2、 HPV检查的最佳方法检查的最佳方法 ？3、德同产品介绍15主要内容HPV检查的最佳方法直接核酸检测 （无需 PCR实验室）n 杂交捕获技术 （ HC2、 DH1、 DH2、 DH3）n 酶切信号放大法 （ Cervista）核酸扩增后检测 PCR类技术 （需 PCR实验室） n 膜杂交法n 基因芯片法n 反向点杂交法n 流式荧光杂交法n 荧光探针法HPV DNA检测 技 术 分 类HPV检查的最佳方法检查的最佳方法杂交捕获技术 （ HPV检测的金标准）产品德国凯杰的： HC2杭州德同的： DH2、 DH317HPV检查的最佳方法杂交捕获技术 的三大优势：1、独特的探针技术： 14 种全长 8000RNA 探针，避免因区域片段（如 L1 区）丢失造成的假阴性2、无需 DNA提取，无需核酸扩增，有效避免因环境因素造成的假阳性3、统一的临 床 判 定 标 准1.0pg/ml ，避 免 因方法学灵敏度过高产生的假阳性，结果重复性好，准确可靠。 18HPV检查的最佳方法杂交捕获法独特的探针技术HPV病毒基因组为环状双链 DNA，含有 8000个碱基对德同 DH系列 HPV 检测 “全长鸡尾酒 ”探针技术HPV18 8000bp，基于全长，涵盖 HPV DNA所有区域 2 12种不同型别探针混合 准确，不漏诊Cobas HPV Emerging Issues on HPV Infections: From Science to Practice, Monsonego 2006HPV 病毒基因 L1片段缺失PCR中 -球蛋白的竞争-globin-globin-globin-globin-globin-globin-globinHPVHPVHPVHPVHPVHPVHPV-globinHPVHPV -globin反应过程中的竞争会导致假阴性结果“-球蛋白和 HPV以共同引物L1片段进行扩增，这样会降低 HPV检测的敏感度 ”Coutlee et al. JCM 2002; 40(3): 902-907PCR导致假阴性的原因n 不同 HPV型别扩增效率不同n 如果 L1片段缺失，检测失败 (整合型 HPV)n 通用引物会和低危型 HPV结合，抑制了目标高危型别的扩增n 内指控（ Beta-globin）会抑制 HPV扩增n 样本抑制 (有 5的样品丢失因出现抑制而无法扩増 )PCR检测可能导致假阳性结果u 检测与临床不相关的感染u 样本间的污染缺乏统一的判定标准结果受主观因素影响杂交捕获PCR经临床验证的同一判定标准 1.0pg/ml仪器判读、结果客观可靠统一的判定标准HPV检查的最佳方法为何要明确 “临床灵敏度和临床特异度的 Cutoff值 ”？262015 IPV Conference， Mark. Stolern 参考参考 2015年世界年世界 IPV大会：大会：n 理想的临床灵敏度和特异度的临界值（ Cutoff），即及能够保证对 CIN2的病人具有非常高的检出率的同时，又可以避免因分析敏感度过高而造成的假阳性n 临床敏感度与疾病进展风险挂钩n 分析敏感度与是否存在病毒感染挂钩： PCR过于敏感的分析敏感度，会将病毒含量的人判断为阳性HPV检查的最佳方法Adapted from Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6分 HPV检查的最佳方法析敏感度与临床敏感度n 杂交捕获 HPV DNA检测为阴性时并不代表体内没有 HPV，表明样品中HPV含量不足 5000拷贝 .n 杂交捕获 HPV DNA检测为阳性时（高于以上标准）可以预测未来 8-10内患 CIN2/3或者进展为更高级别病变的风险n 短暂及一过性的感染会通过自身免疫力清除n PCR 方法检测 HPV的分析敏感度可能 10 拷贝区别：分析敏感度与临床敏感度分析敏感度PCR 方法的分析敏感度达到10个拷贝 /ml阳性结果：可能没有临床相关性临床敏感度杂交捕获的分析阈值经临床验证为 5,000 个拷贝 /ml经临床证实：高度的阴性预测值q 样本中能检测出的病毒最低水平q 也被称作检测极限 (LOD)q 统计学意义：检测结果与零的区分q 以临床病变为终点指征，检测出高度病变的敏感度 (CIN3+ / SCC)q 初筛时，能够检测出 CIN2或宫颈癌的比例q 分析阈值必须得到严格的验证HPV检查的最佳方法检查的最佳方法杂交捕获技术 （ HPV检测的金标准）产品德国凯杰的： HC2杭州德同的： DH2、 DH329HPV检查的最佳方法1、 HPV检测的目的是什么？2、 HPV检查的最佳方法检查的最佳方法 ？3、德同产品介绍30主要内容