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.,1,微生物检验技术,第六章 革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌检验,.,2,重点 各菌属生物学特性及临床意义。 难点 各菌属微生物学检验,重点难点,.,3,目 录,一、肠杆菌科 二、弧菌科 三、非发酵革兰阴性杆菌 四、其他革兰阴性苛养菌,.,4,肠杆菌科,.,5,第一节 概述,.,6,肠杆菌科（Enterobacteriaceae）细菌是一大群形态、生物学性状相似，需氧或兼性厌氧的革兰阴性杆菌或球杆菌 在自然界中广泛分布，可栖生在人和动物的肠道内，多数为条件致病菌，少数为致病菌,致病菌：沙门菌、志贺菌、耶尔森菌等条件致病菌：埃希菌、克雷伯菌、枸橼酸杆菌、肠杆属菌、沙雷菌、变形杆菌等,与医学的关系,分 类,.,7,1）形态与染色 革兰阴性杆状或球杆状细菌，无芽孢，多数有鞭毛，能运动，少数细菌有荚膜或包膜，有致病性的菌株多数有菌毛,共同特性,.,8,2）培养特性 需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普通培养基如血琼脂和麦康凯培养基上容易生长，大部分菌属在2235生长良好,大肠埃希菌菌落特征（血平板）,大肠埃希菌菌落特征（MAC）,.,9,.,10,.,11,3)生化反应 非常活泼。发酵葡萄糖（产酸或产酸产气） 、触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐还原阳性,4）抗原结构： O抗原 菌体抗原 H抗原 菌毛抗原 表面抗原,.,12,5）变异性 多样。如S-R变异、H-O变异，生化反应变异、耐药性变异 6）抵抗力 不强。加热6030min既被杀死，对干燥、化学消毒剂敏感、耐低温、耐胆盐、煌绿（可抑制非致病菌）,.,13,临床意义,（一）肠道外感染 除志贺菌外，多数肠杆菌科细菌均可引起肠道外感染，且往往为获得性的感染 鼠疫耶尔森菌可引起自然疫源烈性传染病鼠疫，伤寒沙门菌可经粪口传播引起血流感染 （二）肠道内感染 是人和动物肠道感染的重要病原菌。比较明确的肠道病原菌有埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶尔森菌属等,.,14,微生物检验,KIA（AA）,MIU（）,IMVC:,.,15,第二节 埃希菌属,.,16,埃希菌属主要有5个种， 1）大肠埃希菌 临床最常见 2）蟑螂埃希菌 3）弗格森埃希菌 4）赫尔曼埃希菌 5）伤口埃希菌,.,17,一、生物学特性,形态与染色 为革兰阴性短杆状，多数有周鞭毛和菌毛 培养特性 兼性厌氧，营养要求不高，在血琼脂平板上某些菌株可产生-溶血，在SS琼脂平板上少数菌株可发酵乳糖，形成粉红色菌落。在麦康凯平板上菌落呈粉红色。在伊红美蓝琼脂平板上呈有金属光泽的紫黑色菌落。在液体培养基中，呈浑浊生长,.,18,一、生物学特性,生化反应特征： 发酵多种糖，产酸、产气 KIA产酸/产酸、产气 IMViC中4个试验的结果为 MIU中3个试验结果为,硝酸盐还原实验,OF实验,.,19,一、生物学特性,4. 抗原构造 1)O（菌体）抗原：脂多糖，耐热 2)H（鞭毛）抗原：蛋白质，不耐热 3)K（表面）抗原：荚膜多糖，耐热，能阻止O抗原凝集反应,.,20,一、生物学特性,5.抵抗力 自然状态下较强。加热6030min既被杀死， 耐低温，对常用化学消毒剂敏感、对胆盐、煌绿有选择性抑制作用，对链霉素、卡那霉素等敏感，但易耐药,.,21,二、临床意义,1.致病因素 1）侵袭力： K抗原和菌毛与侵袭力有关。K抗原有抗吞噬作用，菌毛有黏附作用 2）内毒素 ：细胞壁上的脂多糖（LPS） 3）肠毒素： 大肠埃希菌可产生两种肠毒素：一种是不耐热肠毒素（LT）；另一种是耐热肠毒素（ST）,.,22,二、临床意义,2.所致疾病 1）肠道外感染 大肠埃希菌是临床分离的革兰阴性杆菌中最常见的菌种，可引起各种类型的感染，主要是引起人类泌尿系感染,肠道外感染（多为内源性感染） 化脓性感染定位转移 腹膜炎、阑尾炎、创伤感染、手术刀口感染等 泌尿道感染病原菌来自病人肠道（上行性） 占泌尿道感染首位、女性多见（尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎等）,.,23,二、临床意义,2）肠道内感染 是人和动物肠道的正常菌群，但其中有些菌株能引起轻微腹泻至霍乱样严重腹泻，根据其不同的血清型别、毒力和所致临床症状的不同，将引起人腹泻的大肠埃希菌分为5类：,.,24,三、微 生物学常规检验,1.标本采集 肠外感染的标本：取血液、痰液、脓液、分泌物等 肠内感染的标本：取腹泻和食物中毒者的粪便、肛拭和残留食物,.,25,三、微 生物学常规检验,2.肠道外感染标本的常规检验 ）检验程序 ）检验方法 直接检查分离培养鉴定（KIA、MIU）3.肠道内感染标本的常规检验 1)分离培养：选择培养基 2)鉴定：生化反应、血清学试验、毒素或毒力试验,.,26,第三节 沙门菌属,.,27,案例 一男性病人，高热10天，有纳差、腹部不适、全身酸痛的前驱症状。腹部有压痛，肝脾肿大。肥达试验： H 1:40，O1：160，PA1：20，PB1:20。医生怀疑病人得了肠热症。 请问：1、为明确诊断，应采集哪些标本来进行微生物学检验？ 2、所采集的标本应做哪些微生物学检验才能有助于疾病的诊断？ 3、为了明确诊断，是否还可以再抽血做肥达试验？,.,28,一、生物学特性,1.形态与染色革兰阴性杆菌，不产生芽孢，无荚膜，除少数菌株（鸡沙门菌和雏沙门菌）外，一般都有周鞭毛，能运动,.,29,一、生物学特性,2.培养特性 兼性厌氧，对营养的要求不高，在普通营养琼脂平板上生长的菌落为半透明、S型菌落，可出现粗糙型的菌落（S-R）变异。 在肠道选择性培养基上因不发酵乳糖，菌落透明或半透明，有些能产生硫化氢的菌株，在SS琼脂平板上可形成中心黑色的菌落,.,30,一、生物学特性,3.生化反应 发酵葡萄糖产酸、产气（伤寒沙门菌不产气），不发酵乳糖。 多数沙门菌反应特征为：KIA：KA+，MIU：+-，IMViC：-+-+/-,.,31,二、临床意义,1、致病因素 1侵袭力 菌毛和Vi抗原构成 2内毒素 3肠毒素 2、所致疾病 沙门菌主要通过污染食品和水源经口感染 1.临床常见伤寒和副伤寒：肠热症 2.胃肠炎 3.菌血症或败血症 4.携带者,.,32,二、临床意义,.,33,三、微生物检验,标本采集 1周取血，2、3周取粪，3周取尿液，全病程骨髓，血清学诊断应在病程的不同时期分别采集23份标本 食物中毒：粪便、呕吐物、可疑食物 带菌者：粪便 尿液：中段尿离心后取沉淀物 分离鉴定 增菌（血、骨髓）EMB、SS生化反应血清鉴定,.,34,三、微生物检验,.,35,三、微生物检验,鉴定 1）生化反应鉴定：可以菌落革兰染色，若为革兰阴性杆菌，进行氧化酶、触酶和硝酸盐还原试验，氧化酶阴性，后两者为阳性者可做KIA和MIU等生化反应进一步鉴定,KIA（K A） MIU（）,.,36,四、微生物检验,2）血清学鉴定 定属：多价O抗血清对沙门菌分离株进行定属 定群：每个O血清群的单价因子血清定群 定型：用单价H因子血清与待测菌做玻片凝集试验 3）血清学诊断（肥达试验）用已知的伤寒沙门菌O.H抗原、副伤寒沙门菌A、B、C的H抗原，检测受检血清中有无相应的抗体的半定量凝集试验。 结果解释：正常值伤寒沙门菌O抗体效1:80，H 抗体效价1:160，副伤寒沙门菌 A、B、C的H抗体效价 1:80才有临床意义,.,37,第四节 志贺菌属,.,38,案例 男性，35岁。因腹痛，脓血便2天来诊。 患者3天前出差回来后突然发热达38，无寒战，同时有腹痛、腹泻，大便每日10余次，为少量脓血粘液便，伴里急后重。医生接诊后，怀疑患者患了细菌性痢疾。 请问：1、为做病原学上的检查，应该采集什么标本？ 2、应该选用什么标本来进行分离培养？对可疑菌落需做哪些生化反应和血清学试验来鉴定？,.,39,志贺菌属细菌是引起人类细菌性痢疾的主要肠道病原菌之一 志贺菌属可用特异性抗血清将其分为4个血清群（种）： A群为痢疾志贺菌：症状最重 B群为福氏志贺菌：我国多见 C群为鲍特志贺菌 D群为宋内志贺菌：症状最轻，我国多见,.,40,一、生物学特性,1.形态与染色 为革兰阴性短杆菌，无芽胞，无荚膜，无鞭毛，某些菌株有菌毛2.培养特性 兼性厌氧，营养要求不高，在肠道鉴别培养基上可形成乳糖不发酵、中等大小、无色半透明的菌落，宋内志贺菌常形成粗糙型菌落，且能迟缓分解乳糖，培养48h后可形成乳糖发酵的粉红色菌落。,.,41,一、生物学特性,3.生化反应 发酵葡萄糖产酸不产气，不发酵乳糖。,KIA：KA-；,MIU：-/+-；,IMViC：-/+-,.,42,一、生物学特性,4、抗原构造与分类 志贺菌属菌种有O抗原，无H抗原，部分菌种有K抗原。 O抗原是分类的依据，有群特异性和型特异性两种抗原。 根据生化反应和O抗原的不同，将志贺菌属分为4个血清群 （A、B、C、D）和40余个血清型 A群 痢疾志贺菌 B群 福氏志贺菌（） C群 鲍氏志贺菌 D群 宋内志贺菌（）,.,43,一、生物学特性,5.变异性 （1）S-R变异：宋内志贺菌（诊断血清中含有两相血清） （2）耐药性变异 （3）毒力变异6.抵抗力 本属细菌对理化因素的抵抗力较其他肠杆菌科细菌为低。对酸较敏感，在运送培养时须使用含有缓冲剂的培养基，以免被粪便中其他细菌代谢中的酸所杀死。,.,44,二、临床意义,致病因素 1）侵袭力 2）内毒素：志贺菌主要致病物质 3）外毒素2.所致疾病 主要引起人类细菌性痢疾，主要有以下3种临床类型： 1）急性细菌性痢疾 2）慢性菌痢 3）带菌者,.,45,二、临床意义,.,46,三、微生物学检验,1.标本采集 取粪便或肛拭标本。发病早期采集黏液脓血便做床边接种。若不能及时送检（甘油保存液或卡-布运送培养基内）,.,47,三、微生物学检验,KIA（KA）,MIU（）,IMVC（）,.,48,三、微生物学检验,3.检验方法 1）分离培养 2）鉴定 先进行氧化酶、触酶和硝酸盐还原试验（-+） 后做KIA和MIU等生化反应试验,.,49,第五节 克雷伯菌属,.,50,克雷伯菌属：肠杆菌科中的一属，为条件致病菌，临床感染中以肺炎克雷伯菌多见，也是引起医院感染的重要病原菌,.,51,一、生物学特性,1.形态与染色 肺炎克雷伯菌为革兰阴性杆菌，单个、成双或者短链状排列，有明显荚膜，无芽孢，无鞭毛，有菌毛 2.培养特性 兼性厌氧，营养要求不高，在普通琼脂平板上，形成较大、灰白色、黏液型的菌落，相邻菌落容易发生融合，用接种针沾取时可挑出长丝状细丝 在麦康凯或SS琼脂平板上，形成较大、红色、黏液型菌落。在血平板上不溶血。,粘丝试验,BAP菌落特征,染色形态,.,52,一、生物学特性,3.生化反应 分解葡萄糖、乳糖产酸产气， KIA：AA+-；MIU：-+；IMViC:-+4.抗原结构： O抗原 K抗原：荚膜多糖，用以分型,.,53,二、临床意义,克雷伯菌属的细菌多感染免疫力低下的人群，是医院感染中最重要的条件致病菌 肺炎克雷伯菌是临床标本中常见的细菌，可引起典型的原发性肺炎 肺炎克雷伯菌肺炎亚种还能引起各种肺外感染,.,54,三、微生物学检验,1.采集标本 主要有痰液、血液、尿液、脓、脑脊液、粪便、胸腹水等。2.检验方法 1）直接检查：脓、痰直接涂片染色镜检，尿、脑脊液取离心沉渣涂片染色镜检。可见革兰阴性球杆菌，有明显的荚膜。 2）分离培养：血液、脑脊液标本先经肉汤增菌培养，其他标本接种血平板或麦康凯琼脂平板进行分离培养。 3）鉴定 生化反应：革兰染色，氧化酶、触酶和硝酸酶、KIA、MIU、IMViC 荚膜肿胀试验,.,55,第六节 变形杆菌属,.,56,变形杆菌属是肠杆菌科中的一菌属，是一群动力活泼、产硫化氢、可形成迁徙生长，是条件致病菌和医院感染的常见菌。,.,57,1.形态与染色 革兰阴性杆菌，呈多形性，有周身鞭毛，运动活泼，无芽胞，无荚膜。2.培养特性 兼性厌氧，对营养无特殊要求，在营养琼脂和血琼脂平板上，普通变形杆菌和奇异变形杆菌多呈迁徙生长，是本属细菌的重要特征。在肠道选择培养基上，形成透明或半透明的无色菌落。产生硫化氢，在SS平板上形成无色黑心菌落。普通变形杆菌、奇异变形杆菌的一些菌株和产黏变形杆菌在血平板上溶血。,一、生物学特性,.,58,3.生化反应 分解葡萄糖产酸产气，不分解乳糖；KIA：KA+；MIU:+/-+；IMViC:+/-+-迅速分解尿素（2-4h），苯丙氨酸脱氨酶试验阳性4.抗原构造 变形杆菌X19、X2、Xk菌株的O抗原,即OX19、OX2和OXK某些立克次体有共同抗原成分，临床上用OX19、OX2和OXK代替立克次体的抗原，与病人血清进行凝集试验，用以辅助诊断立克次体病，此试验称为外斐试验。,一、生物学特性,.,59,二、临床意义,变形杆菌属中由普通变形杆菌、奇异变形杆菌引起的感染最为常见。主要引起泌尿系感染，发病率仅次于大肠埃希菌，医源性感染较多见 。此外还可以引起食物中毒、呼吸道感染、创口感染及多个部位感染等。,.,60,1、标本采集 有血液、尿、脑脊液、脓液、痰液、粪便，可疑食物等。 2、检验方法 1）直接检查 2）分离培养 3）鉴定 4）鉴别,三、微生物学检验,.,61,第七节 肠杆菌属,.,62,广泛存在于污水、土壤和蔬菜中，是肠道正常菌丛的成员，能引起多种条件致病性感染。 临床上常见的有：产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、坂崎肠杆菌、泰洛肠杆菌、聚团肠杆菌、格高菲肠杆菌5个菌种。,.,63,1、形态与染色 革兰阴性粗短杆菌，有周身鞭毛，无芽胞，部分菌株有荚膜 2、培养特性 兼性厌氧，营养要求不高，在普通培养基上能够生长，形成较大的、灰白色或黄色的黏液状菌落，在肠道选择培养基上，形成发酵乳糖的红色菌落。 3、生化特性 多数菌株分解葡萄糖、乳糖产酸产气；KIA：AA+-；MIU：+-/+；IMViC:-+,一、生物学特性,.,64,肠杆菌属广泛存在于自然环境中，是肠道正常菌群的成员，能引起医院感染中多种条件致病性感染 在临床标本中最常检出的是阴沟肠杆菌和产气肠杆菌，能引起呼吸道、泌尿道及伤口感染，也可引起败血症、脑膜炎等。 坂崎肠杆菌能引起新生儿脑膜炎和菌血症，死亡率高达75,二、临床意义,.,65,1.标本采集 血液、尿液、脓液、痰液、脑脊液等。2.检验方法 1）直接检验 2）分离培养 3）鉴定MAC上稍大而粘稠的菌落 SS上如果生长，为白色或乳白色、不透明粘稠状的菌落,三、微生物学检验,.,66,第八节 其他常见肠杆 菌科细菌,.,67,一、沙雷菌属 二、耶尔森菌属 三、爱德华菌属 四、枸橼酸杆菌属 五、哈夫尼亚菌属,.,68,一、沙雷菌属,.,69,沙雷菌属是肠杆菌科中能引起医院感染的一个重要的菌属，临床标本中以黏质沙雷菌最常见。条件致病菌，可引起肺炎、败血症、脑膜炎、心内膜炎、泌尿道感染等。佩戴隐形眼镜所引起的红眼病。,.,70,1、形态与染色 本属细菌为革兰阴性小杆菌，有周身鞭毛，能运动，气味沙雷菌有微荚膜，其余菌种无荚膜、无芽胞。黏质沙雷菌是细菌中最小者，可用于检查除菌滤器的除菌效果2、培养特性 兼性厌氧，营养要求不高，在营养琼脂上能够生长，形成不透明，白色或有色（红色、粉红色）的菌落。色素的产生在室温中更为明显。所产生的两种不同色素是：非水溶性的灵菌红素和水溶性的吡羧酸。在伊红美蓝和麦康凯琼脂平板上形成无色的大而粘稠的菌落。,一、生物学特性,.,71,该菌曾一度被认为是无害的环境污染菌，但由于该菌具有侵袭性并对许多常用抗菌药物有耐药性，现已成为一种重要的条件病原菌 黏质沙雷菌是引起肠道外感染的主要病原菌，与许多医院内感染的暴发流行有关,二、临床意义,.,72,KIA：KA- MIU：+- IMViC：-/+ 赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸：+- DNA酶阳性,三、生化反应,.,73,二、耶尔森菌属,.,74,与人类疾病密切相关的有3个菌种，包括鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌、假结核耶尔森菌，都是人畜共患病病原菌。,.,75,鼠疫耶尔森菌在我国传染病防治法中被列为甲类传染病，曾在世界上造成多次大流行，引起大批患者死亡，造成人类重大灾害，由于世界上鼠疫自然疫源尚未全部消灭，至今仍有人间或鼠间流行，因此，必须予以重视。鼠疫耶尔森菌有两种毒素：内毒素和鼠毒素临床类型 有3种常见的临床类型： （1）腺鼠疫 （2）败血型鼠疫 （3）肺鼠疫此外尚有较为少见的皮肤鼠疫、肠鼠疫、脑膜炎型鼠疫、眼鼠疫等,鼠疫耶尔森菌,.,76,为革兰染色阴性直杆状或球杆状，两端钝圆，两极浓染，有荚膜，无芽孢，无鞭毛 鼠疫耶尔森菌兼性厌氧，耐低温，在443均能生长，最适生长温度为2528，最适pH为6972。在普通培养基上可生长，但发育缓慢。在血琼脂平板上培养以37最好，48小时后形成柔软、粘稠的粗糙菌落。在肉汤培养基中开始混浊生长，24小时后表现为沉淀生长，48小时后逐渐形成菌膜，稍加摇动后菌膜呈钟乳石状下垂。,肝脏新鲜压片显微镜下形态特征,.,77,鼠疫耶尔森菌检验程序,鼠疫耶尔森菌传染性极强 属于危害程度第二类的病原微生物 采取严格的防护措施并严格遵守实验室对烈性传染病的操作规程方可进行操作,.,78,鼠疫耶尔森菌分解葡萄糖产酸不产气，对大多数糖不分解；KIA：KA-；MIU：-；IMViC：-+-； 赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸：-；不液化明胶；当穿刺培养时，培养物表面成膜状，细菌沿穿刺线呈纵树状生长。,.,79,小肠结肠炎耶尔森菌,小肠结肠炎耶尔森菌可寄居在鼠、家畜和兔多种动物体内，多表现为小肠炎和结肠炎，症状与菌痢和阑尾炎相似。 小肠结肠炎耶尔森菌为革兰阴性球杆菌，无芽孢，无荚膜，22-25培养有周鞭毛，呈翻滚螺旋状运动，35无动力。 兼性厌氧，耐低温。 具有嗜冷性，在4增菌3周可分离纯化；25时动力+，37时动力-;VP试验25时+，37时-；KIA：KA-；赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸：-+-,.,80,小肠结肠炎耶尔森菌检验程序,.,81,三、爱德华菌属,.,82,四、枸橼酸杆菌,.,83,枸橼酸杆菌属,枸橼酸杆菌属以前仅有3个种，即弗劳地枸橼酸杆菌，异型枸橼酸杆菌和无丙二酸盐枸橼酸杆菌。 枸橼酸杆菌属是人和动物肠道的正常菌群，也是条件致病菌，能引起腹泻和肠道外感染如菌血症、脑膜炎和脑脓肿等,.,84,本菌属是肠杆菌科中的一属，为条件致病菌 与临床及医院感染相关的病原菌主要是弗劳地枸橼酸杆菌，科泽枸橼酸杆菌和布拉克枸橼酸杆菌 临床最常见的感染部位是泌尿道，常为老年男性患者（65岁） 此外还可引起菌血症、腹泻、某些肠道外感染及多菌混合感染，导致延长住院时间及死亡 科泽枸橼酸杆菌还可引起婴幼儿脑膜炎和脑脓肿,.,85,1、形态与染色 本属细菌为革兰阴性杆菌，有周身鞭毛、无芽孢、无荚膜 2、培养特性 兼性厌氧，营养要求不高，在MAC、EBME、SS上为无色透明或红色。弗劳地枸橼酸杆菌可产生硫化氢，在SS琼脂上形成有黑色中心的菌落。本菌属的部分生化特性和抗原结构（O抗原）与沙门菌属相似，应注意鉴别,.,86,3.枸橼酸杆菌的基本生化反应特征：三糖铁琼脂中产酸/产酸产气或产碱/产酸、产气、产生硫化氢，枸橼酸盐阳性，脲酶阴性/阳性，吲哚阳性/阴性，动力阳性，VP阴性，鸟氨酸阳性/阴性，精氨酸阳性，赖氨酸阴性,枸橼酸杆菌属与类似菌属的鉴别,.,87,肠杆菌科小结,肠杆菌科细菌是革兰阴性杆菌中最主要的成员，也是临床最常见的病原菌，是临床泌尿道、呼吸道、肠道、腹腔和盆腔等感染的常见病原菌 现已发现与人类感染有关的肠杆菌科细菌有33个菌属，约有40种以上的肠杆菌科的细菌可在临床标本中检测出 肠杆菌科细菌为革兰阴性杆状或球杆状、无芽孢、多数有鞭毛，能运动，有致病性的菌株多数有菌毛,.,88,需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普通培养基上生长良好 主要生化特性为发酵葡萄糖、触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐还原阳性 革兰氏阴性杆菌除肠杆菌科外，还有弧菌科和非发酵菌，所以首先应与这些菌进行鉴别，鉴别可用形态、葡萄糖氧化或发酵、氧化酶、鞭毛等加以区别 肠杆菌科细菌的检验要点为直接涂片检查，分离培养，细菌鉴定，必要时还要作血清学鉴定及毒素检测,.,89,实验室抗菌药物敏感试验抗菌药物的选择，需参照相关标准的基础上，咨询医院相关专业人士，结合医院的具体情况来选择 实验室提供的抗菌药物敏感试验结果对临床合理使用抗生素意义重大 同时细菌的耐药谱，还可作为医院感染流行病学调查的一个重要实验室依据,.,90,弧菌科,.,91,案例2014年9月19日下午5点，李沧区下午5点，李沧区疾控中心接到市八医的电话报告：9月19日下午4：00，该院肠道门诊接诊2例腹泻病患者，症状相似，腹泻十余次，呕吐四次。截止7点，该院已累计收治了7例疑似霍乱病人，病人的临床表现剧烈腹泻，先泻后吐，无腹痛、无发热，发病时间分别为9月18、19日。区疾控中心应急处置分队对7例病人进行了个案流行病学检查，发现7例病人均为附近某小区居民，9月17日中午，均参加了村民姜先生在手拉手餐馆举办的结婚午宴，同时霍乱快诊O139阳性。 请问： 1：结合临床表现，你初步怀疑什么菌感染？ 2：应采集几级防护？除个人防护用品外，还应准备什么？ 3：霍乱采样的注意事项有哪些？应做哪些微生物学检查？,.,92,一、弧菌属 弧菌属分布广泛，以水中最多。 人类致病的主要有霍乱弧菌和副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒。,.,93,（一）霍乱弧菌 霍乱弧菌是霍乱的病原菌，该病为一种急性烈 性肠道传染病，发病急，传染性强，病死率高，属于国际检疫传染病，为我国甲类传染病。 霍乱弧菌包括两个生物型：古典生物型和埃尔托（Eltor）生物型。,.,94,一、生物学特性,1.形态与染色 革兰阴性，弧形或逗点状，单端鞭毛，运动活泼。取患者米泔样粪便作悬滴观察，可见该菌呈穿梭样或流星状运动，做涂片染色镜检，可见“鱼群状”排列,.,95,2、培养特性 需氧或兼性厌氧菌，营养要求不高，最适温度35，耐碱不耐酸，最适pH8.8-9.9,在碱性蛋白胨水中，经35培养6-9h形成菌膜，可达快速增菌目的。在碱性琼脂平板上，形成较大、圆形、扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落。在TCBS上，因发酵蔗糖产酸形成较大黄色菌落。在亚碲酸钾琼脂平板上，菌落中心呈灰褐色。在血平板上，Eltor生物型有溶血。,.,96,3、生化反应 4、抗原结构及分型 H抗原 弧菌属所共有，特异性低 O抗原 特异性高，O1和O139群引起霍乱，O1型根据特异性分为古典生物型和埃尔托生物型 5、抵抗力 抵抗力弱，不耐热，耐碱不耐酸。埃尔托（Eltor）生物型较古典生物型强。,.,97,1、致病物质 鞭毛、菌毛和霍乱肠毒素（主要致病物质） 2、所致疾病 引起霍乱，人是唯一易感者，通过污染的水源或经食物经口感染。 霍乱后可获得牢固的免疫,二、临床意义,.,98,1、标本采集 发病早期及未服抗生素前采样。可采取患者粪便、呕吐物或肛拭子。采集标本及时接种于碱性蛋白胨水中 2、检验程序,三、微生物学检验,.,99,3、检验方法 1）直接镜检 革兰染色镜检，如见鱼群状排列的革兰阴性弧菌，可初步报告。 动力及制动试验：去病人米泔水样便或呕吐物，悬滴法镜检，可见流星样运动的细菌。加入O1群霍乱弧菌多价血清后动力消失，制动试验阳性，可早期报告 2）增菌培养 碱性蛋白胨水 3）分离培养 碱性琼脂平板和TCBS琼脂平板 4）血清学鉴定,.,100,（二）溶血性弧菌 溶血性弧菌是一种嗜盐性细菌，主要来自海产品。引起食物中毒。,.,101,一、生物学特性,1、形态与染色 革兰阴性，直或微弯的杆状，在不同培养基上菌体形态差异较大。两极浓染，单端鞭毛，运动活泼。,.,102,2、培养特性 需氧或兼性厌氧菌，营养要求不高，最适NaCL浓度为3.5%，在无盐培养基上不生长。在碱性蛋白胨水中，经35培养6-9h形成菌膜。在3.5%NaCL琼脂平板上，呈蔓延生长，菌落周围不整齐，凸起，光滑湿润，不透明， 在TCBS上，不发酵蔗糖，菌落绿色（与霍乱弧菌相区别）。 在羊血琼脂平板上，形成圆形、凸起，光滑湿润，灰白色菌落，有溶血。 在SS平板上，蜡滴状，不易挑起，挑起有黏丝状,.,103,.,104,3、生化反应 致病菌株能使人或兔红细胞发生溶血，对马红细胞不溶血，称神奈川试验。 4、抵抗力 抵抗力弱，不耐热，耐碱不耐酸。,.,105,1、致病物质 粘附因子（主要为菌毛）、毒素 2、所致疾病 引起食物中毒,二、临床意义,.,106,1、标本采集 采取患者粪便、肛拭、可疑食物。采集标本立即送检，如不能及时送检，应将标本置于3.5%NaCL蛋白胨水或卡布培养基中送检。 2、检验方法 1）增菌培养 3.5%NaCL蛋白胨水 2）分离培养 TCBS琼脂平板和3.5%NaCL琼脂平板 3）鉴定,三、微生物学检验,.,107,二、气单胞菌属 气单胞菌属广泛分布于自然界，可引起腹泻和肠道外感染,.,108,一、生物学特性,1、形态与染色 革兰阴性直杆状，有时成球杆状或丝状，单极鞭毛，运动极为活泼，无芽孢，有窄的荚膜。2、培养特性 需氧或兼性厌氧菌，营养要求不高，在普通培养基上经培养，形成微白色半透明菌落；在血平板上，形成较大、扁平菌落，有溶血；在肠道培养基上，形成扁平、无色菌落；在TCBS上，生长不良；液体培养基呈均匀浑浊。3、生化反应 发酵葡萄糖产酸，氧化酶和触酶试验阳性，在6%NaCL中不生长,.,109,1、致病物质 溶血毒素和细胞毒素 2、所致疾病 主要引起人类肠内感染（腹泻）和肠外感染（伤口感染和败血症）。,二、临床意义,.,110,1、标本采集 采取患者粪便、肛拭、血液、脓液、脑脊液、尿液等标本。 2、检验方法 1）直接涂片 革兰阴性短杆菌，悬滴法细菌运动活泼 2）分离培养 冷增菌 3）鉴定 ）鉴别 与肠杆菌科及非发酵菌的鉴别：本属氧化酶阳性，能发酵葡萄糖 与邻单胞菌和弧菌属的鉴别：本菌属对O/129耐药，TCBS平板上不生长,三、微生物学检验,.,111,三、邻单胞菌属 邻单胞菌属只有一个种即类志贺邻单胞菌。 引起人类水样腹泻和食物中毒。,.,112,1、染色及形态 本菌为革兰阴性杆菌，1-5根极端鞭毛，运动活泼 2、培养特性 兼性厌氧，营养要求不高，在肠道选择鉴别培养基上，形成不发酵乳糖的无色菌落，TCBS平板上不生长。 3、生化反应 氧化酶、触酶试验阳性，硝酸盐还原试验阳性，发酵葡萄糖产酸不产气，吲哚试验阳性，O/129敏感 4、鉴别试验 1） 与志贺菌属鉴别：氧化酶和动力试验为阳性，志贺菌属均为阴性2）与气单胞菌和弧菌属的鉴别：本菌属对O/129敏感，TCBS平板上不生长,.,113,一、生物学特性,1.形态与染色 革兰阴性，直或微弯的杆状，在不同培养基上菌体形态差异较大。两极浓染，单端鞭毛，运动活泼。,.,114,2、培养特性 需氧或兼性厌氧菌，营养要求不高，最适NaCL浓度为3.5%，在无盐培养基上不生长。在碱性蛋白胨水中，经35培养6-9h形成菌膜。在3.5%NaCL琼脂平板上，呈蔓延生长，菌落周围不整齐，凸起，光滑湿润，不透明， 在TCBS上，不发酵蔗糖，菌落绿色（与霍乱弧菌相区别）。 在羊血琼脂平板上，形成圆形、凸起，光滑湿润，灰白色菌落，有溶血。 在SS平板上，蜡滴状，不易挑起，挑起有黏丝状,.,115,1、致病物质 粘附因子（主要为菌毛）、毒素 2、所致疾病 引起食物中毒,二、临床意义,.,116,1、标本采集 采取患者粪便、肛拭、可疑食物。采集标本立即送检，如不能及时送检，应将标本置于3.5%NaCL蛋白胨水或卡布培养基中送检。 2、检验方法 1）增菌培养 3.5%NaCL蛋白胨水 2）分离培养 TCBS琼脂平板和3.5%NaCL琼脂平板 3）鉴定,三、微生物学检验,.,117,弧菌科小结,霍乱是烈性传染病，凡在流行季节和地区有腹泻症状的患者均应快速准确作出病原学诊断。标本直接检查有助于快速诊断。将标本直接接种于碱性胨水后，转种TCBS等平板观察菌落形态。可疑菌落应使用O1群和O139群霍乱弧菌多价和单价抗血清进行凝集。结合菌落特征和菌体形态，作出初步报告。进一步纯培养，依据全面生化反应，血清学分群及分型进行最后鉴定。符合霍乱弧菌的菌株尚需区分古典生物型和El-Tor生物型,.,118,副溶血性弧菌具有嗜盐性，在不含NaCl的培养基上不生长。主要引起食物中毒和急性腹泻，从腹泻患者中分离到的菌株95%以上能使人或兔红细胞发生溶血，对马红细胞不溶血，为神奈川现象,.,119,气单胞菌属是革兰阴性直杆菌、球杆菌或丝状菌，极端单鞭毛，动力阳性，来自人类菌种（嗜温菌）在1042生长；来自鱼类或环境菌种（嗜冷菌）在2225生长。氧化酶、触酶、硝酸盐还原阳性，发酵葡萄糖等糖类产酸产气，O/129耐药。引起腹泻和菌血症等。与肠杆菌科和非发酵菌鉴别：本菌属氧化酶阳性，发酵葡萄糖；肠杆菌科发酵葡萄糖，氧化酶阴性。非发酵菌可能氧化酶阳性或阴性，不发酵葡萄糖。与弧菌属鉴别：本菌属在6NaCL培养基不生长，分解甘露醇，O/129耐药 。,.,120,非发酵革兰阴性杆菌,.,121,非发酵菌是一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌 广泛存在于人体体表、开放体腔，以及医院相关的外环境中，多为条件致病菌。 医院感染中铜绿假单胞菌、不动杆菌占重要地位。,.,122,假单胞菌属 为一群严格需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌。 氧化酶和触酶试验阳性。可产生大量水溶性色素，如绿脓素、红脓素,.,123,一、铜绿假单胞菌属 假单胞菌属的代表菌属，产生水溶性色素绿脓素，使脓液或培养基呈绿色，而得名。为条件致病菌，是医院感染的常见菌。,.,124,1、形态与染色 革兰阴性杆菌，球杆状或丝球状，长短不一。单个、呈双或短链状排列。无芽孢，有荚膜，有1-3根鞭毛，运动活泼，临床分离株常有菌毛。 2、培养特性 专性需氧，部分菌株兼性厌氧，营养要求不高。在普通琼脂平板和SS平板上生长良好，可生长温度25-42，最适生长温度35，4不生长而42生长是该菌的鉴别点之一。 在血平板和麦康凯平板上形成不同形态菌落，生姜气味。 在SS琼脂平板上，经48h培养菌落中央呈棕绿色（与沙门菌和志贺菌相区别） 在普通琼脂平板上，可产生多种色素，以绿脓素和青脓素为主,一、生物学性状,.,125,.,126,3、生化反应 葡糖糖、木糖氧化；触酶、氧化酶阳性；利用枸橼酸盐、还原硝酸盐并产生氮气；液化明胶，吲哚阴性；4、抵抗力 比其他无芽孢细菌抵抗力强。,.,127,二、临床意义,1、致病物质 产生多种致病性的毒素和侵袭性的酶 2、所致疾病 条件致病菌，在抵抗力低时引起皮肤、呼吸道、泌尿道及烧伤创面等感染，可导致菌血症、败血症、心内膜炎及婴幼儿严重腹泻。医院常见病原菌 3、免疫性 免疫原性强，可刺激机体产生特异性抗体，具有一定的抗感染作用,.,128,三、微生物学检验,1、标本采集 按疾病和检查目的分别采取不同的临床标本，医院环境检测可从空气、水、物体表面等处采样。 2、检验方法 1）直接涂片染色镜检 2）分离培养 3）鉴定 4）鉴别,.,129,二、产碱杆菌属产碱杆菌属典型的菌种是粪产碱杆菌。,.,130,一、生物学性状 1、形态与染色 革兰阴性杆菌，常呈单、双或链状排列。具有周鞭毛，无芽孢，多数菌株无荚膜。 2、培养特性 专性需氧，营养要求不高。在普通琼脂平板上生长良好。麦康凯和SS平板上，形成不发酵乳糖的无色透明菌落。在蛋白胨的肉汤中产氨，可使培养基pH增至8.6以上 二、临床意义 临床最常见的是粪产碱杆菌，大部分感染是条件致病 三、微生物学检验,.,131,三、不动杆菌属不动杆菌属归属于奈瑟菌科，临床上分离出来的绝大多数为鲍曼不动杆菌。,.,132,一、生物学性状 1、形态与染色 革兰阴性球杆菌，常呈双排列。无芽孢，无鞭毛，有荚膜。 2、培养特性 专性需氧，营养要求不高。在普通培养基和麦康凯培养基上。 3、生化反应 触酶阳性，O/F为氧化型，氧化酶阴性，动力，硝酸盐还原试验阴性（三阴） 二、临床意义 本菌的分离率是仅次于铜绿假单胞菌而位居第二位的非发酵菌病 三、微生物学检验,.,133,其他革兰阴性苛养菌,.,134,苛养菌是指对生长环境、营养要求较苛刻的细菌，在普通环境中不能或难以生长。体外培养需添加特殊因子或其他营养成分。常见苛养菌有嗜血杆菌属、鲍特菌属、军团菌属、布鲁菌属。,.,135,一、流感嗜血杆菌 本属细菌因人工培养时必须加含X、V因子的血液而得名。 代表菌为流感嗜血杆菌。,.,136,一、生物学性状 流感嗜血杆菌简称流感杆菌，革兰阴性菌短小杆菌，无鞭毛、无芽孢、黏液型菌株有荚膜。 需氧或兼性厌氧，生长时需要X因子、V因子或二者之一。在巧克力平板上，形成圆形、光滑、透明似露珠的小菌落。,.,137,当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌一起培养时，可见到金黄色葡萄球菌周围的流感嗜血杆菌菌落较大，而远离葡萄球菌的流感嗜血杆菌菌落较小，这种现象称为卫星现象。这是因为葡萄球菌能合成因子释放于培养基中，从而促进流感嗜血杆菌的生长。这一现象有助于对流感嗜血杆菌的鉴定。,.,138,二、临床意义本菌主要寄生在人的鼻咽眼及阴道粘膜中，人是唯一的传染源和带菌者。 三、微生物学检查 1、标本采集 2、检验方法 3、鉴定,.,139,二、鲍特菌属 本属细菌以百日咳鲍特菌为代表菌。 （一）生物学性状 革兰阴性球杆菌，无鞭毛、无芽孢，光滑型菌株有荚膜。 专性需氧，营养要求很高，常用鲍-金培养基进行分离培养。 新分离的菌株为光滑型，称I相菌，具有菌体和表面抗原。 （二）临床意义 百日咳外毒素是百日咳的主要毒力因子。,.,140,三、军团菌属 本属细菌主要致病菌为嗜肺军团菌。 （一）生物学性状 常用镀银染色和吉姆萨染色法 （二）临床意义 致病物质主要为菌毛、毒素和多种酶类 嗜肺军团菌为胞内寄生菌，细胞免疫在抗感染中其主要作用。 四、布鲁菌属 本属细菌主要致病物质为内毒素、荚膜、侵袭性的酶。 主要引起布鲁菌病。以细胞免疫为主。,.,141,五、弯曲菌属对人类致病的主要为空肠弯曲菌和胎儿弯曲菌。前者是人类腹泻最常见的病原菌之一，后者在免疫功能低下时可引起败血症、脑膜炎。,.,142,一、生物学特性 （1） 为革兰氏阴性、细长、螺旋形或海鸥展翅状、S形的弯曲杆菌。陈旧培养物可呈球形或长丝状。一端或两端具有单鞭毛，运动活泼，有时呈螺旋状运动。一端单鞭毛多见于胎儿亚种，两端单鞭毛多见于空肠弯曲菌，无芽孢、无荚膜。（2）微需氧菌，初次分离时需在含5%O2、85%N2、10%CO2气体环境中生长，传代培养时能在10%CO2环境中生长。,.,143,（3）营养要求高，在普通培养基上不能生长，需加血液、血清。（4）该菌属生化反应不活泼。不分解糖类、不液化明胶、不分解尿素，V-P和甲基红试验均阴性。氧化酶均为阳性，大多数弯曲菌还能还原硝酸盐，触酶试验为阳性，空肠弯曲菌马尿酸水解试验阳性。（5）耐寒，在4冰箱或水中可存活4周。,.,144,二、临床意义主要通过食物和水传播，引起人类肠道感染和各种肠道外感染。该菌属中的空肠弯曲菌是引发散发性细菌性肠炎的最常见菌种之一，胎儿弯曲菌主要引起肠道外感染，其中胎儿亚种为主要的人类致病菌。 三、微生物学检验,.,145,六、螺杆菌属 对人类致病的主要为幽门螺杆菌（Hp） 在胃黏膜层中呈鱼群样排列。 营养要求高，以布氏琼脂为基础培养基，需加用适量全血或胎牛血清作为补充物才能生长。 快速脲酶强阳性，是鉴定的重要依据。 幽门螺杆菌的传播途径主要是消化道，幽门螺杆局的感染可能与胃癌有关,.,146,Thank you !,
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