临床感染之病原体检验 ppt课件

临床感染 之 病原体检验,常见病原菌,血液标本的病原菌的检验,病原菌的检验程序,1.标本采集 2.标本直接检查 (1)直接显微镜检查; (2)抗原检测; (3)核酸检测; 3.分离培养与鉴定 (1)培养基选择; (2)分离培养与鉴定; 4.抗体检测 常用ELISA、间接免疫荧光技术等方法; 5.药物敏感性试验,临床意义,1.葡萄球菌菌血症 由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)及凝固酶阴性葡萄球菌引起的逐年增多，占1015。 2.肠球菌菌血症 约占10,常见泌尿生殖道、 消化道和腹腔感染的病人。 3.G-杆菌菌血症 主要侵犯免疫功能低下的病人。,4. L型菌感染菌血症 使用抑制细胞壁的抗生素，由缺损细胞壁的细菌感染所致。 5厌氧菌菌血症 常合并需氧菌感染，症状重而复杂。 6真菌血症 常由条件致病性真菌引起，有念珠菌、曲霉和毛霉等。 7医院感染菌血症 近年来明显增多，占3060。,第二节 中枢神经系统感染,1.常见病原体 G+菌 葡萄球菌，肺炎链球菌， B群、A群链球菌，消化链球菌，结核分枝杆菌，产单核细胞李斯特菌、炭疽芽胞杆菌; G-菌 脑膜炎奈瑟菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞菌，卡他布兰汉菌，类杆菌，不动杆菌，肺炎克雷白杆菌;,病毒 乙型脑炎病毒,柯萨奇病 毒A 、B,脊髓灰质炎病毒,新肠 道病毒6871,狂犬病毒; 真菌及其他 新生隐球菌,白假 丝酵母菌,钩端螺旋体;,2.微生物检验程序,见第一节血液感染或有关章节。 对婴幼儿不能腰穿时，用PCR技术检测外周 血，对脑膜炎条瑟菌感染者的阳性率为100， 且不受抗生素药物治疗的影响； 涂片和结核分枝杆菌培养阳性率有限，且时 间长，用 PCR技术检测脑脊液中结核分枝杆 菌DNA，检出率高，快速灵敏和特异，但要严 格操作规程，避免假阳性。,3.抗体检测,为病毒检测的快速诊断方法，较常用。 (1)中和试验：主要检测中和抗体lgG，此抗体持续时间长有诊断意义，阳性率和特异性均高。双份血清效价4倍增高。 (2)特异性IgM抗体测定：此抗体在病后4天即可出现，2周可达高峰，常用于早期诊断。用 ELISA、间接免疫荧光法等检测，敏感性和特异性较高。,(3)补体结合试验：补体结合抗体为lgG抗体，常在病后第二周出现，56周达高峰，单份血清1：4为阳性，双份血清效价增高4倍为阳性，用于回顾性诊断或流行病学调查。,(4)血凝抑制试验：可用于临床诊断及流行病学调查。血凝抑制抗体在病后5天出现， 2周时达高峰，双份血清抗体效价增高4倍以上有诊断价值，阳性率高于补体结合试验，但可出现假阳性。,4.临床意义,1细菌性脑膜炎是常见类型，其中以流行性脑脊髓膜炎为常见，结核性脑膜炎呈回升趋势，为防治重点。肺炎球菌、链球菌脑膜炎仍常见，流感嗜血杆菌脑膜炎以及其他G-杆菌性脑膜炎有增多趋势。,2真菌性脑膜炎最常见是隐球菌脑膜炎，其他真菌性脑膜炎如白假丝酵母菌、球孢子菌渐增多，免疫功能低下患者易并发。,3流行性乙型脑炎是人兽共患的自然疫源性疾病。 4肠道病毒对中枢神经系统的危害性已逐渐引起人们的关注和重视。还不断发现新肠道病毒68-71型引起的脑膜炎及脑炎。,第三节 创伤和外科感染 1.常见病原菌,2.微生物检验程序,见第一节血液感染或有关章节。 取创伤分泌物和脓液作标本；放 线菌首先要检出标本中的硫磺颗 粒；检测结核分枝杆菌作抗酸染色 镜检；检测厌氧菌要作厌氧培养。 由创伤、手术、侵人性器械操作等 外科治疗引起的感染最为常见，并 日渐增多。,第四节 上呼吸道感染,(一)常见病原体1.革兰阳性金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、化脓链球菌、肺炎链球菌、结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌、厌氧菌、炭疽芽胞杆菌、白假丝酵母菌、放线菌、奋森螺旋体;2.革兰阴性脑膜炎奈瑟菌、大肠埃希菌、肺炎克雷白杆菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌、不动杆菌、百日咳杆菌、军团菌、肺炎支原体,(二)细菌学检验程序,1. 细菌学检验见第一节血液感染及有关章节。 2. 病原体检测只对某些疾病诊断具有意义。由于菌群复杂，正常寄生菌和种类繁多，一份咽拭子分离出来的细菌不一定与疾病有关，另外由于接受药物治疗，使某些细菌受到抑制，可影响阳性检出率。因此，在分析结果时应紧密结合临床。,3. 鼻咽拭子标本的检测有助于猩红热、风湿热、急性肾小球肾炎病人的临床诊断；还可检出化脓链球菌、奋森螺旋体、脑膜炎奈瑟菌、麻风杆菌等以协助诊断；对白喉、百日咳或口腔念珠菌感染的诊断有意义，应结合临床。,4. 呼吸道还可见病毒感染，常见普通感冒或流行性感冒，咽炎和扁桃腺炎等，均应结合临床进行诊断。,第五节 下呼吸道感染,(一)常见病原体 1.革兰阳性金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、A群链球菌、肠球菌、结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌、炭疽芽胞杆菌、白假丝酵母菌、毛霉、曲霉;,2.革兰阴性脑膜炎奈瑟菌、黄色球菌、大肠 埃希菌、克雷白杆菌、铜绿假单胞 菌、流感嗜血杆菌、百日咳杆菌、 军团菌、支原体,3.病毒腺病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、纯疱疹病毒、麻疹病毒等,(二)细菌学检验程序 一般要求下呼吸道感染培养的细菌 浓度应107CFUml，可视为病原 菌，104CFUml视为污染菌。介于 两者之间时，要连续分离培养两次 以上。,痰培养标本的前处理：用无菌盐水 将洗涤3次，洗去痰中的常居菌， 然后加入等量的(pH76)1胰酶 溶液，放置3790min即可使痰液 均质化。,支气管分泌物等要离心沉淀，以生理 盐水适当稀释后,直接涂片染色镜检: 1)正染色法：适用于多种标本及培养物，将标本固定于洁净玻片上直接染色。常用革兰染色，苏本索一伊红染色(HE)，乳酸酚棉蓝染色，过碘酸锡夫染色(PAS)，嗜银染色(GMS)等;,2)负染色法：用真菌不着色而使背景着色,检查新型隐球菌，如用墨汁负染色镜检找隐球菌。,(三)临床意义,1.下呼吸道感染指肺实质性炎症的肺炎和支气管粘膜炎症的支气管炎，是病死率高的疾病。近几年来呈上升趋势。,2.细菌学检查对诊断有重要意义，采集痰要来自于下呼吸道合格的标本，提高检出率和阳性的正确率。,3.细菌性肺炎为最常见的类型，肺炎链球菌所致仍为常见，由流感嗜血杆菌，金黄色葡萄球菌、MRSA和G-杆菌所致肺炎比例明显上升，军团菌肺炎引起了重视。在医院感染中，条件致病菌和耐药菌的G-杆菌占50以上，成为医院内肺炎的主要致病菌。,4.支原体肺炎常以不典型肺炎表现，近年发生率上升, 约80的慢性气管炎病人合并有支原体感染。约占肺炎的10-20 。,5.真菌性肺炎是致病性真菌和条件致病性真菌所引起。目前以条件致病性真菌感染致病为主，并呈上升趋势，以白假丝酵母菌为主，毛霉、曲霉和隐球菌也常见。常合并多种细菌感染。,第六节 消化道感染,()常见的病原体1.肠毒素为主的病原菌霍乱弧菌、志贺菌(福氏、宋内)、大肠埃希菌(ETEC、EHEC、EAggEC)、金黄色葡萄球菌、难梭菌、产气荚膜梭菌。,2.侵袭性为主的病原菌沙门菌、大肠埃希菌(EPEC、EIEC )、志贺菌(鲍氏、志贺)、弯曲菌、副溶血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、结核分枝杆菌、白假丝酵母菌。,3.病毒轮状病毒、埃可病毒、Norwolk 病毒、甲型肝炎病毒、戊型肝炎病 毒、腺病毒。,病原学检验程序,采集脓血或糊状新鲜粪便，应在急性 期，使用抗生素前进行肠道细菌多为 G-杆菌，形态区分困难，不做涂片镜 检。检验程序见第一节血液感染。,1.临床意义,1感染性腹泻 最为常见，为胃肠炎的症状，由多种病原体感染所致。 2细菌性痢疾是指由志贺菌属(福氏和宋内氏)引起的肠道传染病。常有里急后重和脓血样便，中毒性痢疾见于小儿。发病率呈下降趋势。粪培养对诊断有价值。,3细菌性食物中毒常见于沙门菌、副溶血弧菌、致病性大肠埃希菌、葡萄球菌、肉毒棱菌、腊样芽胞杆菌食物中毒。多发生在夏秋季，以暴发和集体发病为特征。,4致病性大肠埃希菌的肠道感染分为5类。即ETEC可致霍乱样肠毒素水泻，常见于儿童和旅行者腹泻；EPEC可引起婴幼儿腹泻；EIEC可引起志贺菌样粘液脓血便；EHEC的0157：H7血清型可引起出血性肠炎和溶血性尿毒综合征；EAggEC是新近报道可引起慢性腹泻的大肠埃希菌。,5消化性溃疡幽门螺杆菌感染主要部位是胃及十二指肠球部。大量研究及临床证明胃炎、消化性溃疡主要是HP所引起，HP可能还参与了胃癌的形成。从此消化性溃疡经抗感染的治疗而成为一个新的概念，并取得好的疗效。,6近年来胃肠炎的病毒感染呈上升的趋势(1)轮状病毒常引起幼儿腹泻；(2)腺病毒是引起儿童腹泻的主要病原，还可引起成人腹泻；(3)Norwolk病毒常感染成人和大龄儿童，引起水样便或黄稀便的腹泻；(4)埃可病毒常引起婴幼儿腹泻。,第七节 尿路感染,(一)常见病原菌80为G-杆菌，大肠埃希菌占70以上，其次为变形杆菌、铜绿假单胞菌、克雷伯杆菌、肠杆菌、沙雷菌、产气杆菌、沙门菌等；20为G+菌，其中以肠球菌为多见，次为葡萄球菌、粪链球菌、结核分枝杆菌，少数为厌氧菌等；支原体、衣原体、真菌感染呈上升趋势；急性感染多见于大肠埃希菌，慢性感染多见于变形杆菌和铜绿假单胞菌。,(二)病原学检验程序,(1)要严格无菌操作,收集晨起第一次清洁中段尿标本，其结果才可靠。 (2)标本直接显微镜检查 可用1滴尿涂片作染色镜检是有意义的方法。如平均每个视野1个细菌(表示细菌定量培养 105ml)率达90以上。 (3)尿细菌定量培养诊断标准是以细菌数 105ml为真性细菌尿 ,104-105ml为可疑阳性，需再复查。,(三)临床意义,1.尿路感染主要经尿道口上行感染所致，极少数为血行感染，即从体内感染灶侵入血流到达肾引起肾盂肾炎。尿液细菌学检验可反映肾、膀胱、尿道、前列腺等处的炎症变化。临床表现主要有尿频、尿急、尿痛、排尿困难和腰痛等。 2尿路感染常见肾盂肾炎(急性和慢性)、膀胱炎(急性为主)、尿道炎(细菌性尿道炎、淋菌性尿道炎、非淋菌性尿道炎)、前列腺炎(常见慢性)等。 3尿路感染需要明确部位和急性 与慢性，主要依病原菌检测，还要紧密结合临床综合考虑作出诊断，药物敏感试验对指导临床合理使用有效抗生素有重要意义。,第八节 性传播疾病,性传播疾病(STD)是指以性行为为主要传播途径的一组传染病。 STD有二十几种，1991年8月我国确认8种STD为重要防治的病种，如梅毒、淋病、软下疳、性病淋巴肉芽肿、非淋菌性尿道炎、艾滋病、尖锐湿疣、生殖器疱疹8种。 STD在概念与病种范围上不同于传统的性病，性病是指以性交为主要传播途径的传染病。性病只包括梅毒、淋病、软下疳、性病淋巴肉芽肿和腹股沟肉芽肿5种。,一、梅毒螺旋体感染的检查,(一)标本采集 取下疳分泌物或二期皮疹或病灶渗出物或局部淋巴结等穿刺物为标本。 (二)微生物检验 1直接显微镜检查 用暗视野显微镜直接镜检。有动力的梅毒螺旋体。镀银染色用光学显微镜直接检查螺旋体。用直接荧光检测法(IFA)检查见亮绿色荧光的梅毒螺旋体,有诊断价值，主要适用于一、二期梅毒。,2梅毒血清学试验 非螺旋体抗原试验主要测定反应素，如VDRI、USR、RPR试验为筛查试验；密螺旋体抗原试验：主要测定特异性抗体，如TPHA、FTAABS、FTA-ABSDS、MHA-TP试验等，特异性高为证实试验。,3PCR 快速敏感特异，可检测梅毒螺旋体DNA片段，对分析疑难病例有帮助。 4暗视野镜检和血清学试验为目前实验室检查的金标准。,(三)临床意义,1梅毒分期：一期梅毒为硬下疳，病灶中有大量螺旋体，适用涂片直接镜检；二期梅毒是梅毒疹期，病期在2年以内，梅毒疹及淋巴结有大量的螺旋体；三期梅毒为晚期梅毒，病期2-5年或更长，引起心血管和中枢神经系统受损。,2梅毒血清学试验并非梅毒所特有，应结合临床仔细分析、除外假阳性反应。近年来新方法有应用前景，如竞争ELISA法检测抗螺旋体抗体；用梅毒重组蛋白作免疫印迹法检测梅毒血清；用梅毒螺旋体全细胞溶解物作抗原免疫印迹法；特异性IgG酶免疫法。,二、淋病奈瑟菌感染的检查,(一)微生物检验 1.用无菌棉拭子取尿道脓液或宫颈脓液和分泌物。抵抗力极低易白溶，应立即送检或床旁自接接种 2.取分泌物标本涂片染色镜检，为革兰阴性双球菌，特别是见白细胞内细菌，有助于诊断 3.抗原检测 可用EIASA及免疫荧光技术检测抗原，对诊断较有帮助。,4核酸检测 PCR检测DNA片段，快速敏感特异，但要注意假阳性，需结合临床进行诊断。 5分离培养与鉴定 在选择培养基上见典型菌落镜检，氧化酶、糖发酵等生化试验，荧光抗体试验鉴定确证。 6淋病奈瑟菌培养是目前实验室的金标准。,(三)临床意义,1淋病奈瑟菌所致淋病，常见于男性淋菌性尿道炎(急性和慢性)、附睾炎，前列腺炎等；女性淋菌性尿道炎、宫颈炎、阴道炎等；女孩阴道炎和尿道炎，主要由直接或间接传染。亦可发生全身性淋病(淋菌性菌血症、淋菌性眼炎和咽炎等)。 2淋病是目前世界上发病率最高的性病，女性易受感染，易发生在性活跃的中青年。,三、软下疳性病的检查,是由杜克嗜血杆菌感染引起生殖器疼 痛性溃疡及所属淋巴结化脓性病变的 性传播疾病。 (一)采集溃疡脓液或分泌物为标本。 (二)微生物检验 1标本直接涂片染色，呈链状或“龟群状排列G-菌，可初步诊断。,2PCR 检测病原菌核酸、快速敏感特异、有助于诊断。 3分离培养与鉴定 可选用选择培养基培养，可见典型菌落。再经涂片染色镜检和生化反应鉴定，可明确诊断。 4软下疳实验室检查的金标准为培养加PCR检测。,(三)临床意义,1本病性交传染，间接传染少见。多见于女性，男女比1：2，但男性病人症状重。病变多在外生殖器，也可播散到其他部位的皮肤和粘膜。 2软下疳发生12周后，有1030患者出现一侧腹股沟淋巴结炎和淋巴结周围炎称横痃。,四、性病淋巴肉芽肿的检查,(一)微生物检验实验室的金标准是分离培养加PCR。 1.取淋巴结脓液或宫颈和直肠拭子或活检材料为标本： 2.标本直接涂片作Giemsa染色检查衣原体及其包涵体；荧光抗体(DFA)染色检测细胞内衣原体包涵体,3抗原检测 用荧光抗体(DFA)染色检测抗原；酶免疫检测(EIA)衣原体可溶性抗原,4PCR检测沙眼衣原体DNA敏感性、特异性达100和93，可用于早期诊断;,5分离培养可用鸡胚培养、细胞培养和动物接种方法,分离培养病原体，涂片染色镜检，免疫荧光检测、生化反应作鉴定; 6抗体检测 检测补体结合抗体，效价达l：64有诊断意义；微量免疫荧光试验可测抗体，滴度1：512有意义。,细菌性阴道病的检查,(一)微生物检验 1.由阴道加特纳菌引起的生殖道性传播疾病。 2.采集阴道分泌物及感染部位的标本 3.直接涂片染色镜检，可观察到线索细胞，有大量多形性G-杆菌,实验室检查的金标准。,4阴道分泌物pH和胺试验 pH45；标本中滴加10KOH 1滴即可发出鱼腥味为阳性。 5分离培养与鉴定 将阴道分泌物接种于人血平板作培养，48h后观察菌落特征，同时作生化试验等进行鉴定。,(二)临床意义,1主要是阴道内乳酸杆菌受抑制，厌氧菌大量生长繁殖，而发生混合性感染的细菌性阴道病。可分解氨基酸产胺而发生鱼腥味，亦使pH上升。 2主要引起细菌性阴道病，也可引起产后感染，流产等妇科疾病。 3分离培养一般不用，因20- 40正常妇女阴道中也可检出此菌，应结合临床。,六、性传播衣原体感染的检查,(一)微生物检验 目前实验室检查衣原体的金标准是培养加PCR。 1.用无菌棉拭子采集宫颈、男性尿道分泌物或病变部位活检标本。 2.直接显微镜检查 涂片Giemsa染色镜检，见上皮细胞包涵体有诊断价值，原体呈紫红色或红色，始体为蓝色或暗蓝色。免疫荧光检查：用直接法荧光抗体(DFA)染色检查细胞内有典型的衣原体包涵体； 3.抗原检测 ELISA检测衣原体特异性抗原。具有快速敏感特异性高的特点。,4核酸检测 PCR和LCR法：检查分泌物和尿标本中衣原体DNA片断，快速敏感特异。 5分离培养与鉴定 有细胞培养(Hela细胞)、鸡胚卵黄囊和小白鼠(腹腔、脑内、鼻腔内)接种三种方法，取培养细胞涂片、Giemsa和碘染色镜检、荧光抗体染色、ELISA、PCR等进是测特异性抗体，也可对分离出的病原体进行血清学分型。,(三)临床意义,1沙眼衣原体沙眼生物变种有18个血清型，D-K型引起NGU；A、D、B引起沙眼。 2由衣原体引起的性传播疾病，发病率呈明显上升趋势，引起全世界重视，并将此列为独立的性传播疾病。常可引起女性不孕、男性不育症。此病常临床症状轻或隐性感染。,七、性传播支原体感染的检查,(一)微生物检验 1.取宫颈分泌物、男性分泌物和无菌中段尿或感染部位标本。 2.将标本涂片、革兰染色或Giemsa染色镜检。因支原体无固定形态,故意义不大。 3.PCR检测支原体DNA,敏感性特异性均高，且快速，但应避免假阳性。 4.支原体营养要求高，选用选择培养基培养,可见典型呈“油煎蛋状”菌落，为阳性。目前实验室检查的金标准为细菌培养。,(二)临床意义,1解脲脲原体为条件致病菌，故应结合临床考虑诊断和治疗。 2NGU并非都由沙眼衣原体和支原体所引起，还有其他微生物可引起，因此应结合临床考虑诊断及治疗。 3.支原体所致的STD呈上升趋势，应引起重视。也引起女性不孕、习惯性流产不育等危害。,八、性传播病毒性感染的检查,(一)微生物检验 1CA的检查 金标准是PCR (1)醋酸白试验：病变局部出现白色丘疹或白斑为阳性，因是非特异性检查，亦有假阳性。,(2)细胞学检查：阴道壁或宫颈细胞涂片作巴氏染色检查，见空泡化细胞及角化不良细胞。 (3)病毒学检查：因PCR检测HPV的DNA，用DNA探针做原位杂交检查，其敏感性及特异性均高，并快速。 (4)亦可用免疫组化技术检测病变组织中的HPV抗原。必要时做组织病理学检查。,2GH的检查,金标准是培养加PCR (1)细胞学检查：以水疱底部刮出物涂片，巴氏染色或姬姆萨染色镜检，具有特征性的多核巨细胞或核内病毒包涵体。 (2)病毒抗原检测：从病损处取标本，用ELISA或单克隆抗体直接免疫荧光法检测HSV抗原，用于诊断; (3)国外分别用HSV1和HSV-2型的单克隆抗体作酶联免疫法测定标本，其敏感性和特异性均达到100，还作型鉴定。,(4)用PCR检测标本中HSV的DNA，并可用于分型, 敏感性高且快速方便。 (5)分离培养：常用人胚肾和兔肾细胞作为培养基，将皮损处标本接种进行培养；还可用鸡胚绒毛尿囊膜培养和小白鼠的乳鼠脑内接种。,(二)临床意义,性传播病毒性感染主要是指尖锐湿疣 (CA)和生殖器疱疹(GH)两种性传播疾病。 CA是由人乳头瘤病毒(HPV)所引起皮肤 粘膜良性赘生物的性传播疾病。HPV目 前已发现77型，引起CA主要是HPV6和 11型，次为16型和18型。GH主要由人类单纯疱疹病毒2型(HSV-2) 引起的常见性传播疾病。,1CA和GH常根据病史及典型临床表现常可诊断，实验室检查可帮助确诊及分型鉴定。CA主要经性接触传播，也可通过间接传播，母婴垂直传播。 GH主要经性接触传播，也可经母婴垂直传播。,2CA发病率仅次于NGU，有增长趋势。CA也可引起女性不孕和流产、男性不育。HPV-6型和11型称为良性型；HPV6型和18型称为高危型；HPV-31、33和35型称为中危型。分型非常重要，决定治疗及预后。,3.GH中HSV-2型占90，HSV-1型占10。HSV-1型主要引起咽眼和面部皮肤感染，常可多次复发。部分重者可通过血液播散引起多脏器或中枢神经系统感染。,