梅毒血清学检测的操作规范.ppt

梅毒血清学检测的操作规范,主要内容,梅毒概述梅毒血清学检测方法梅毒检测技术规范,梅毒是一种几乎可以侵犯全身所有器官，而产生多种症状和体征的慢性传染性疾病。十六世纪初由欧洲传入亚洲，后蔓延我国。梅毒又称为杨梅疮、广东疮、疳疮、下疳、霉疮等。,梅毒概述,梅毒螺旋体生物学特征,病原体为苍白密螺旋体苍白亚种,不易着色直径0.100.15m，有814个致密而规则的小螺旋，两端尖直，运动活跃，运动方式多样抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感对青抗生素敏感,梅毒传播途径性传播,性接触是主要传染途径未经治疗的患者在感染后1年内具有传染性随着病期的延长，传染性越来越小感染后2年，通过性接触一般无传染性,梅毒传播途径母婴传播,妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传播未经治疗者，虽已无性传播（病期2年），但妊娠时仍可传染胎儿，病期越长，传染性越小,梅毒传播途径其他途径,输血传播接触传播接触部位附有梅毒螺旋体日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径,梅毒的分期,一期梅毒硬下疳和/或腹股沟淋巴结肿大二期梅毒病期在2年内有多形性皮疹等三期梅毒病期在2年以上，可有皮肤黏膜损害等隐性（潜伏）梅毒胎传（先天）梅毒,梅毒的诊断,病史症状实验室检查梅毒的实验室检查对诊断有重要意义,梅毒实验室检测技术,病原学检测血清学检测,梅毒实验室检测的特点,临床表现取材部位检查方法一期梅毒溃疡淋巴结病原学检查血液血清学检查二期梅毒皮损淋巴结病原学检查血液血清学检查潜伏梅毒血液血清学检查三期梅毒血液血清学检查神经梅毒血液血清学检查脑脊液细胞、蛋白量检查VDRL等,梅毒的病原学检测-显微镜检测法,暗视野显微镜检查镀银染色检查,暗视野显微镜检查,标本类型：梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损的渗出液、淋巴结穿刺液,镀银染色检查,基本原理：梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染色，从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体结果：棕褐色的梅毒螺旋体,非梅毒螺旋体抗原血清学检测（非特异性梅毒抗体）梅毒螺旋体抗原血清学检测（特异性梅毒抗体）,梅毒血清学检测分类,非梅毒螺旋体抗原血清学检测,原理人感染梅毒螺旋体后，组织受到破坏释放一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体在34周时产生类脂质抗体（反应素）。抗体的作用治疗监测和疗效监测无保护作用,VDRL(性病研究实验室试验)USR（不加热血清反应素试验）RPR(加速血浆反应素环状卡片试验)TRUST(甲苯胺红不加热血清试验),非梅毒螺旋体抗原血清学检测方法,抗原基本成分为心磷脂、卵磷脂和胆固醇抗原抗体集合形成复合物，凝集成网状肉眼可见的沉淀颗粒试验方法敏感性和特异性基本相似操作简单，价格便宜可定量检测,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,四种非特异性试验方法比较,非梅毒螺旋体抗原血清试验,RPR/TRUST基本原理：在心磷脂、卵磷脂和胆固醇等组成的抗原中加入活性炭/甲苯胺红，与待检血清中的反应素结合，形成肉眼可见的红色絮状物。,试验所需仪器,测速要求：1002转/分钟,试验操作定性检测,(1)加样：吸取50L血清/浆放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈中(2)加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原（16.7ul）(3)反应：将卡片置水平旋转仪旋转8分钟，立即在亮光下观察结果,结果判读,RPR,TRUST,TRUST凝集反应强度分级,+：抗原颗粒呈粗大团块，凝结+：抗原颗粒中等团块、凝结+：颗粒凝结，与清亮液体呈明显反差+：抗原颗粒凝结、均匀肉眼可见：抗原颗粒细小凝结，肉眼可辨：圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀分散。,试验操作定量检测,（1）稀释液准备：在圈内加入50L生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。（2）加样：吸取50L血清与各圈中生理盐水做系列稀释，并涂布整个圈内。（3）余同定性试验中。,孔号12345678稀释倍数原倍1:21:41:81:161:32阳性K阴性K生理盐水(ul)-50.050.050.050.050.0-样品(ul)50.050.050.050.050.050.0弃50.0-阳性血清(ul)-50.0-阴性血清(ul)-50.0抗原悬液(ul)16.716.716.716.716.716.716.716.7,定量检测操作步骤,非梅毒螺旋体抗原检测意义,早期梅毒硬下疳出现12周后，血清学可呈阳性梅毒患者经治疗后血清滴度可下降并转阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征为什么要做定量检测？滴度常与病情活动相关，滴度改变4倍具有临床意义,技术性标本的污染溶血操作失误生物学假阳性患者有其他疾病，使梅毒血清试验出现阳性生理机能发生变化：少数孕妇也可发生生物学假阳性,梅毒血清试验假阳性因素：,急性生物学假阳性反应的疾病,麻疹、风疹、水痘、牛痘疹传染性单核细胞增多症传染性肝炎上呼吸道感染、猩红热肺炎链球菌肺炎、病毒性肺炎其他，如亚急性心内膜炎、斑疹伤寒等,急性生物学假阳性的特点,滴度低，一般低于1:8持续时间短，多在疾病消退后6日内转阴用梅毒螺旋体抗原血清试验检测阴性,慢性生物学假阳性反应的疾病,系统性红斑狼疮、盘状红斑狼疮干燥综合征、类风湿性关节炎自身免疫学溶血性贫血、桥本氏甲状腺炎风湿性心脏病、慢性肾炎、肝硬化系统性硬化症、毒品瘾者孕妇、老年人,慢性生物学假阳性特点,可持续6个月以上，甚至终身滴度低，一般低于1:8用梅毒螺旋体抗原血清试验检测呈阴性,梅毒血清反应假阴性,前带现象：在非梅毒螺旋体抗原血清试验中，二期梅毒患者血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性或阴性反应的结果。若将血清稀释后再进行试验即可出现阳性结果合并HIV感染的梅毒患者，梅毒血清试验可呈阴性技术操作,血清固定（耐血清性）,指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转早期的血清固定常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统性梅毒有一定的关系,FTA-ABSTPPA/TPHATP-ELISA发光法胶体金法,梅毒螺旋体抗原血清学检测,TPPA基本原理,TPPA称为梅毒螺旋体明胶凝集实验用超声裂解梅毒螺旋体制备抗原，致敏明胶颗粒致敏粒子与待检血清中的抗梅毒螺旋体特异性抗体结合产生肉眼可见的凝集。,TPPA操作步骤,试剂准备：恢复室温加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液加至微量反应板孔内，第1孔100L，第24孔各25L样本稀释：取血清25L加至第1孔，混匀后取25L至第2孔，混匀后取25L至第3孔，混匀后取25L至第4孔，混匀后弃去25L加对照液：第3孔加未致敏颗粒25L，第4孔加致敏颗粒25L混合：将反应板置振荡器振荡30秒反应：孵育2h观察结果,TPPA结果判读,观察第3孔，不出现凝集为有效试验,TPPA结果判断,观察凝集反应强度：分级如下4+3+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环1+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒环：颗粒模糊覆盖，边缘有明显的小环一：颗粒紧密沉积孔底中央或形成一小点,梅毒螺旋体抗原检测意义,优点敏感性高，特异性强对非特异性试验进行证实缺点通常终身持续阳性不能区分现症感染和既往感染不能作为疗效观察指标,梅毒血清学试验结果解释,先天梅毒的实验室诊断,暗视野查到梅毒螺旋体非梅毒螺旋体抗体滴度持续上升非梅毒螺旋体抗体滴度高于母亲4倍检测抗梅毒特异性IgM抗体阳性,梅毒产妇所生儿童的随访,随访18个月观察抗体的变化随访过程中及时发现先天梅毒非梅毒螺旋体抗原血清学试验由阴转阳滴度上升且有临床症状的儿童随访至18月龄时梅毒螺旋体抗原血清学试验仍持续阳性的儿童,ThankYOU,