胸腺肽的认识与对比.ppt

几种不同的胸腺肽药物,胸腺激素类免疫调节剂发展-胸腺肽,胸腺肽最早是由雪兰诺公司从小牛胸腺提取的一种胸腺因子,1980年在意大利上市,尔后在欧美注册和临床。生产厂家已超过百余家，国家食品药品监督管理局（SFDA）已核准下发了389个注射剂生产批文，有8家企业生产口服制剂。胸腺肽的主要剂型有：冻干粉针剂、注射液、肠溶片、肠溶胶囊和胸腺肽氯化钠注射液5种。,胸腺激素类免疫调节剂发展-胸腺肽,但由于胸腺肽有效成分不明确、含量低、含致敏大分子蛋白，不符合WHO对免疫调节剂的五项标准（1、化学成分明确；2、易于降解；3、刺激适中；4、不致癌，致畸变；5、无累积毒性，无不良反应及后继作用），因而疗效低、安全性差，不良反应尤其是严重过敏反应频繁发生，由此引发了国家药品不良反应监测中心对该类药品进行通报。,胸腺激素类免疫调节剂发展-胸腺五肽,在对胸腺素类药物的研制中，科学家通过化学合成的方法制造出了胸腺生成素，并在此基础上进一步开发了胸腺五肽。1985年，胸腺五肽在意大利以商品名“Timunox”上市。1997年，我国研发合成胸腺五肽，随后四川源基制药、北京双鹭药业、丹东医创药业等企业的产品也获准生产。截至2006年6月，SFDA已核准36家企业生产胸腺五肽原料药及其注射剂。胸腺五肽的主要剂型有：冻干粉针剂、注射液,胸腺激素类免疫调节剂发展-胸腺肽1(T1),在上世纪末，意大利赛生公司的产品“胸腺肽1”已进入我国市场，而且在国外也已在30多个国家获得批准上市。2002年底，SFDA批准成都地奥九泓、海南双成药业、海南中和药业生产原料药及注射剂。胸腺肽1(T1)的主要剂型有：粉针剂,胸腺类制剂的发展,普通胸腺肽安全性大大提高胸腺五肽安全性和疗效都实现了质的飞跃胸腺肽1,被2010版药典收载：安全，有效，质量可控,胸腺肽1受到高度认可,被2010版中国药典收载胸腺肽、胸腺五肽未被收入进入国家基本医疗保险、工伤保险和生育保险药品目录（2009年版）胸腺肽、胸腺五肽、亮菌甲素、香菇多糖、免疫核糖核酸等均未进入进入中国国家处方集收录于肿瘤项下,神经-内分泌系统主要通过神经纤维、神经递质和激素调节免疫系统功能；免疫系统则通过分泌多种细胞因子，反馈信息，调节神经-内分泌系统。,胸腺肽类激素种类及功能,（一）氨基酸的结构通式,天然氨基酸在结构上的共同特点为：,(1).与羧基相邻的-碳原子上都有一个氨基，因而称为-氨基酸(2).除甘氨酸外,其它所有氨基酸分子中的-碳原子都为不对称碳原子,所以：A.氨基酸都具有旋光性。B.每一种氨基酸都具有D-型和L-型两种立体异构体。目前已知的天然蛋白质中氨基酸都为L-型。,氨基酸的构型和存在形式,构型（用D、L表示）：,-氨基酸通式,除甘氨酸，天然-氨基酸都是有旋光的，而且都是L型的。,L型-氨基酸,D型-氨基酸,L-甘油醛,+,甘氨酰甘氨酸,肽键,（二）肽：肽键是由一个氨基酸的-羧基与另一个氨基酸的-氨基脱水缩合而形成的化学键。,蛋白质的分子结构包括一级结构(primarystructure)二级结构(secondarystructure)三级结构(tertiarystructure)四级结构(quaternarystructure),蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸的排列顺序。,一、蛋白质的一级结构(Primarystructure）,主要的化学键肽键，有些蛋白质还包括二硫键。,15,20,25,28,Ala,Asp,Ala,Ala,Val,Asp,Thr,Ser,Ser,Glu,Thr,Thr,Lys,Asp,Leu,Lys,Lys,Glu,Val,Val,Glu,Glu,Ala,Glu,Asn,Ile,Lys,Glu,-OH,Ac-,胸腺肽1,化学合成的28个氨基酸组成的多肽,纯度99.8%正常人血清浓度为400-1000pg/ml,10,5,二、蛋白质的二级结构,主要的化学键：氢键,(二）主链构象的分子模型,-螺旋(-helix)-折叠(-pleatedsheet)-转角(-turn)无规卷曲(randomcoil),1.-螺旋,左手和右手螺旋,2.-折叠,在-折叠中，-碳原子总是处于折叠的角上，氨基酸的R基团处于折叠的棱角上并与棱角垂直，两个氨基酸之间的轴心距为0.35nm.-折叠结构的氢键主要是由两条肽链之间形成的；也可以在同一肽链的不同部分之间形成。几乎所有肽键都参与链内氢键的交联，氢键与链的长轴接近垂直。-折叠有两种类型。一种为平行式，即所有肽链的N-端都在同一边。另一种为反平行式，即相邻两条肽链的方向相反。,3.-转角,-转角,在-转角部分，由四个氨基酸残基组成.四个形成转角的残基中，第三个一般均为甘氨酸残基弯曲处的第一个氨基酸残基的-C=O和第四个残基的N-H之间形成氢键，形成一个不很稳定的环状结构。这类结构主要存在于球状蛋白分子中。,超二级结构；,（三）超二级结构和结构域,三、蛋白质的三级结构,整条肽链中全部氨基酸残基的三维空间的排布位置。,四、蛋白质的四级结构,蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，称为蛋白质的四级结构。,一级结构二级结构三级结构亚基四级结构,总结：蛋白质分子从一级结构到高级结构,胸腺肽1与普通胸腺肽的比较,注：胸腺肽实际有效成分就是胸腺肽1，但含量极低（不到0.6%）,从工艺上说，普通胸腺肽以动物胸腺为原料，经过捣碎、提取、离心、过滤，分装。普通胸腺肽所标示的20mg、50mg等，实际上是总蛋白含量。也就是含氮物质总量。在新的试行标准中，为提高质量，规定必须含有一定比例的胸腺肽1。这实际上从另一方面证明普通胸腺肽中实际真正起作用的是胸腺肽1，但可惜的是普通胸腺肽中胸腺肽1的含量只有0.6%左右。,胸腺肽1与胸腺五肽的比较,注：胸腺五肽给药方式和剂量国内外相差极大，缺少循证医学证据支持,胸腺肽1与胸腺五肽最大的不同在于胸腺肽1是人体内源性物质，与体内的胸腺肽1结构和活性都完全一致，都是28肽。而胸腺五肽却不是人体内源性物质，只是胸腺生成素II的一个片段，胸腺生成素II是49肽，五肽却是只有5个氨基酸的寡肽，连蛋白质的3级结构都不具有，很难说其具有胸腺生成素II的全部活性。可能正因为如此，五肽仅在中国和意大利被批准上市。,15,20,25,28,Ala,Asp,Ala,Ala,Val,Asp,Thr,Ser,Ser,Glu,Thr,Thr,Lys,Asp,Leu,Lys,Lys,Glu,Val,Val,Glu,Glu,Ala,Glu,Asn,Ile,Lys,Glu,-OH,Ac-,ZADAXIN(胸腺肽1)注射液,化学合成的28个氨基酸组成的多肽,纯度99.8%正常人血清浓度为400-1000pg/ml,10,5,T1在活体外的免疫调节功能,细胞因子及受体方面,T细胞的增生及分化方面,白介素2（IL2）的浓度干扰素（IFN）的浓度高亲和力IL2受体的表达干扰素（IFN）的浓度,CD3，CD4及CD8细胞的增生由地塞大米松诱发的胸腺细胞凋亡激活NK细胞活性CFU的前体细胞数目,胸腺肽1增加Th1亚型,Andreoneetal(2001)JournalofViralHepatitis8:194-201,*p0.05,CD4,Th1细胞分泌IL-2,INFg,Th2细胞分泌IL-4,IL-1,*,*,*,*,*,*,HCV阳性病人的外周单核细胞经胸腺肽1培育,Th1在抗肝炎治疗中是清除病毒所必需,胸腺肽1增加NFkB转录因子表达,胸腺肽1(胸腺肽1)启动人体免疫机制来抗病毒、抗癌,增加靶细胞MHC-I类抗原的表达直接抑制病毒的复制直接抑制肿瘤细胞生长的作用,增产NK,CD4+,CD8+,Th1,增加IL-2,INF-,IL-2R,胸腺肽1的双重作用机制,免疫调节机制,直接抗病毒、肿瘤机制,STEMCELL,NKCELL,胸腺肽1作用机制,靶细胞,靶细胞,CD4+T-CELL,CD8+T-CELL,IL-2,INF-,Th1,CTL,间接作用促进T细胞的增生和分化促进细胞因子的表达(IL-2、INF、IL2R）,直接作用增强MHC-I类抗原表达直接抑制病毒的复制增强谷胱苷肽的水平,胸腺肽1的作用机制,胸腺肽1的临床应用,1、在慢性病毒性肝炎治疗中的应用2、在肿瘤治疗中的应用3、在免疫功能低下人群中作为疫苗增强剂的应用4、在其他领域中的应用各种免疫功能缺陷和异常患者往往伴随有免疫功能低下,因此胸腺素1在临床上已开始被应用于治疗重症感染、慢性肾炎、红斑狼疮、风湿或类风湿性关节炎及艾滋病等疾病的治疗中,且均表现出不同程度的临床疗效.,胸腺肽a1的合成工艺,胸腺肽a1是一条由28个氨基酸构成的肽链，人工合成时，是将首个氨基酸固定于固体树脂上，通过28步反应(含末端乙酰化一步)，将其他27个氨基酸一个个分别按序列接上，然后将整条肽链自树脂上“切割”下来，得到的粗品再进入纯化阶段，经多级次色谱柱分离，最终得到纯度极高的胸腺肽a1单体。以上是对采用固相多肽合成技术生产胸腺肽a1的最简单描述。首先，任何化学反应均受化学平衡常数的制约，每一步反应收率均100；假设肽合成反应的每一步收率均达到90，则连续28步反应之后终产品收率仅5(09的28次方)；其次，在经历如此多步合成反应之后，终产品中混杂的各步反应中间体种类近乎天文数字，为得到高纯度胸腺肽a1单体，势必进行多级多次纯化，每次纯化过程又都涉及产品收率问题，目标肽分子在纯化过程中的损失在所难免。,磁共振成像（MRI）证实一：在氨基酸58间有样折叠结构,进口胸腺肽1具有独特的二维空间结构,磁共振成像（MRI）证实二：在氨基酸1724间形成的样螺旋形结构,进口胸腺肽1具有独特的二维空间结构,相互作用后可引发产生一连串的生物学效应：1.增强淋巴细胞分泌白介素（IL-2）、及干扰素；2.增强淋巴细胞表膜IL-2受体的表达作用；3.增强NK细胞的蓦集及杀伤能力；4.增强混合性淋巴细胞的反应。,二维空间结构是与淋巴细胞膜结合首要条件,胸腺肽1中所有氨基酸均为左旋形式,胸腺肽1与仿制品的区别,胸腺肽1与胸腺五肽的区别,HBV的治疗选择,胸腺肽1,核苷酸类似物,TH,TS,干扰素,NK,TC,+,+,+,-,+,+,+,-,-,拉米夫定Lamivudine,RegevA,SchiffER.DrugtherapyforhepatitisB.AdvInternMed2001;46:107-35.,乙肝病毒本身并不引起明显的肝细胞损伤。肝细胞的损伤主要是由免疫病理引起的，也就是机体的免疫反应在清除HBV的过程中造成了肝细胞的损伤。,胸腺肽1显著诱导PBMC细胞2，5寡腺甘酸合成酶（2-5OAS）的增加；联合二者更有相乘的作用（2-5OA是一种抗病毒蛋白）。,(mmol/ml),p0.05,*,p0.05,*,p0.01,*,2-5OAS,胸腺肽1通过增加Th1,降低Th2免疫反应治疗慢乙肝,胸腺肽1显著诱导2-5OAS的增加,*A.Gramenzietal.Hepatology,Vol42,No.4,suppl.1,2005,干扰素a诱导PBMC细胞分泌IL-4。胸腺肽1显著降低IL-4水平，而干扰素诱导IL-4分泌增加。*与控制组比较*与干扰素组比较,(pg/ml),IL-4,(10U/ml),(10ug/ml),p0.05,*,p0.01,*,*A.Gramenzietal.Hepatology,Vol42,No.4,suppl.1,2005,胸腺肽1通过增加Th1,降低Th2免疫反应治疗慢乙肝,胸腺肽1显著降低IL-4的生成,单用治疗慢乙肝（荟萃分析）,治疗结束随访612月时评估;完全反应：ALT复常+DNA阴转或HbeAg+DNA,慢乙肝的联合治疗,胸腺肽1与拉米夫定联合治疗慢性乙型肝炎近期疗效研究,*p=0.3780*p=0.3780#p=0.4000#p=0.0012p=0.0344p=0.0119,中山医科大学附属第三医院传染科：林炳亮黄桂梅杨绍基等,胸腺肽1与干扰素的持续反应率比较。本研究再次证实胸腺肽1停药后的持续反应率增加。,31,48,46,27,胸腺肽1,干扰素,胸腺肽1治疗e抗原阳性慢乙肝的中国报告,停药6个月后胸腺肽1持续应答率仍保持良好,*YouJ.etalWorldJGastroenterol.2006Nov7(41):6715-21,小结,内毒素,炎性介质,细菌感染,肝细胞损伤,T1,微循环障碍,胸腺肽1治疗重症肝炎的免疫调节研究（黄自存等）,N18T11.6mg隔天或BIW1月,200018001600140012001000800,302010,0,0.125,0.026,8.9,11.2,8.8,23.8,18.7,21.7,813,2004,1208,治疗前后有显著差异，所有指标P0.01,g/ml,胸腺肽1联合干扰素治疗慢丙肝（荟萃分析）,*对INF无应答或复发病人*不能耐受INF副作用者，单用T1，为期一年,胸腺肽1适用于下列感染人群,细菌引起的高热持续不退病人免疫低下创口难愈病人有严重感染史者年老体弱的患者欲行重大手术者,胸腺肽1增加巨噬细胞及中性粒细胞吞噬及杀菌能力,取自无感染的小鼠支气管肺泡巨噬细胞和外周中性细胞,预先用T1培养,后暴露于孢子,测定吞噬能力和杀孢子能力,*ThymosinandDendriticcellsinAspergilosis.Blood,1June2004,volume103,No.11,4237,80,40,0,100,50,0,100,50,0,100,50,0,*,*,*,*,%吞噬能力,%杀孢子活性,巨噬细胞,中性细胞,活体外,无,胸腺肽1,无,胸腺肽1,小鼠肺DC细胞预先用Ta1(100mg/ml)培育60分钟，然后分别暴露于曲霉属微菌的孢子或菌丝在37培育60分钟，测定DC细胞的噬能力，以内在百分率(%ofinternalization)来表示。*p0.05,胸腺肽1增強DC细胞的吞噬能力,DCs,DCs+thymosin1,DCs,DCs+thymosin1,曲霉属孢子,曲霉属菌丝,*ThymosinandDendriticcellsinAspergilosis.Blood,1June2004,volume103,No.11,4237,显示胸腺肽1对衍生自TAM的树突细胞(DC)形态学上的改变。图a是使用PBS对照，只有23%DC看到细胞质突出，而图b胸腺肽1组有60%。,胸腺肽1激活DCs细胞,胸腺肽1可降低重度感染患者的死亡率,陈江中国危重病急救医学2007年3月第19卷第3期P153-155,胸腺肽1可以提高抗生素的疗效，缩短ICU和总住院时间,陈江中国危重病急救医学2007年3月第19卷第3期P153-155,谢谢！,