血液病分子病理诊断ppt课件

血液病分子病理诊断临床应用,1,多层次检测平台综合应用,细胞遗传学,形态学 分子生物学 流式细胞学,染色体 核型分析,荧光 原位杂交,RT-PCR,测序,多重 荧光 巢式PCR 定量PCR,直接测序 GeneScan,2,血液病分子病理检测,血液病诊断分型 定量监测MRD 白血病预后 靶向治疗 耐药及疾病进展监测 范可尼贫血 嗜血细胞综合症等,融合基因检测 基因突变检测 血液遗传病检测,大多数情况下，某一患者只有一种融合基因阳性,3,个案 t(15;17) with t(9;22),46,XY,t(9;22)(q34;q11),t(15;17)(q22;q21),BM morphology: APL FCM: M3 QPCR: PML/RARA + BCR/ABL(190)+,4,血液病分子病理检测,多重巢式RT-PCR 筛查 定性检测 用于染色体断裂点跨越很大的区域的融合基因。 荧光定量RT-PCR 定量检测 内参基因 c-abl 结果以比值表示，全程动态监测 融合基因的拷贝数/内参基因 c-abl PCR-测序,5,筛查 每月定量监测 3-6月定量监测 每月定量监测,6,CMPD-慢性骨髓增殖性疾病,*William V,Stefan N. A unique activating mutation in JAK2(V617F) is at the origin of polycythemia vera and allows a new classification of myeloproliferative diseases. Hematology . 2005,10-13:195-200,7,CMLBCR/ABL,约95%的CML 5%的儿童ALL 15%-30%的成人ALL,8,CMPD-慢性骨髓增殖性疾病,Molecular Pathology：the molecular basis of human disease by Willam B. Coleman,Gregory J. Tsongalis,9,JAK2V617F 缬氨酸 苯丙氨酸,激活JAK2基因使细胞对生长因子敏感性增高 PV、ET、CIMF 不是独立的诊断指标 MDS、3%CMML,10,MDS-骨髓增生异常综合症,分子方面的理论有限，但发现有5q31,7q31，20q12的反复缺失，提示可能这些区域存在肿瘤抑制基因。,11,白血病-31种融合基因筛查,12,M3: PML-RARA,55% L型 5% V型 体外对ATRA的敏感度低 40% S型 低分化 M3其他融合基因,t(5;17)(q32;q21),t(11;17)(q13;q21),t(11;17)(q23;q21),t(15;17)(q22;q21),PML-RARa,PLZF-RARa,NPM-RARa,NuMA-RARa,95%,5%,dup(17)(q21.3;q23),STAT5b-RARa,13,AML1/ETO 80-90%M2 少数M1/M4/M5 CBF-MYH11 M4Eo 化疗敏感 预后较好,14,TEL/AML1 前B细胞ALL E2A/PBX1 5-6%的儿童ALL 3%的成人ALL 大部分前B细胞ALL,15,AML患者常见基因突变及其预后意义,同一患者可能同时存在多种基因突变 可与融合基因或其它基因突变同时存在；预后判断；个体化用药 基因突变在疾病发展过程中可能会变化,16,17,AML其他突变,18,淋巴瘤分子检测,19,淋巴瘤-TCR，IG重排,IG和TCR基因重排不一定是谱系的标志 某些T、B淋巴瘤有基因重排的交叉,20,多发性骨髓瘤（MM）,21,22,23,慢性淋巴细胞白血病CLL,24,25,基因检测个体化用药,酪氨酸激酶抑制剂TKI BCR/ABL融合基因 FIP1L1/PDGFRa融合基因,26,基因检测个体化用药 2012NCCN,27,ABL激酶突变检测,ABL激酶区突变c.763GA(p.E255K)和c.944CT(p.T315I)。,28,MRD监测,WT1表达量检测 *约75%AML患者可检测到WT1高水平表达，WT1是AML患者常用的MRD检测标志 融合基因定量检测,*Current Opinion in Oncology 2010, 22:656663,29,WT1 (Wilms tumor gene),1.WT1基因在各类型白血病中均能表达(ALL，AML，CML，MDS). 2.表达水平与白血病的进程相关，可作为化疗和骨髓移植后MRD检测敏感指标。 3.鉴别白血病与反应性白细胞增高。,30,初诊 B-ALL; MLL-AF4 t(4;11)(q21;q23),WT1 (Wilms tumor gene),弟供姐 异基因 造血干细胞移植 +14d白细胞植活 +27d血小板植活,31,血液遗传病分子检测,嗜血细胞综合征相关基因突变 PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11、SH2D1A、XIAP LYST、AP3B1、RAB27A 范可尼贫血基因突变 FANCA 60% 、FANCC 15% 、FANCG 10% WASP综合征 纯红再障 RPS19 先天性角化不良 DKC1、NHP2、TERC、TERT、NOP10、TINF2,32,嗜血细胞综合征 Perforin,PRF1 10q21-10q22 细胞杀伤功能缺陷,33,范可尼贫血基因检测,FANCA 16q24.3 FANCC 9q22.3,34,纯红再障-RPS19基因检测,RPS19 19q13.2 hot spot of missense mutations - codons 52 and 62 常染色体 1岁 女 Exon4发现点突变：c.184CT(p.R62W)，其他外显子未发现突变,35,先天性角化不良,DKC1 Xq28 X-连锁隐性 7岁 男 DKC1基因Exon11发现错义突变：c.1058CT(p.A353V),36,PCR Secquence,送检标本要求,37,Molecular platform,38,谢谢！,39,耐药位点 伊马替尼 尼洛替尼 达沙替尼,40,17P13- 11q22-,12 13q14-,41,Simple genetic diagnosis of hairy cell leukemia by sensitive detection of the BRAFV600E mutation 2012 119: 192-195,42,43,