《对叶百部生产技术规程》（征求意见稿）（编制说明）

对叶百部生产技术规程(征求意见稿)编 制 说 明广西壮族自治区中医药研究院、桂林亦元生现代生物技术有限公司2017年11月10日1一、工作概况（一）任务来源与项目编号本标准是广西壮族自治区质量技术监督局下达的 2016 年第六批广西地方标准制定（修订）项目计划（桂质监函2016 324 号文） ，项目编号：201606017。（二）参与起草单位广西壮族自治区中医药研究院、桂林亦元生现代生物技术有限公司。（三）主要起草人员名单及职务或职称二、编制标准意义对叶百部为百部科植物对叶百部 Stemona tuberosa Lour.的干燥块根，是历年版中国药典所收载的“百部”药材的三个来源之一。百部是中国传统成方制剂的常用药材。研 制人 员 姓名 职务/职称现从事专 业所在单位项 目负责人蒋向军 高级农艺师 药用植物栽培桂林亦元生现代生物技术有限公司莫燕兰 助理工程师 药用植物栽培 桂林亦元生现代生物技术有限公司蒋珍藕 主任中药师 中药学 广西中医药研究院苏钰琴 助理工程师 植物组织培养 桂林亦元生现代生 物技术有限公司赖茂祥 研究员 药用植物栽培 广西中医药研究院盘飞兰 助理工程师 应用生物技术 桂林亦元生现代生 物技术有限公司主要参加人员黄云峰 副研究员 中药资源 广西中医药研究院2桂林三金药业、广西花红药业、广西金嗓子药业等区内 30 多家制药企业和国内 140 多家制药企业以百部作为主要原料制成各种剂型的中成药销往国内外；还有 20 多家企业应用百部于洗发水、沐浴液等日用化工产品及杀虫、灭菌生物农药 1。市场调查显示，全国医药、农药、日化、出口等行业每年使用百部药材达 5000 吨，并呈逐年增加之势。对叶百部的野生资源主要分布在广西河池、百色、桂林等地，是广西道地药材，广西是对叶百部的主产地 2-3。对叶百部商品名为大百部，块根大而长。其产量、生物碱含量、水浸出物明显高于蔓生百部和直立百部 48 ；对叶百部镇咳作用也明显高于蔓生百部和直立百部 9。目前，对叶百部药材完全依靠采挖野生资源，而野生状态下结实极少，自然繁殖十分缓慢，三年以上才能形成产量，灭绝性采收导致野生资源濒临枯竭，开展人工种植已成当务之急。开展规范化种植是目前满足市场需求的主要手段，为规范和统一对叶百部生产技术规程，促进其在广西主要栽培地区的推广应用，制定对叶百部生产技术规程势在必行。经查阅中华人民共和国国家标准批准发布公告 与中华人民共和国地方标准备案公告，目前对叶百部生产技术无国家标准、行业标准，又无地方标准，对叶百部的质量和产量无法保证。因此，在多年种植推广对叶百部基础上，制定对叶百部药材生产技术的广西地方标准，填补了广西区内对叶百部生产技术标准的空白，为对叶百部规范化种植提供依据，确保对叶百部产品质量安全、有效、稳定和可控，为广西对叶百部产业化发展提供有力的保障。三、标准编制起草及研究过程认真学习中华人民共和国标准法、标准化工作导则、标准制定和产品标准编写规定等相关文件资料，研究确定标准的编写原则和项目的实施方案。参照有关国家标准、中国药典与行业标准，并根据本产品的特点而制定标准。力求标准的各项指标均符合国家相关标准的规定，各项指标的试验方法引用国家相关标准中规定的方法，引用国家标准、中国药典与行业标准，并参照执行。（一）前期研究工作。本课题组承担了“广西对叶百部良种选育、种苗繁育技术研究” 、 “道地药材对叶百部在喀斯特贫困山区的规范化种植与示范” （桂科 AD16450033） 、 “道地药材大百部新品种规范化种植与示范” （2016013302）等科技计划项目，从全国对叶百部主产3区广泛采集野生资源，进行了综合评比决选出了综合性状优异的大百部优良种质，采用生物技术手段培育出了自然结实率高、肉质根条数多、长而肥壮、外表光滑、折干率高、有效成分含量高的对叶百部新品种，获得了省级新品种登记证书【（桂）登（药）2014008 号】 ，已申请国家发明专利。分别在兴安县、田林县选择生态环境良好的土地种植，建立了良种资源圃，为规模化种苗繁育奠定了基础。针对对叶百部种子的自然发芽率低的问题，采用磁电场复合诱导技术，使种子发芽率达 90%以上，发芽势在 50 天以内，幼苗生长旺盛，培育周期 120 天，移栽成活率达 90%以上，与组培苗相比，显著降低了繁育成本，形成了一套完整的种子繁育技术体系。在广西选择不同气候、海拔、坡度的实验基地进行种植比较，掌握了新品种的生长发育规律、生态适应性。探索了不同生态环境条件下对叶百部生态种植模式（主要包括间作套种、立体种植、林下种植、露地栽培等） ，对整地的方法、种植密度、种植时间、肥水供应等进行了比较，获得了最佳的种植模式；还开展了对叶百部种植关键技术研究，研究了选地整地、选种育苗、定植技术、田间管理、病虫害防治方法对对叶百部产量质量的影响，积累了大量、翔实的数据和实际应用验证资料。目前已种植推广 3 年多，为本标准的制定打下了良好基础。（二）2016年3月，成立了以蒋向军为组长，莫燕兰、蒋珍藕、苏钰琴、赖茂祥、盘飞兰、黄云峰等人组成的标准起草工作小组，并向广西壮族自治区质量技术监督局递交了制定广西地方标准对叶百部生产技术规程的建议书和申请书，2016年8月获批准立项。（三）任务下达后，标准起草小组及时部署了标准编制的工作方案和小组成员调研、起草工作时间安排表。在编制过程中，按照广西壮族自治区质量技术监督局关于编制标准工作的要求，主要起草人员于项目实施期间，除了在实验室进行大量试验，并对取得的数据进行全面统计分析，此外还到各生产企业和广大种植户以及市场进行了大量的调查，并在编制过程中咨询了相关权威专家。 标准起草工作小组在前期研究工作以及实地调研的基础上，对对叶百部种植技术进行系统总结，并查阅了大量的国内外文献资料 10-14，确定了广西地方标准对叶百部生产技术规程的主要技术内容，形成了标准的基本构架。2017 年 8 月，经过标准起草工作小组成员的充分讨论及多次的修改完善，完成了广西地方标准对叶百部生产技术规程 （征求意见稿） 。4四、标准编制原则、依据1、标准编写原则（1）本标准的格式和编写方法执行 GB/T 1.1-2009 的规定。（2）本标准的制定力求科学、准确、系统，内容与当前对叶百部种植、生产实践紧密结合，重视可操作性和实用性。2、标准编写依据（1）制定本标准的目的是规范对叶百部生产技术，以提高其应用的成功率和促进其在广西主要栽培地区的推广应用。（3）本标准的编写以对叶百部种植的田间生产试验数据和广西对叶百部产区的调研数据为基本依据，同时结合了生产企业和市场流通现状。标准起草单位承担了“广西对叶百部良种选育、种苗繁育技术研究” 、 “道地药材对叶百部在喀斯特贫困山区的规范化种植与示范” （桂科 AD16450033） 、 “道地药材大百部新品种规范化种植与示范” （2016013302）等科技计划项目，培育出对叶百部新品种，获得了省级新品种登记证书【（桂）登（药）2014008 号】 ，并申请国家发明专利；分别在兴安县、田林县选择生态环境良好的土地种植，建立了良种资源圃，为规模化种苗繁育奠定了基础；对对叶百部种子育苗及组培育苗进行了全面深入研究，形成了一套完整的种苗繁育技术体系；在广西选择不同气候、海拔、坡度的实验基地进行种植比较，掌握了新品种的生长发育规律、生态适应性，探索了不同生态环境条件下对叶百部生态种植模式（主要包括间作套种、立体种植、林下种植、露地栽培等） ，对整地的方法、种植密度、种植时间、肥水供应等进行了比较，获得了最佳的种植模式；开展了对叶百部种植关键技术研究，研究了选地整地、选种育苗、定植技术、田间管理、病虫害防治方法对对叶百部产量质量的影响，积累了大量、翔实的数据和实际应用验证资料。目前已种植推广 3 年多，为本标准的制定打下了良好基础。五、标准主要技术内容（一）本标准规定对叶百部的栽培物种、相关术语及定义、产地条件、种苗繁育、栽培技术、病虫害防治、采收加工、药材质量、包装、运输、贮藏、档案记录和管理等。本标准适用于广西境内对叶百部主产区种苗繁育、人工种植的生产。（二）本标准引用如下文件的最新版本（包括所有的修改单）：GB3095 环境空气质量标准 、 GB5084 农田灌溉水质标准 、 GB15569 农业植物调运检疫规程5、 GB15618 土壤环境质量标准 、 GB/T 8321 农药合理使用准则 、 NY/T 394 绿色食品肥料使用准则 、 WMT2 药用植物及制剂进出口绿色行业标准 、国家药典委员会中国药典一部（2015 年版） 。（三） 物种选择 对叶百部（Stemona tuberosa Lour.）是百部科（Stemonaceae）百部属（Stemona ）植物，是国家药典委员会中国药典一部（2015 年版）收载的“百部”药材的三个来源之一；对叶百部是广西道地药材，广西是对叶百部的主产地，因此，本标准规定生产用种选择该种。（四）栽培环境条件根据中药材对产地环境条件的要求，规定产地环境应符合GB3095 环境空气质量标准 、 GB5084 农田灌溉水质标准 、 GB15618 土壤环境质量标准的要求。此外，根据对叶百部的生物学特性及生长习性，幼苗喜阴，喜湿润、不耐旱、怕涝。成年植株喜温暖，喜湿润、耐旱、怕涝。在年均温度 1824、日照时间长的区域根系膨大快。在霜雪多的区域，植株易受寒害，根系膨大缓慢。对土壤要求不严，在红壤、棕壤，褐土、紫色土等均生长良好。尤其适宜在土层疏松肥沃的微酸性沙壤土生长，表现为根系长、膨大快、产量高。对地势要求不严，在平地、缓坡地、山地均生长良好。缓坡地天然排水容易，便于机械化耕作，生产成本低。低洼地通气不良，易被积水沤根，植株生长势弱，部分植株可能感染真菌性病害。因此，宜在年均温度 18-24、降雨量 1200ml 以上、日照时间长的区域，选择不积水的平地、缓坡地、山地。尤以土层疏松肥沃、腐殖质丰富的微酸性沙壤土、高温干旱时有水供应、通风透气的缓坡地作为园地为佳。（五）种苗繁育技术 采用组培繁育方法。1、外植体的处理。将材料（茎段）采回实验室后，去除叶片，截取对叶百部带侧芽茎段，放入无菌瓶中，用自来水冲洗 1 h；无菌的条件下，用 75酒精浸泡 40 s，再用 0.1氯化汞溶液处理，无菌水清洗 46 次，备用。为探讨 0.1氯化汞溶液不同处理时间对对叶百部消毒效果的影响，分别进行6、10、14min 的处理时长，接于相同的培养基中，接种时将外植体斜插入培养基，并以侧芽贴近培养基表面 1 mm 左右为宜，每个培养瓶接种 1 个茎段，每个处理接种 346瓶以上，培养 10 d 后统计并观察各处理的培养情况。结果见表 1。可以看出，随着消毒时间的增加，外植体的污染率逐渐下降，且趋向于稳定，消毒时间的增加有效制止了外植体污染的发生。表 1 不同消毒时长的消毒效果消毒时间(min) 接种瓶数(瓶) 污染瓶数(瓶) 萌发瓶数(瓶) 污染率(%) 6 34 6 18 17.610 34 2 25 5.914 34 2 27 5.92、诱导培养2.1 植物生长调节物质对初始诱导效果的影响植物生长调节剂是植物培养基中的关键性物质，起决定性作用，将生长素与细胞分裂素配合使用，可促进不定芽的分化、侧芽的萌发与生长。该试验选用 6-BA 和NAA，并设立不同的浓度及组合，共 3 个处理，以探讨它们对对叶百部初始诱导结果的影响，试验结果见表 2。可以看出，不同生长调节物质的配比，对叶百部带侧芽茎段的诱导效果存在一定的差异。固定 6-BA 的浓度为 1.0 mgL 时，其诱导率和平均苗高随着 NAA 浓度的提高而提高，当 NAA 的浓度由 02mg L 提高至 05 mgL ，其诱导率由 514提高至 80.0，平均苗高的增幅达 1.1 cm；固定 NAA 浓度为 0.5 mg L 时，当 6-BA 浓度由 1.0 mgL 提高至 1.5 mgL ，其诱导率由 80.0降低至 76.5，而平均苗高由 3.7cm 增至 5.4 cm。可见，以改良 MS+6-BA1.0 mgL+NAA 0.5 mgL 为初始诱导培养基可以得到较高的诱导率，并得到质量较优的初始诱导苗。表 2 植物生长调节物质对初始诱导效果的影响培养基编号 6-BA NAA 接种瓶数 污染瓶数 出芽瓶数 诱导率 30d 后平均苗高mg/L mg/L 瓶 瓶 瓶 % cm 1.0 0.2 40 3 19 51.4 2.6 1.0 0.5 40 0 32 80.0 3.7 1.5 0.5 36 2 27 76.5 5.4注：改良 MS+6-BA 1.0 mgL+NAA 0.2 mgL；改良 MS+6-BA 1.0 mgL+NAA 0.5 mgL；改良 MS+6-BA 1.5 mgL+NAA 0.5 mgL；2.2 不同材料类型的外植体对初始诱导效果的影响试验选用不同木质化程度的对叶百部带侧芽茎段进行初始诱导试验，以探讨不同材7料类型的外植体对初始诱导效果的影响，试验结果见表 3。可以看出，外植体的木质化程度对初始诱导效果有一定的影响。随着木质化程度的提高，对叶百部的诱导率有着下降的趋势，具体表现为培养 30 d 后，材料一的诱导率为 78.8，材料二的诱导率为 74.2。此外，随着木质化程度的提高，对叶百部外植体的萌发速率有下降的趋势。因此，材料一的诱导效果优于材料二。表 3 不同材料类型的外植体对初始诱导效果的影响材料类型 接种瓶数 污染瓶数 10d 出芽瓶数 10d 诱导率 30d 出芽瓶数 30d 诱导率瓶 瓶 瓶 % 瓶 %材料一 35 2 26 78.8 26 78.8材料二 35 4 21 67.7 23 74.23、继代增殖培养试验选用 NAA 和 IBA 生长素类生长调节物质选用 6-BA 和 KT 作为细胞分裂素类生长调节物质，探讨生长调节物质对对叶百部增殖效果的影响，试验结果见表 4。可以看出，不同浓度的植物激素组合对继代增殖培养存在着一定差异。固定 NAA 浓度为 0.2 mg/L，当 6-BA 浓度从 1.0 mg/L 提高至 2.0 mg/L 时，对叶百部的继代增值倍数和平均苗高随着 6-BA 浓度的增加而上升，芽苗长势较好，且未见有部分叶片组织坏死的现象。固定 IBA 浓度为 0.3 mg/L，对叶百部的继代增值倍数也随着 6-BA 浓度的增高而上升，当 6-BA 浓度为 3.0 mg/L 时，增值倍数达到了 3.5。试验过程发现6配方表现最好，说明适当加入激动素 KT 对继代苗的增值有较好的促进作用，增值效果最好，增值倍数达到了 4.0。表 4生长调节物质对对叶百部增值效果的影响培养基 6-BA KT NAA IBA 平均苗高增值倍数 芽苗生长情况编号 mg/L mg/L mg/L mg/L cm 8 1.0 0.2 2.1 1.5 长势差，部分叶片组织坏死 2.0 0.2 2.6 2.0 长势较好，叶色正常 1.0 0.3 4.5 2.5 叶色正常，芽苗较壮 2.0 0.3 3.4 2.8 叶色正常，芽苗较壮 3.0 0.3 3.9 3.5 产生部分丛生芽，芽苗粗壮 1.5 1.00.2 4.2 4.0 产生较多丛生芽，芽苗粗壮4、生根培养无菌条件下，将继代材料切成 12cm，接种于不同生根培养基中，接种后置于弱光条件下培养 5，后置于日光灯下培养，40后统计并观察生根诱导结果，试验结果见表 5。可以看出，以 1/2 改良 MS 为基本培养基，只添加 NAA 时，随其浓度的增加生根率有增高的趋势，但生根率均不太高，均在 35.0%以下；只添加 IBA 时，生根率也是随着浓度的提高而提高，生根效果得了的改善，生根率最高达到了70.3%； NAA 和 IBA 组合的培养基对生根的作用有明显促进作用，生根率均在 58.0%以上，最高生根率达到 90.0%，取得了较好的生根效果。表 5不同生根配方对生根诱导效果的影响培养基NAA IBA AgNO 3 生根率 编号 mg/L mg/L mg/L %1.5 0.518.32.0 0.528.52.5 0.535.01.00.511.62.00.556.23.00.570.32.0 0.50.558.02.0 1.00.590.05、生根苗的移栽为探讨不同移栽基质对对叶百部的移栽效果，该试验根据不同基质的透气性和保水保肥能力，选用草炭、黄心土和河沙为材料，进行 4 个处理。移栽 50后，开始统计并观察移栽结果，试验结果见表 6。可以看出，移栽 50后，移栽存活率以号基质最高，移栽存活率为 99.0%，其次分别为号基质、号基质、号基质，移栽存活率分别为 93.3%、86.7%、76.7%；而平均苗高增幅也以号基质最高，平均苗高增幅为 8.8cm，其次分别为号基质、号基质、号基质，平均苗高增幅分别为97.4、5.8、4.7cm。可见，以草炭为移栽基质，可获苗木存活率为 99.0%，平均苗高为8.8cm。表 6试验基质对移栽效果的影响处理基质移植株数50存活率栽植时平均苗高50平均苗高平均苗高增幅株% cm cm cm 草炭3099.04.313.18.8黄心土3086.74.411.87.4河沙3076.74.4 9.14.7黄心土+河沙（1:1） 3093.34.210.05.8综上所述，以 0.1%氯化汞溶液为消毒剂，最佳消毒时间为 14min，外植体的污染率仅为 5.9%。以木质化程度较轻或未木质化的带侧芽茎段为外植体进行初始诱导效果较好。以改良 MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L 为最佳诱导培养基，诱导率为80.0%。以改良 MS+6-BA 1.5mg/L+KT 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L 为最佳继代增值培养基，增值倍数为 4.0，芽苗粗壮。以 1/2 改良 MS 为基本培养基，只添加 NAA 或 IBA 时，随着浓度的增加生根率有所增高，但生根率均不理想，NAA 和 IBA 组合的培养基对生根有明显促进作用，生根率均在 58.0%以上，最高生根率达到 90%，取得了较好的生根效果。组培苗室外移栽过程，不同得基质对苗木得生长有着不同的影响，对叶百部组培生根苗选用草炭作为移栽基质移栽效果最好，移栽存活率为 99.0%。（六）栽培技术 1、肥料准备植株在有机质含量高、有益微生物多的环境中生长，根系膨大快，有效成分含量高。磷、钾元素有利于提高植株的抗性，促进根系膨大。氮元素多时，藤蔓长势强旺。因此，应当以农家肥、生物有机肥为主，优质复合肥为辅。农家肥必须充分腐熟才能使用，应当在种植前 30 天以上，一次备足堆沤，以不误农时。按每亩禽畜粪 1000 公斤、磷肥 200 公斤的量拌匀，淋湿润，以手握指缝见水为度，起堆后盖上黑色地膜，边缘用泥土压实堆沤。当粪堆中心温度达 70左右、堆沤达 20 天以上时进行翻堆，将上层翻于下层，边层翻于内层，翻堆次数视肥料充分腐熟细碎而定，加入生物菌种一同堆沤，能提高肥效、抑制有害菌。2、开垦、整地、施肥对叶百部为多年生块根植物，多条根系从任意方向呈 45 度向土壤深层生长，块根10一般长达 0.3 米，迅速膨大。因此，荒地应铲除地上植被，火烧炼地，翻耕 0.4 米以上深。已种植过块根类作物的园地，亩撒 150 公斤石灰消毒灭菌，解决连作障碍。机械耕地，机械扒平，撒施肥料，机械起畦 2 米宽。将园地整成 2 米宽0.3 米高的畦，畦长视地形而定。山地应横向整畦，避免雨水冲蚀造成水土流失。畦与畦间隔 0.3 米。整成畦后光照面积宽，能提升根部的土壤温度，有效促进根部膨大。施基肥采用穴施法或撒施法。3、种植时间在北回归线以南的区域，11 月的温度一般维持在 20-24，最适合植物生长，小苗能尽快度过缓苗期，因此种植成活率高。随着气温逐步降低，植物地上部分逐渐停止生长，但是地下的根系仍在生长，吸收大量养分储存在植物体内，因此第二年生长迅速。在气温偏低的地区，3-4 月份气温逐步回暖，是该区域种植的最佳季节。种植过早小苗易受寒害、种植过晚则苗期无法避开高温干旱天气，增加管理难度。种植时，避开强烈阳光和降雨天气，选择暖和的晴天下午或阴天种植。4、种植密度植株为草质藤本，覆盖面宽，如果种植过密，影响植株通气透光。种植过稀时，没有合理利用土地，单位面积产量低。实践证明，每亩种植 1360 株利用空间较合理，株行距为 0.7 米0.7 米。（七）病虫害防治持续高温干燥的气候条件，对叶百部易发生红蜘蛛病害。经常观察植株叶片，放大镜下观察叶背有细小的虫体在爬动，受害叶片最初出现白色小斑点，后褪绿变为黄白色，严重时变锈褐色似火烧，造成叶片脱落早落，甚至植株烂根枯死。发病初期喷施阿维菌素、哒螨灵等生物农药防治红蜘蛛，病情严重时应全园连续使用 23 次，每次间隔 57 天，喷药时尤其注意喷好叶背。（八）药材采收对叶百部必须种植 3 年以上，块根才能达到市场需要的粗度、满足加工企业对有效成分含量的要求。植株枝叶中的养分在秋、冬季自然回流至块根，能显著促进块根膨大，提高块根有效成分含量。因此，采挖时间在 10 月至 12 月为宜，宜采用机械采挖药材以提高功效，保证药材块根完整。采挖出的药材用高压水枪冲洗泥沙，然后装11筐出售。（九）质量要求对叶百部药材质量“从严从高”要求，首先应符合中国药典一部（2015 年版）“百部”项下规定；同时对其农药残留量和重金属限量要求，即应符合 WM/T 2-2004 药用植物及制剂外经贸绿色行业标准。（十）档案记录档案是生产单位在两面针生产全过程中形成的产物，是规范化种植档案的文件来源，是生产单位实施两面针规范化生产的依据和凭证，是药材质量溯源的重要文件。因此，规定对生产技术、病虫害防治、采收加工中各环节所采取的措施进行详细记录，建立档案。六、与现行法律法规和标准关系本标准（征求意见稿）制定是遵循中华人民共和国标准化法等国家相关的法规和强制性标准，结合地方实际情况制定出来的，因此，与现行法律、法规及强制性标准无冲突。七、参考文献1袁建龙，浦益琼，张彤，等.百部生物总碱的提取纯化工艺研究 J. 中药材,2011， （1）：126129.2 朱华，郭晓恒，王孝勋，等 . 广西产百部的资源与生境调查J. 安徽农业科学，2012， （5）：2638-2639.3 王孝勋，朱华，蔡毅，等. 手持式GPS 在对叶百部资源调查中的应用 J. 安徽农业科学 2010， （14）：7690-7691，7693.4 李俊松，张彤，浦益琼，等 . 中国药典一部中百部基源的研究J. 中药材，2011， （11）：1700-1703.5 南京中医药大学.中药大辞典M. 上海科学技术出版社， 2006年版1177-1180.6 张彤等.直立百部、蔓生百部生物碱含量测定J. 上海中医药大学 ,2006年12月。7 刘军，郑霞. 不同产地对叶百部中生物碱的差异J. 黑龙江中医药， 2009， （3）：45.8 白燕远，笪舫芳，甘静玉，等 .广西不同产地对叶百部水浸物、水分及灰分测J. 广西中医12药大学学报, 2012，15（3）：41-43.9 胡君萍，张囡，毛一卿，等 .中国药典3种百部止咳的作用比较J. 中国中药杂志, 2009， （23）：3096-3103.10 陈玉菡，刘旭，罗川，等. 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