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专题二 微生物的培养与应用,课题2 土壤中分解尿素细菌的 分离与计数,1,课题背景,尿素是一种重要的农业氮肥，尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将 之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成 。,2,研究思路,1、选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作 。 2、筛选尿素分解菌的选择性培养基以 为唯一氮源 。,(一)筛选菌株,3,(二)统计菌落数目,1、测定微生物数量的常用方法有 和 。,2、稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置 个平板，选择菌落数在 的平板进行计数，并取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。,4,(三)设置对照,设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,5,实验设计,1、土壤取样： 土壤中的微生物，大约70%90%是细菌，细菌适宜在酸碱度接近 的潮湿土壤中生长 ，绝大多数细菌生活在距地表 的土壤层。 2、样品的稀释： 测定土壤中细菌的数量，一般选用 。 测定放线菌的数量，一般选用 。 测定真菌的数量，一般选用 。,6,3、微生物的培养与观察,不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。 细菌 。 放线菌 。 霉菌 。,每隔 统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致一楼菌落的数目。一般来说，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），同种微生物表现出稳定的 。这些特征包括 。,7,菌落数量的估算： 计算每克样品中的菌落数= 。 其中，C代表 ， V代表 ， M代表 。,操作提示 1、无菌提示： （1)取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 (2)应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 (3)在稀释土壤的过程中，每一步都在火焰旁操作。 2、做好标记 3、制定计划,8,课题延伸,原理：尿素分解菌合成的 可以将尿素分解成 ，会使培养基的碱性增强。因此，可通过检测培养基 变化来鉴定该种细菌能否分解尿素 方法：以尿素为唯一氮源的培养基中入 ，如果pH升高，指示剂将变 。,9,
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