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天然活性成分的层析纯化策略,1,层析方法：正相硅胶 优点：经济、可常压操作、加压可提高效率 局限性：不可逆吸附、使用大量有害有机溶剂、国产硅胶验证文件不健全,2,层析方法：反相硅胶 优点：常用于检测、少量制备，有硅胶基架的C4，C8，C18以及聚苯乙烯基架的SOURCE介质多种选择，分辨率高。 局限性：成本高，介质昂贵、放大生产困难,3,层析方法：大孔树脂 优点：常用于组分粗提、流速快、经济、吸附少 局限性：选择性少，验证文件不健全。合成原料及溶剂残留问题；缺乏公认统一的药用标准、条件的规范化、重现性,4,层析方法：聚酰胺 优点：多用于提纯黄酮、内酯类成分 局限性：流速慢，验证文件不健全,5,层析方法：超临界萃取 优点：快速、回收率高、CO2成本低、无需处理有机溶剂 局限性：设备成本高，强极性物质提取受限制,6,层析方法：葡聚糖凝胶 优点：适合含羟基、氨基、羧基、芳香环的苷类、黄酮、多酚、丹宁等。可多次使用 局限性：流速慢，比硅胶更适合亲水性物质，可与硅胶为互补技术。,7,层析方法：离子交换 优点：适合生物碱、有机酸等的分离。有些阴离子交换介质也适合苷类、皂苷、黄酮纯化，可多次使用 局限性：受制于带电荷物质,8,纯化平台：生物碱 平台技术：PH3的酸水提取阳离子交换 SP Sepharose HP 中、高压硅胶反相 生物碱带碱性，在传统的硅胶或氧化铝层析上效果往往不理想。 SP Sepharose HP 载量高、易于直接放大，对生物碱有特殊的选择性，可从酸水粗提物中分离结构近似的十几种生物碱，一步纯化可达60-80%的纯度。,9,纯化平台：生物碱 中、高压反相层析如Source15RPC或C18硅胶可将纯度提高到90%以上。 Source是以聚苯乙烯为基架的反相介质，可耐受1M强酸强碱，比传统的如反相介质使用范围更宽广，寿命更长。,10,纯化平台：有机酸 平台技术：PH11的碱水提取阴离子交换 Q Sepharose HP或Sephadex LH 20 中、高压硅胶反相 有机酸多成盐，亲水性强。带负电荷，经Q Sepharose HP一步纯化可达50%纯度，然后再上Sephadex LH 20 可至90%以上。,11,纯化平台：皂苷类 平台技术：PH11的碱水提取阴离子交换 Q Sepharose HP 中、高压硅胶反相 皂苷同时具有强极性的糖基和弱极性的母核。皂苷含羧基,12,纯化平台：黄酮苷类 平台技术：水和醇提取阴离子交换 Q Sepharose FF 去色素 Sephadex LH 20中、高压硅胶反相 Q Sepharose FF是去处植物色素的有效方法，可对提取物进行第一步纯化， Sephadex LH 20适合精细纯化,13,纯化平台：黄酮、醌、多酚类 平台技术：水和醇提取 Sephadex LH 20中、高压硅胶反相 Sephadex LH 20,14,纯化平台：内酯、萜类 平台技术：水和醇提取中、高压硅胶反相 管道化的加压硅胶层析可在密闭的环境下操作，大大提高生产速度、重复性、安全性、可控性。,15,纯化平台：蛋白质、活性肽、动物毒素 平台技术：Sepharose离子交换；Superdex/Sephacryl分子筛层析Source 反相层析 蛋白类物质在纯化时需留意保持其空间结构，避免失活，所以一般采取温和的离子交换和分子筛层析，寡肽分子则可使用反相层析,16,纯化平台：多糖 平台技术：水、醇提取穿透式Sepharose离子交换脱蛋白Superdex 200/Sephacryl 300-1000分子筛层析 一种药材里可以含有多种类型的多糖，其结构、性质、功效不一。如香菇中含有水溶性、酸溶性、碱溶性多糖，综合利用分子筛及离子交换层析可进一步获得各组分纯品。 多糖中的蛋白质可引起临床副反应，穿透式阴阳离子交换法可以一、两步快速去除多糖中残存的蛋白质，易于放大和自动化,17,
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