现代生物制药工艺学复习题.docx

现代生物制药工艺学生物药物：是指运用生物学、医学、生物化学等的研究成果，利用生物体、生物组织、体液或其代谢产物（初级代谢产物和次级代谢产物），综合应用化学、生物技术、分离纯化工程和药学等学科的原理与方法加工、制成的一类用于预防、治疗和诊断疾病的物质。生物药物的分类（1） 按照药物的化学本质和化学特性分类1、 氨基酸类药物及其衍生物 2、多肽和蛋白质类药物 3、酶类药物 4、 核酸及其降解物和衍生物 5、多糖类药物 6、脂类药物 7、维生素（2） 按原料来源分类1、 人体组织来源的生物药物 2、动物组织来源的生物药物 3、微生物来源的生物药物4、 植物来源的生物药物 5、海洋生物来源的生物药物 （3） 按功能用途分类1、 治疗药物 2、预防药物 3、诊断药物 4、其他用途药物的ADME药物在体内的整个过程通常用ADME表示。A表示吸收，即药物在生物体的吸收；D表示分布，即药物在生物体内的分布；M表示代谢，即药物在体内的代谢转化；E表示排泄，即药物及其代谢产物自体内的排除。新药研究开发的主要过程（1） 确定研究计划 （2）准备化合物 （3）药理筛选 （4）化学实验 （5）临床前I期 （6） 临床前II期 （7）I期临床 （8）II期临床 （9）III期临床 （10）注册申请上市（11）售后监测 新药研究方法影响因素试验加速试验(Accelerated testing)是在超常的条件下进行。其目的是通过加速药物的化学或物理变化，为药品审评、包装、运输及贮存提供必要的资料。长期试验(Long-term testing)是在接近药品的实际贮存条件252下进行，其目的是为制订药物的有效期提供依据。新药临床试验分为、期期（phase ）:初步临床药理学及人体安全评价试验。期（phase ）：是随机盲法对照临床试验。期（phase ）：是扩大的多中心临床试验。期（phase ）：是新药上市后监测。抗生素是生物在其生命活动过程中产生的（或并用化学、生物或生物化学方法衍生的），在低微浓度下能选择性地抑制他种生物机能的化学物质。抗生素的抗菌活性用最小抑菌浓度（MIC）表示。MIC可以在液体试管或固体平板上测量，在一系列含有培养基和实验微生物的试管或平板中，分别加入不同浓度的抗生素，能够抑制微生物生长的最低抗生素浓度即为MIC。抗生素的分类（按作用机制分类）（1） 抑制或干扰细胞壁合成的抗生素 （2）抑制或干扰蛋白质合成的抗生素 （3） 抑制或干扰DNA、RNA合成的抗生素 （4）抑制或干扰细胞膜功能的抗生素（5） 作用于能量代谢系统的抗生素青霉素结构（P53）青霉素发酵生产的一般流程（P59）氨基酸药物制备工艺过程及控制要点1、 称取新鲜的茧蛹，用组织粉碎机绞碎，以滤布或适宜的过滤器过滤，除去残渣。2、 滤液放入搪瓷罐内或适宜的容器内，按1:1的比例，加入400mol/L硫酸液，搅拌均匀，盖严。将容器放入高压锅内，通入蒸汽，以10高温高压水解8-10h。3、 取已水解的上清液少许，用双缩脲法检查，是否有肽键反应，如无兰红色的出现，说明水解反应已完成。4、 冷却后，用石灰乳中和硫酸，边加边搅拌，待中和到PH4.0时，要小心操作，继续用石灰乳中和，调节到PH值5.5即可。5、 趁热过滤，除去硫酸钙沉淀，向滤液中加入0.5%活性炭，煮沸5-10min，脱色除杂质。6、 再趁热过滤，得浅黄色溶液，并保持滤液温度在60-80，待含量测定后，调整溶液浓度为3%，搅匀，灌装，密封既得。氨基酸的分类（1） 根据氨基酸在PH=5.5溶液中带电状况可分为酸性、中性、碱性氨基酸三大类。（2） 按照氨基酸侧链的化学结构，可将氨基酸分为脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、杂环族氨基酸和亚氨基酸四大类。（3） 按氨基酸侧链基团的极性，把氨基酸分为极性氨基酸和非极性氨基酸两类。（4） 从对人体营养的角度，根据氨基酸对人体生理的重要性和人体内能否合成，将氨基酸分为必需氨基酸和非必需氨基酸两大类。胸腺激素工艺过程及控制要点（1） 将新鲜或冷冻胸腺除脂肪并绞碎后，加3倍量生理盐水，于组织捣碎机中制成匀浆，14000g离心，得提取液。（2） 提取液80加热15min，以沉淀加热不稳定部分。离心去掉沉淀，得上清液。（3） 上清液冷至4，加入5倍体积的-10丙酮，过滤收集沉淀，干燥后得丙酮粉。（4） 将丙酮粉溶于PH=7.0磷酸盐缓冲溶液中，加硫酸铵至饱和度为0.25，离心去除沉淀，上清液调PH值为4.0，加硫酸铵至饱和度为0.50，得盐析物。（5） 将盐析物溶于PH=8.0的10mmol/L tris-HCL缓冲液中，超滤，取相对分子质量在15000以下的超滤液。（6） 超滤液经Sephadex G-25脱盐后，冷冻干燥得胸腺素。胸腺肽工艺过程及控制要点（1） 取-20冷藏小牛胸腺，用无菌的剪刀剪去脂肪、筋膜等非胸腺组织，再用冷无菌蒸馏水冲洗，置于灭菌绞肉机中绞碎。（2） 将绞碎胸腺与冷重蒸馏水按1:1的比例混合，置于10000r/min的高速组织捣碎机中捣碎1min，制成胸腺匀浆。浸渍提取，温度应在10以下，并放置-20冰冻贮藏48h。（3） 将冻结的胸腺匀浆融化后，置水浴上搅拌加温至80，保持5min，迅速降温，放置-20以下冷藏2-3天。然后取出融化，5000r/min离心40min，温度2，收集上清液，除去沉渣，用滤纸浆或微孔滤膜减压抽滤，得澄清滤液。（4） 将滤液用相对分子质量截流值为10000以下的超滤膜进行超滤，收取相对分子质量10000以下的活性多肽，得精制液，置-20冷藏。经检验合格，加入3%甘露醇作赋形剂，用微孔滤膜除菌，分装，冷冻干燥即得注射用胸腺肽。白蛋白制备工艺过程（1） 结合（利凡诺沉淀）。人血浆泵入不锈钢夹层反应罐内，开启搅拌器，用碳酸钠溶液调节PH=8.6，再泵入等体积的2%利凡诺溶液，充分搅拌后静置2-4h，分离上液与络合沉淀。（2） 解离。沉淀加灭菌蒸馏水稀释，0.5mol/L HCL调节PH值至弱酸性，加0.15%-0.2%氯化钠，不断搅拌进行解离。充分解离后，65恒温1h，立即用自来水夹层循环冷却。（3） 分离。冷却后的解离液用篮式离心机分离，离心分离液再用不锈钢压滤器澄清过滤。（4） 超滤。澄清滤液以Sartocon-IV超滤器浓缩。（5） 热处理。浓缩液在60恒温处理10h，灭活病毒。（6） 澄清和除菌。以不锈钢压滤器澄清过滤，再通过Sartoltis冷灭菌系统除菌。（7） 分装。白蛋白含量及全项检查合格后，用自动定量灌注器进行分瓶灌装或冷冻干燥得白蛋白成品。人血丙种球蛋白制备工艺过程（1） 取利凡诺PH=8.6沉淀后的上清部分，在不锈钢反应罐中开启搅拌器，并以1mol/L盐酸调PH=7.0，加23%结晶硫酸铵，充分搅拌后沉淀静置4h以上。（2） 虹吸上清液，将下部混悬液泵入篮式离心机中离心，得沉淀。（3） 将沉淀用适量无热原蒸馏水稀释溶解，在不锈钢压滤机中进行澄清过滤。（4） 以Sartocon-IV超滤器浓缩、除盐。（5） 浓缩液在除菌后，静置于2-6冷库中存放1个月以上。（6） 以不锈钢压滤器澄清过滤，再通过Sartolis冷灭菌系统除菌。（7） 丙种球蛋白含量及全项检查合格后，灌封机分装，即得人血丙种球蛋白成品。干扰素是由诱生剂诱导有关细胞所产生的一类高活性、多功能的诱生蛋白质。干扰素的分类（根据其来源细胞不同）分为白细胞干扰素（IFN-）、类淋巴细胞干扰素（IFN-与IFN-的混合物）、成纤维细胞干扰素（IFN-）、T细胞干扰素（IFN-）等几类。 IFN-型干扰素又以其结构不同再分为IFN- I b、IFN- II a、 IFN- II b等亚型。干扰素的作用（1） 抑制病毒等细胞内微生物的增值；（2）抗细胞增值；（3）通过作用于巨噬细胞、NK细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞而进行免疫调节；（4）改变细胞表面的状态，使负电荷增加，组织相容性抗原表达增加；（50增加细胞对双链DNA的敏感性。抗生素的工艺过程（P168）（1） 分离灰黄层。取新鲜血液，加入ACD抗凝剂，离心后分离出血浆，小心吸取灰黄层。(2)氯化铵处理。每份灰黄层加入30mL缓冲盐水，再加入9倍体积量的冷的氯化钠溶液，混匀，4放置10min，然后在4离心20min。（3）启动诱生。取稀释的细胞悬液加入白细胞干扰素，使其最后浓度为100ug/mL，置37水浴搅拌培养2h。（4）正式诱生。启动后的白细胞加入仙台病毒，使其最后浓度为每毫升100-150血凝单位，在37搅拌培养过夜。（5)收获。将培养物离心30min，吸取上清液即得粗制干扰素。IL-2的工艺过程（P179）（白细胞介素-2）（1） 诱生。用鸡瘟病毒和PHA联合刺激人外周血白细胞，37培养。（2） 病毒灭活和固液分离。用6mol/L HCL调节PH=2.0-2.再用6mol/L NaOH调回到PH=7.2-7.4，离心除去变性杂蛋白。（3） 硫酸铵分级沉淀。取上述离心后的培养上清液，加饱和硫酸铵至35%饱和度，4静置4h，离心弃去沉淀。上清液补加固体硫酸铵至85%饱和度，4静置24h，离心，收集沉淀。（4）除盐。将沉淀溶于10mmol/L PBS中，PH=6.5。对10mmol/L PBS透析24h。（5） 蓝色琼脂糖层析。将上述透析内液通过Sepharose 4B 层析柱，用200mL起始PBS洗去不吸附的蛋白，再用含0.4mol/L NaCL的PBS洗涤亲和柱，最后用含1.0mol/L NaCL的PBS解吸IL-2活性组分。（6）凝胶层析。将解吸的IL-2活性组分经PEG浓缩，再上ACA44Ultrogel层析柱。用含0.1%PEG、0.2%正丁醇和PH=7.6的0.5mol/L甘氨酸的0.2mol/L tris-HCL洗脱，得IL-2。药用酶的分类（根据药用酶的临床用途)分为；（1） 促进消化酶类 如蛋白质、糖类和脂类等。（2） 消炎酶类 如溶菌酶、菠萝蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等。（3） 与治疗心脑血管疾病有关的酶类 如链激酶、尿激酶、纤溶酶、凝血酶等。（4） 抗肿瘤的酶类 如天冬酰胺酶、谷氨酰胺酶、蛋氨酸酶、酪氨酸氧化酶等。（5） 与生物氧化还原电子传递有关的酶 如细胞色素C、超氧化物歧化酶、过氧化物酶等。（6） 其他药用酶 如青霉素酶、有机磷解毒酶等。尿激酶的工艺过程（1） 收尿 收集男性尿，所收集的尿液应在8h内处理。（2） 沉淀处理 尿液冷至10以下，用NaOH调至PH=8.5，静置1h，虹吸上清液。用盐酸调至PH=5.0-5.5。（3） 硅藻土吸附 处理好的尿液加入1%尿量的硅藻土，于5以下搅拌吸附1h。（4） 洗脱 硅藻土吸附物用5左右冷水洗涤，然后装柱，先用0.02%氨水加0.1mol/L氯化铵洗脱，当洗脱液由清变浑时开始收集，每吨尿约可收集15L洗脱液。（5） 除热原和色素 上述收集液用饱和磷酸二氢钠调PH=8.0，加氯化钠调电导相当于22M-1,通过QAE-Sephadex层析柱，收集流出液。（6） CM-C浓缩 上述收集液用1mol/L 醋酸调PH=4.2，以蒸馏水调电导到相当于1-17M-1通过CM-C层析柱。然后用10倍床体积量的PH=4.2的醋酸-醋酸钠缓冲液洗涤柱床后，改用0.1%氨水加0.1mol/L氯化钠洗脱尿激酶，分步收集流出液。（7） 透析除盐 洗脱液于4对水透析24h，透析液离心去沉淀，冻干即得成品。超氧化物歧化酶（SOD）的工艺过程（1） 收集红细胞 取新鲜牛血，离心除去血浆，收集红细胞。（2） 溶血、去血红蛋白 干净红细胞加水溶血30min，然后加入0.25倍体积的95%乙醇和0.15倍体积的氯仿，搅拌15min，离心去血红蛋白，收集上清液。（3） 沉淀、热变性 将上述清液加入1.2-1.5倍体积的丙酮，产生大量絮状沉淀，离心得沉淀物。再将沉淀物加适量水，离心去不溶物，上清液于60-70热处理10min，离心去沉淀得浅绿色的澄清液。（4） 柱层析、洗脱、超滤浓缩 将上述澄清液超滤浓缩后小心加到已用2.5mmol/L、PH=7.6磷酸缓冲液平衡好的DEAE-SephadexA-50柱上吸附，并用PH=7.6的2.5-50mmol/L 磷酸缓冲液进行梯度洗脱，收集具有SOD 活性的洗脱液。（5） 冷冻干燥 将上述洗脱液再一次超滤浓缩、无菌超滤、冷冻干燥得Cu、Zn-SOD成品。t-PA(组织纤溶酶原激活剂）的工艺过程（P213）（1）培养基。主要为Eagle培养基。（2）t-PA抗体制备。取人t-PA或猪心t-PA免疫家兔，按每只家兔2000-3000ug计，用福氏完全佐剂充分乳化注入家兔皮下，每隔两周再用100ug t-PA加强免疫，共加强两次，然后取家兔血清，用50%硫酸铵盐析，沉淀，于0对生理盐水透析及SephadexG-75柱层析，得抗t-PA的免疫球蛋白G(IgG)。（3） 抗t-PA亲和吸附制备。取Sepharose4B用10倍体积蒸馏水分多次漂洗，布氏漏斗抽滤，称取20g湿凝胶于500mL三颈烧瓶中，加蒸馏水30mL，搅匀后，用2mol/L NaOH溶液调PH=11，降温至18。（4） 细胞培养。将人黑色素瘤种质细胞按常规方法消化分散后，洗涤，计数，稀释成细胞悬浮液，备用。（5） t-PA的分离。向上述收集的细胞培养液中加入蛋白酶抑制剂至50KIU/mL 及吐温-80至0.01%，滤除沉淀。（6） 精制。将上述t-PA浓缩液进SephadexG-150柱，然后用含0.01%吐温-80的1mol/L NH4HCO3溶液以2-3mL/min流速洗脱，并以每管10mL体积分步收集，合并t-PA洗脱峰，于冻干机中冻干即得t-PA精品。维生素C两步发酵法工艺流程辅酶Q工艺流程微生物转化的特点（1） 可减少化学合成步骤，简化生产设备，缩短生产周期。（2） 可提高产物得率和质量，降低成本。（3）可进行化学法难以进行的反应。（4） 其他生物虽能产生这类羟化酶，但微生物产生的酶系种类最多。（5） 可改善工人的劳动条件，避免或减少使用强酸、强碱或有毒物质。微生物转化的反应类型羟基化反应、C-1,2脱氢反应、环氧化反应、A环芳构化反应、还原反应、水解反应、侧链降解。疫苗的定义用于人工自动免疫的抗原性制剂，大部分由病原微生物直接制成。亚单位疫苗是指利用病原体的某一部分通过基因工程克隆而制得的疫苗。活体重组疫苗是指通过基因工程的方法 ，对非致病微生物进行改造，使之携带并表达某种特定病原体的抗原决定簇基因，产生免疫原性或通过基因工程的方法修饰或删除致病性微生物的毒性基因，使之仍保持免疫原性所制成的疫苗。核酸疫苗是把外源基因克隆岛真核质粒表达载体上，然后将重组的质粒DNA直接注射到动物体内，使外源基因在生物体内表达，产生的抗原激活机体的免疫系统，引发免疫反应。（包括DNA疫苗和RNA疫苗）核酸疫苗(nucleic acid vaccine)包括DNA疫苗和RNA疫苗两种，是由编码引起保护性免疫反应的病原体抗原的基因片段和载体构建而成。生物制品的功能及分类（1） 预防用生物制品-疫苗 （病毒性疫苗、细菌类疫苗、联合疫苗、类毒素）（2） 治疗性生物制品 （抗毒素及免疫血清、血液制品、细胞因子制品）（3） 诊断用生物制品 （体外诊断用品、体内诊断制品）蛋白质含量测定的方法（1） 凯氏定氮法（2）双缩脲法（3）酚试剂法（4）紫外吸收法安全试验（一般要求抓好以下三个方面)一是毒种或主要原材料的检查；二是半成品的检查；三是成品检查。免疫力试验（1） 定量免疫定量攻击法（2）变量免疫定量攻击法（3） 定量免疫变量攻击法（4）被动保护力测定卡介苗生产（1） 表面培养 采用改良的苏通培养基，生产的卡介苗活力高。用培养6-8天的幼龄苗，有利于制备冻干制品，采用对数生长期的幼龄培养菌代替平衡期培养菌生产，可使活菌率由10%左右提高至30-50%（2） 深层培养 培养基；利用无热原蒸馏水配制培养基。种子培养；将保存于苏通培养基上放入原代种子，接入上述培养基中增殖传代2次，于37培育7天后移种。深层培养；将上述种子移至装有6L培养基的8L双臂瓶中，于37培养7-9天，通气电磁搅拌。然后超滤、浓缩为10-15倍的菌苗，加入等量25%乳糖水溶液后混匀。以1mL量分装安瓿冻干，真空封口，贮于-70备用。乙肝病毒（HBV）基因在真核细胞中的表达有4条途径（1） 将HBV的S、S2或S1基因重组质粒转化酵母，用重组酵母生产HB疫苗。（2） 将S、S2或S1基因重组质粒转化哺乳动物细胞。（3） 将S、S2或S1基因插入痘苗病毒DNA非必需区，传染中华地鼠卵巢细胞，大量培养该动物细胞株生产HB疫苗。（4） 将S、S2或S1基因插入昆虫核多角体病毒DNA非必需区，转染家蚕和蝶蛹生产HB疫苗。1. 药物 系人类在同疾病作斗争的过程中，积累起来的对疾病有诊断、治疗和预防作用的物质。2. 药材 系指来源于自然界未经加工的植物、动物和矿物原料药。3. 主药 指在处方中起主要疗效的药物。4. 辅药 指在处方中协助主药的疗效或防止主药不良反应的药物。5. 非处方药（Over The Counter，简称OTC） 疗效确切，不良反应小，剂量容易掌握，可不经医生开处方，直接在药店购得的药物称非处方药。6. 处方药 有些药物，虽然疗效确切，但不良反应大，或剂量不易掌握，稍有不慎或疏忽，就可能出现伤害机体或危及生命的事故，药店不能随便出售，需凭医生开的处方购得，故称处方药。 7. 处方 是医疗和药剂的一项重要书面规定。即医生为患者开写的给调剂室的有关制备和发出药品的书面通知。广义而言，凡制备任何一种药剂的书面规定，皆称为处方。8. 首过效应：被胃、肠吸收的药物经由肝门静脉，进入肝继而进入体循环。药物吸收通过胃肠道粘膜时，可能被粘膜中的酶代谢。进入肝后，亦可能被生物转化，药物进入体循环前的降解或失活称为“首过代谢”或“首过效应”。 9. 生物药物是指运用生物学、医学、生物化学等的研究成果，从生物体、生物组织、细胞、体液等，综合利用物理学、化学、生物化学、生物技术和药学等学科的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。 10. 药物制剂稳定性(stability)是指某一特定包装的处方制剂保持其物理、化学、微生物学稳定性，以及保持其疗效和体内安全性的能力。药物制剂的基本要求是安全、有效、稳定。11.例如某药物制剂，在40、50、60、70四个温度下进行加速实验，测得各个时间的浓度，确定为一级反应，用线性回归法求出各温度的速度常数，结果见表2-1。t/1/T103k105/h-1lgk403.1922.66-4.575503.0947.94-4.100603.00122.38-3.650702.91356.50-3.248将上述数据（lgk对1/T）进行一元线性回归，得回归方程：lg k = - 4766/T + 10.64E = - (- 4766) 2.303 8.319= 91309.77 (J/mol) = 91.31 (kJ/mol)求25时的klgk = - 4765.98/298+10.64k25 = 4.43410-6 h-1t0.9= 0.1054/K25=2.71年 研究药物制剂稳定性的任务，就是探讨影响药物制剂稳定性的因素与提高制剂稳定化的措施，同时研究药物制剂稳定性的试验方法，制定药物产品的有效期，保证药物产品的质量，为新产品提供稳定性依据。12.研究药物制剂稳定性的意义 为了保证包装后的药品在其有效期内稳定，在药品的开发初期就应开始对处方及包装进行稳定性研究，积累资料，并且一直延续到该药品上市以后。13. 影响药物制剂分解的因素很多，从处方因素与外界因素两个方面来讨论。一、处方因素对药物制剂稳定性的影响及解决方法制备任何一种制剂，首先要进行处方设计，因处方的组成对制剂稳定性影响很大。pH、广义的酸碱催化、溶剂、离子强度、表面活性剂、某些辅料等因素，均可影响易于水解药物的稳定性。 （一）pH的影响 许多酯类、酰胺类药物常受H+或OH-催化水解、这种催化作用也叫专属酸碱催化（二）广义酸碱催化的影响有些药物也可被广义的酸碱催化水解。许多药物处方中，往往需要加入缓冲剂。（三）溶剂的影响 对于水解的药物，有时采用非水溶剂如乙醇、丙二醇、甘油等而使其稳定。（四）离子强度的影响 在制剂处方中，往往加入电解质调节等渗，或加入盐（如一些抗氧剂）防止氧化，加入缓冲剂调接pH。（五）表面活性剂的影响 一些溶剂水解的药物，加入表面活性剂可使稳定性的增加。但要注意，表面活性剂有时使某些药物分解速度反而加快，六）处方中基质或赋形剂的影响 一些半固体剂型如软膏、霜剂，药物的稳定性与制剂处方的基质有关。二、外界因素对药物制剂稳定性的影响 外界因素包括温度、光线、空气（氧）、金属离子、湿度和水分、包装材料等。这些因素对于制订产品的生产工艺条件和包装设计都是十分重要的。（1） 温度的影响 一般来说，温度升高，反应速度加快。（二）光线的影响 光是一种辐射能，辐射能量的单位是光子。光子的能量与波长成反比，光线波长越短，能量越大，故紫外线更易激发化学反应，加速药物的分解。（三）空气（氧）的影响一方面是氧在水中有一定的溶解度。另一方面在药物容器空间的空气中，也存在着一定量的氧，各种药物制剂几乎都有与氧接触的机会。（四）金属离子的影响微量金属离子对自动氧化反应有显著的催化作用。湿度和水分的影响。水是化学反应的媒介，固体药物吸附了水分以后，在表面形成一层液膜，分解反应就在膜中进行。包装材料的影响。 包装设计就是要排除这些因素的干扰，同时也要考虑包装材料与药物制剂的相互作用。三、药物制剂稳定化的其它方法（一）改进药物剂型或生产工艺1. 制成固体剂型2. 制成微囊或包合物3. 采用直接压片或包衣工艺（二）制成难溶性盐14.无菌检查法系用于确定要求无菌的生物制品、原料、敷料及要求无菌检查的其他品种是否无菌的一种方法。15.预防用生物制品按所用材料一般分细菌性疫苗、病毒性疫苗及类毒素三大类。 16. 疫苗的基本性质包括免疫原性、安全性和稳定性.17. 鼠源性单克隆抗体的改造 目的：一是降低免疫源性；二是降低相对分子量，增加组织通透性。 原理：抗体同抗原结合的功能决定于抗体分子的可变区（V），同种性免疫源性则决定于抗体分子的稳定区（C）。18. 大量生产单克隆抗体的方法主要有两种：体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞，从上清中获取单克隆抗体。体内接种杂交瘤细胞，制备腹水或血清。19.青霉素发酵培养基：碳源、氮源，前体、无机盐。20.青霉素发酵工艺 （1）种子制备种子制备阶段以生产丰富的孢子（斜面和大米孢子培养）或大量健壮的菌丝体（种子罐）为目的。应该保持最适生长条件。 在工业生产中，种子制备的培养条件及原材料质量均应严格控制以保持种子质量的稳定性。 （2）发酵培养 发酵中pH值一般控制在6.46.6。发酵温度前期2526，后期23，以减少后期发酵液中青霉素的降解破坏。发酵液中溶氧量不低于饱和溶解氧的30%，通气比一般为1:0.8vvm（3）发酵后处理 过滤：采用鼓式真空过滤器，过滤前加去乳化剂并降温。提炼：用溶媒萃取法。脱色：在二次BA提取液中加活性炭150300/10亿单位，脱色、过滤。结晶：用丁醇共沸结晶法。25. 转移因子能将供者细胞免疫信息转移给受者，一种低分子多核苷酸与低分子多肽的复合物，即转移因子。