《动物育种学实习》PPT课件.ppt

2020/5/13,动物育种学实习,李英20110655010,2020/5/13,胚胎移植技术,胚胎移植是胚胎生物工程的基本技术。其余胚胎生物工程技术如如胚胎分割、胚胎性别鉴定、体外受精和早期胚胎的冷冻保存等，都需要胚胎移植技术做基础。由于附植前的早期胚胎很容易由子宫取出，且经人为处理，可以再送入子宫继续发育，故胚胎移植中的胚胎主要是早期胚胎。一、概述二、胚胎移植原理、操作原则和基本条件三、胚胎移植的技术程序,2020/5/13,一、概述,(一)胚胎移植的概念胚胎移植（embryotransfer,ET）是直降遗传品质优良的母畜经超数排卵处理，发情后配种或人工授精，将其在其胚胎（体内产生的胚胎，一般为桑葚胚或囊胚），经过检查处理，移植到生理状态相同的同属不同种的母畜生殖道内，使胚胎继续发育直到产仔的技术。,2020/5/13,（二）胚胎移植的概况,一、国外研究现状1890年英国剑桥大学WalterHeape首次将胚胎移植技术在兔子上实验成功到今天，已有100多年的研究历史。20世纪30年代后，这项技术在各种家畜的应用上均获得了成功，主要有绵羊、山羊、猪、牛、马等。60到70年代胚胎移植技术的研究和推广迅猛发展，英、美、法、西德、加拿大、日本、前苏联、中国均建立了牛胚胎移植的科研和企业机构。1975年1月在美国科罗拉多州召开了第一届国际胚胎移植学会成立大会，进行学术交流，并规定每年召开一次交流会，这标志着胚胎移植技术进入了更高的发展阶段。自1972年世界上第一个胚胎公司在加拿大阿尔伯达省诞生以来，发达国家胚胎工程技术研究主要由公司来承担，这一直是发达国家胚胎工程研究与开发的大趋势，数十年没有改变,2020/5/13,二、国内研究现状我国的奶牛改良及繁育技术研究起源于19世纪60年代，从那时起我国从国外输入少量的荷斯坦奶牛（黑白花牛）与当地的母黄牛进行杂交，通过培育，形成了黑白花奶牛。此后又不断从国外引进优良种公牛与原有黑白花奶牛杂交。经过几十年的努力，农业部在1992年将“中国黑白花奶牛”正式命名为“中国荷斯坦奶牛”。目前中国荷斯坦奶牛已成为我国人民提供所需鲜奶和奶制品的主要品种。但直到现在，中国荷斯坦奶牛的种群品质仍较差，高产奶牛种群极少。当前，国际上奶牛体外受精（IVF）胚胎产业化方面的研究和实践已经取得了突飞猛进的进展，使大规模、低成本、快速地繁殖良种奶牛成为可能。,2020/5/13,（三）目的和意义,（1）发挥优良母畜的潜力（2）加速品种改良，扩大良种畜群（3）诱发牛怀双胎（4）代替活畜运输（5）利于品种资源保存（6）防疫需要和克服不孕（7）研究手段胚胎移植是研究受精生物学、遗传学、细胞学、动物育种学、免疫学以及繁殖生理学等理论问题的一种很好的手段。,2020/5/13,二、胚胎移植原理、操作原则和基本条件,（一）胚胎移植的原理胚胎移植要从多方面的因素来考虑：（1）母畜发情后的生殖器官的孕向发育（2）早期胚胎的游离状态（3）胚胎和受体的联系（4）胚胎移植与免疫耐受性（5）胚胎移植的遗传特性,2020/5/13,（二）胚胎移植的原则1.胚胎移植前后环境的同一性这种统一性的含义是指胚胎移植后的生活环境和胚胎的发育阶段相适应，简言之为三同：同种、同期、同位。（1）供体和受体分类学上的相同属性（2）生理上的一致性（3）解剖部位的一致性2.胚胎采集的期限理论上讲，不能超过黄体退化的时间，应在受体母畜周期黄体退化之前数日进行。通常在供体母畜发情配种后38d内采集胚胎。受体母畜并在相同时间接受胚胎移植。3.胚胎移植的质量保证在胚胎移植的全部过程中，胚胎不应受到任何不良因素（物理、化学、微生物）的影响而降低生活力。,2020/5/13,（三）胚胎移植应具备的条件1.胚胎的来源丰富稳定而可靠的胚胎来源是胚胎移植的首要条件。为此，要具备优良品种的供体母畜和取得大量胚胎的方法。而后者是移植升值生产中存在的首要问题。没有丰富、稳定、可靠的胚胎来源，胚胎一直就失去了意义。目前，得到大量胚胎的常用方法是超数排卵技术，由于不同个体在不同季节对药物反应有差异，所以效果不稳定。2.技术条件胚胎移植技术人员需要具备一定的专业理论和技术操作水平。,2020/5/13,三、胚胎移植的技术程序,（一）供体、受体母畜的选择1.供体选择（1）供体应具备遗传优势（2）供体应具备良好的繁殖能力（3）供体应生长良好2.受体的选择受体母畜可选用非优良品种的个体或土种家畜，但也应具有良好的繁殖性能和健康状态，体型中等。在拥有大量母畜的情况下，可以选择自然发情与供体发情时间相同或相近的母畜，一般两者发情时间不宜超正负24小时。但这种状态下的受体母畜不容易找到，所以大都需要对供体和受体进行同期发情处理。,2020/5/13,（二）受体同期发情处理,受体的同期发情处理，要和供体的超数排卵处理同时进行。依据动物种类不同，每只供体按212只受体准备。发情同期化的标准，在绵羊和牛，以安静接受交配的时间计算。在山羊由于其发情持续期在个体间差异很大，所以发情终止时间起算。例如：山羊无论发情持续多久，其排卵时间一般是发情终止前46h或在发情终止时。小鼠的排卵同期化：可用小于超排剂量的PMSG或FSH诱导发情，然后注射HCG或LH诱导排卵。或用结扎输精管的公鼠交配，诱导其排卵。,2020/5/13,（三）供体的超数排卵,以牛为例来进行说明：（1）FSHPG超排方法：在母牛发情第911天，早晚各一次，每次注射FSH（中科院动物所产）量为，第1天1.5mg2，第2天1mg2，第3天0.6mg2，第4天0.4mg2，第3天早晨同时注射PGF2（0.4mg），发情后输精（或配种）日为零日，第67天由子宫冲取桑椹胚或早期囊胚。,2020/5/13,2020/5/13,（2）FSHCIDRPG超排方法：给供体牛阴道放入第一个CIDR，10天后取出第一个CIDR，同时放入第二个CIDR，第5d开始注射FSH，连续4天8次（量：不同厂家而定），在第7天注射FSH同时取出第二个CIDR，并肌肉注射PGF2，当CIDR取出后2448h发情。,2020/5/13,FSHCIDRPG超排方法,2020/5/13,（3）PMSG超排方法：首先用PGF2消除黄体，发情后第1617天，注射PMSG15003000IU，隔日注射hCG10001500IU，再次发情后输精，输精日为零日，第七天由子宫冲取桑椹胚或早期囊胚。方法一,方法一,2020/5/13,方法二,2020/5/13,（三）供体母畜的配种,经过超数排卵处理的母畜发情后应适时配种或人工授精。为了得到较多的发育正常的胚胎人工授精是应该使用或率高、密度大的精液，而将受精次数增加到23次，两次间隔时间810h。牛的授精可通过直肠检查掌握卵泡发育情况，第二次或第三次授精时，还可以检查有多少卵泡已破裂。,2020/5/13,（四）胚胎收集,1.手术法：一般为小家畜，沿腹中线开口，暴露子宫与输卵管（桑椹胚以前的胚胎由输卵管中、桑椹胚以后胚胎由子宫中冲取），常用PBS液冲取,手术冲胚法,裸露的卵巢,2020/5/13,手术冲胚法A.输卵管向伞部冲洗B.输卵管向子宫角冲洗C.子宫冲洗,A,B,C,2020/5/13,2.非手术法：适用于牛、马等大家畜。配种后68天于子宫中冲取。冲卵器分为三路式和二路式。,母牛非手术法冲胚法图,2020/5/13,（五）胚胎的检查,实体镜下（104）观察胚胎外形整齐、大小均一、卵裂球分布均匀，外膜完整，为可用胚胎。,2020/5/13,牛的异常胚胎示意图,2020/5/13,原核胚8细胞胚胎,2020/5/13,桑葚胚早期囊胚,2020/5/13,孵化囊胚,2020/5/13,（六）胚胎的保存和培养,低温或超低温条件下，胚胎代谢基本停止，可延长其体外存活时间。1等温度降低到05时即停止发育，可保存数日，仍可继续发育。2当温度达到-80时为超低温保存，可储存几个月。3用甘油、DMSO等抗冻剂，经一定程序降温后，于液氮中长期保存。4培养是在CO2培养箱中进行，设定温度牛为3839，羊为3839，兔为3738，鼠为37。,2020/5/13,（七）胚胎移植,1.手术法（主要为小家畜、实验动物）采用手术或腹腔内窥镜移植的方法。,2020/5/13,2.非手术法（牛、马等大家畜）采用直肠把握的方法进行移植的方法。非手术法：与输精方法基本相同，即直肠把握子宫颈，用移植器将胚胎注入子宫大弯处。手术法：前述冲胚方法相同，只是将胚胎从输卵管或子宫角导入。,2020/5/13,Theend谢谢观看！,