《中药的含量测定》PPT课件.ppt

第六章中药的含量测定,反映其制剂中有效成分、指标成分或毒性成分的含量衡量其制剂工艺的稳定性和中药制剂的质量优劣,2,常用定量分析方法方法学评价,3,结果表示,二丁颗粒本品每袋含紫花地丁以秦皮乙素（C9H6O4）计，不得少于1.8mg。二至丸本品每1g含女贞子以齐墩果酸（C30H48O3）计，不得少于8.0mg。十滴水本品每1ml含桉油以桉油精（C10H18O）计，不得少于6.3mg。七叶安神片本品每片含三七叶总皂苷以人参皂苷Rg3（C53H90O22）计不得少于5.0mg。左金胶囊本品每1粒含黄连以盐酸小檗碱（C20H18ClNO4）计，不得少于5.5mg。红景天本品按干燥品计算，含红景天苷（C14H20O3）不得少于0.50%,4,化学分析法紫外-可见分光光度法原子吸收光谱法薄层扫描法气相色谱法高效液相色谱,5,第一节化学分析法适用于含量较高的成分及无机成分的测定包括：重量分析和滴定分析无机药物、总生物碱、总皂苷等,6,一、重量分析挥发法：水分测定萃取法：地奥心血康胶囊中甾体总皂苷测定沉淀法：西瓜霜润喉片中西瓜霜测定,例西瓜霜润喉片中西瓜霜（以Na2SO4计）测定,精密取约18g，加水150ml，振摇，离心，滤过，水50ml分次洗涤，合并滤液，加盐酸1ml，煮沸，缓缓加热氯化钡试液水浴加热，静置，用无灰滤纸滤过，沉淀用水洗涤，至洗液不再显氯化物的反应，干燥，并炽灼至恒重，精密称定，与0.6086相乘，计算，即得。,7,二、滴定分析：含量1%以上酸碱滴定法：生物碱、有机酸、内酯类沉淀滴定法：含朱砂、红粉中药制剂配位滴定法：含Ca2+、Mg2+等矿物药制剂氧化还原滴定法：酚类、糖类及含Fe、雄黄等矿物药制剂,8,1滴定度（TT/A）计算,滴定度（TT/A）：每1ml某摩尔浓度的滴定液所相当的被测药物成分的质量（mg）,如：每1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相当于5.788mg的莨菪碱（C17H23NO3）,（mg/ml）,9,2.样品中被测成分的含量计算,直接滴定法测定：,返滴定法测定：,如：每1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相当于5.788mg的莨菪碱（C17H23NO3）,实际硫酸液浓度为0.01023mol/L,10,例颠茄酊中生物碱的含量测定（酸碱滴定法）精密取100ml，蒸发至约10ml，加乙醇适量使溶解，加0.1mol/L硫酸溶液10ml，用三氯甲烷分次提取，合并三氯甲烷液，用0.1mol/L硫酸溶液10ml洗涤，洗液并入酸液中。加浓氨试液使呈碱性，用三氯甲烷分次提取。三氯甲烷液用同一水10ml洗涤，合并三氯甲烷液，蒸干，加乙醇3ml，蒸干，80干燥2小时，残渣加三氯甲烷2ml微热使溶解。精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）20ml，水浴加热，除去三氯甲烷，放冷，加甲基红指示液12滴，用氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相当于5.788mg的莨菪碱（C17H23NO3）。,11,试样100ml,提取和纯化,游离生物碱RN,精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）20ml,RN+-SO4和剩余H2SO4,用氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）滴定,RN+-SO4和Na2SO4,甲基红指示液,12,例：马应龙麝香痔疮膏中炉甘石粉测定（配位滴定法）,试样约2g加三氯甲烷溶散稀盐酸提取加缓冲溶液加铬黑T指示剂用EDTA溶液滴定,例：小儿金丹片中朱砂测定（沉淀滴定法）,试样约0.5g加硫酸、硝酸钾加热至乳白色加水加高锰酸钾溶液至红色加硫酸亚铁至红色消失加硫酸铁铵指示剂用硫氰酸铵滴定液,13,二、可见紫外分光光度法,较高灵敏度、准确、价廉、简单。成分复杂，干扰多。提取、净化、显色。总成分测定：总黄酮、总多糖、总蒽醌等,14,1比耳定律,摩尔吸光系数：一定，溶液为1mol/L，厚度为1cm时的吸光度,百分吸光系数：一定，溶液为1%，厚度为1cm时的吸光度,2仪器校正和检定,波长校正吸收度的准确度校正杂散光检查,15,3对溶剂的要求,溶剂截止波长：溶剂在1cm光径中透光率25%的波长。溶剂试样的溶解性、安全性溶剂的最大使用波长即截止波长,16,17,4测定法,参比溶液的选择max，2nm吸光度在0.30.7间,对照品比较法,cx为供试品溶液浓度cR对照品溶液浓度cR=(100%10%)cxcx=(Ax/AR)cR,18,例黄杨宁片中环维黄杨星D测定,对照品溶液：每1ml含环维黄杨星D10g,供试品溶液制备：取样，置50ml量瓶，加0.05mol/LNaH2PO4至近刻度，80水浴温浸，放冷，加缓冲液至刻度，离心，取上清液,测定法：精密量取二种溶液各5ml，置分液漏斗，各精密加溴麝香草酚蓝溶液5ml，摇匀，各精密加三氯甲烷10ml提取，取三氯甲烷液，加0.5g无水硫酸钠，振摇，静置，取上清液，以试剂空白为参比，在410nm处分别测定吸光度,19,吸收系数法,百分吸收系数100无需对照品方法简便仪器的校正和检定,例岩白菜素含量测定,取约20mg，置50ml量瓶，加甲醇溶解至刻度，摇匀，精密量取1ml，加甲醇稀释至25ml，以试剂为空白，在275nm测吸光度，按岩白菜素吸收系数248计算。,20,标准曲线法,标准系列一般要求57个点相关系数（r）不得小于0.999供试品溶液的吸光度在线性范围中部,例排石颗粒中总黄酮测定,对照品溶液：每1ml含无水芦丁0.2mg,标准曲线：精密取对照品液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置10ml量瓶，加50%甲醇至5ml，加5%亚硝酸钠0.3ml，放置6min，加10%硝酸铝0.3ml，加氢氧化钠试液4ml，加50%甲醇至刻度摇匀，以试剂为空白，在510nm测定吸光度样品测定：,21,三、原子吸收分光光度法,准确度高灵敏度高选择性好抗干扰能力强分析速度快,含量测定：龙牡壮骨颗粒中钙,四、荧光分析法,有害元素的检查：Pb、Cd、As、Hg、Cu共17个品种项,薄层洗脱定量薄层上直接定量薄层扫描扫描方式测定方式,五、薄层扫描法,23,六、气相色谱法,以气体为流动相。分离效能高、样品用量少、分析速度快。适合于含挥发性成分的中药鉴别和含量测定。可与MS、IR联用。,24,农药残留量的检查：六六六、DDT、PCNB甘草、黄芪、人参茎叶总皂苷、人参总皂苷,树脂残留溶剂检查：正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、二乙基苯、二乙烯苯、苯。三七三醇皂苷、三七皂苷、灯盏花素,25,（一）基本原理,1塔板理论,H越小，n越大，柱效越高，分离性能越好,2速率理论,H=A+B/U+CU,指导分离条件选择：载体粒度和分布、填充均匀度、载气种类和流速、柱温、固定液液膜厚度,26,（二）系统适用性试验,1色谱柱的理论板数（n）：规定最低板数,2.分离度(R)：,R1.5,3重复性：连续5次，RSD2.0%,4拖尾因子（T）,T应在0.951.05之间,27,（三）仪器一般要求与条件选择,1载气源与载气的选择：一般用N2作载气,2进样系统：直接进样或顶空进样；分流比；进样口温度高于柱温3050；,3色谱柱：填充柱或毛细管柱；常用固定液：甲基聚硅氧烷、苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等,28,4柱温的选择：恒温和程序升温；柱温低于固定液最高使用温度；合符要求的前提下，尽可能采用较低柱温,5检测器：FID；温度应高于柱温，150,29,（四）定量分析方法,内标法外标法归一化法内加法,30,1、内标法,内标物溶液：如水杨酸甲酯，加乙酸乙酯溶解,对照品溶液：如龙脑，加内标溶液溶解,供试品溶液：如冰片，加内标溶液溶解,取样量m,定容体积如：50ml,31,进样体积V，如1l,As,Ai,As/,Ax,内标液,对照品,供试品,则求出cx,32,内标物须为原样品中不含有的组分,对内标物要求：,内标物与待测物保留时间应接近，且R1.5,内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质,内标物与待测组分的理化性质相似,33,消除进样体积的误差。只需待测组分和内标物出峰适合测定微量组分,优点：,制样要求高找合适内标物困难已知校正因子,缺点：,34,例：丁香罗勒油（丁香酚测定）固定相：二甲基聚硅氧烷（SE-30），浓度为10%柱温：110内标溶液：每1ml含20mg水杨酸甲酯的无水乙醇溶液校正因子测定：精密取约50mg对照品，置10ml量瓶，精密加内标溶液2ml，加无水乙醇稀释至刻度。吸取2l进样测定供试品溶液制备和测定：精密取约50mg，置10ml量瓶，精密加入内标液2ml，加无水乙醇至刻度，吸取2l进样测定,35,a工作曲线法：,c外标两点法：,前提：各次进样量要很准确操作条件要十分稳定,b外标一点法：,2、外标法,36,例：冠心苏合丸（含土木香）固定相：聚乙二醇20000（PEG-20M；柱长30m）柱温：190（30分钟），120/分钟升至240对照品溶液：每1ml各含0.2mg土木香内酯和异土木香内酯的乙酸乙酯溶液供试品溶液制备：精密取约8g，精密加硅藻土812g，研匀，精密取约68g，精密加水饱和的乙酸乙酯25ml，称重，超声处理，补重，滤过,37,3、归一化法,38,应用：药物中杂质和杂质总量限量检查,前提：试样中所有组分都产生信号并能检出色谱峰,39,七、高效液相色谱法,仪器性能稳定灵敏准确分离模式多检测手段多应用最多,40,1、色谱柱,C18柱：（octadecylsilaneODS柱）,C8柱：(CH2)7CH3，罂粟壳、辛夷、地奥心血康,苯基柱：(CH2)3C6H5，莱菔子、忍冬藤,氰基柱：(CH2)3CN,氨基柱：(CH2)3NH2，苦参、湿毒清胶囊,（一）仪器一般要求与实验条件选择,2流动相,溶剂种类：甲醇、水、乙腈配比pH值：乙酸、磷酸、氨水、三乙胺添加剂：辛烷、庚烷和十二烷基磺酸钠,平消片中士的宁测定：流动相：乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾与0.01mol/L庚烷磺酸钠等量混合液（用10%磷酸调节pH2.8）（2179）,42,天麻首乌片（二苯乙烯苷）固定相：ODS流动相：乙腈-水（2278）检测器：UVD320nm对照品溶液：每1ml含40g的甲醇溶液供试品溶液制备：精密取约2片，精密加甲醇25ml，称重，加热回流，补重，滤过测定法：精密吸取二种溶液各10l进样测定规格：不得少于0.20mg/片,43,蒸发光散射检测器（ELSD）,线性不过零点线性范围较窄低浓度非线性二点对数方程法,44,Ikmb,定量关系：,logIblogmlogk,I为散射光强度，m为组分质量,45,例金贝痰咳清颗粒（贝母素甲和贝母素乙）固定相：ODS流动相：乙腈-二乙胺-水（63:0.03:37）检测器：ELSD对照品溶液：每1ml各含0.25mg和0.15mg的甲醇液供试品溶液制备：精密取约2.5g，加氨试液4ml，浸润1小时，精密加三氯甲烷-甲醇（4:1）混合液50ml，称重，80水浴加热回流，补重，静置，取下层溶液，无水硫酸钠脱水，滤过，精取续滤液25ml，蒸干，残渣甲醇溶解至2ml，滤过测定法：精密吸取对照品液8l、20l，供试品液20l，进样测定，外标两点法对数方程计算,46,质谱检测器（MS）：,川楝子中川楝素测定：,含量：0.060%0.20%,47,一测多评法测定黄连（味连）中生物碱的含量,对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含90.5g的溶液，即得。供试品溶液的制备：-取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，以盐酸小檗碱对照品的峰面积为对照，分别计算小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀的含量，用待测成分色谱峰与盐酸小檗碱色谱峰的相对保留时间确定。,48,（二）系统适用性试验,（三）定量分析方法,外标一点法外标两点法对数方程计算内标法：香加皮（4-甲氧基水杨酸测定）,