体内药物分析课程必做作业(答案).doc

体内药物分析课程作业一、问答题第X章题目要求1什么是体内药物分析？与常规药物分析相比，体内药物分析有哪些特点？答：体内药物分析旨在通过各种分析手段，了解药物在体内的数量与质量变化。获得药物代谢动力学的各种参数和信息，从药品生产、临床医疗、实验研究等方面对所研究药物作出估计和评价。与常规药物分析相比，体内药物分析具有干扰杂质多、样品量少且浓度变化大，不能再度获得完全相同的样品、有时要求较快提供结果、要有一定的仪器设备、工作量大等特点。必做影响血药浓度的因素有哪些？答：包括j机体因素：生理（年龄、性别、妊娠）、病理、遗传；k药物因素：剂型因素、手性药物对映体相互作用；l环境因素：化学物质、合并用药；m人体昼夜节律、营养和精神状态。必做为什么要进行体内药物分析？体内药物分析的主要任务是什么？答：为开展临床药学和临床药理学研究服务，以指导临床安全、合理、有效用药和正确评价新药。体内药分的主要任务：分析方法学的研究、治疗药物监测、药代动力学研究、人群代谢分型研究、体内内源性物质的测定及其它方面（药物滥用、吸毒、兴奋剂检测、法医毒物分析等）的应用。必做2药物进入体内后一般需经历哪些物理、化学变化？这些变化与药理作用的关系如何？答：物理变化系指药物与生物大分子如血浆蛋白的结合反应。化学变化系指药物的代谢反应，包括一相代谢（氧化、还原、水解反应）和二相代谢反应（各种结合反应）由于药物的作用强度与血液中游离药物的浓度密切相关，同时药物经代谢后活性发生了变化，故药物的物理、化学变化与药理作用密切有关。必做药物在体内的代谢反应有哪些类型？必做3常用生物样本有哪些？如何采集、储存。答：常用生物样本有：血样（血浆、血清和全血）、尿样、唾液。采集与储存：血浆全血加抗凝剂，离心，取上清液；血清全血离心，取上清液。采血后必须尽快离心分离出血浆或血清，置20以下冷冻保存。尿样收集服药后一定时间内尿样，记录体积，混合均匀后取一定量,测定尿中药物浓度，计算一定时间内尿中药物的累积量。唾液漱口15分钟后收集口内自然流出或经舌在口内搅动后流出的混合唾液，离心后取上清液。样本采集后不能及时测定，可置4冷藏，若放置时间较长，则需-20-80冷冻保存。必做生物样品测定前为什么要除去蛋白质？除去蛋白质的常用方法有哪些？答：除蛋白质的意义：使结合型药物释放出来，以测定总浓度。得到较“干净”的提取液，减少乳化。消除对测定的干扰。常用去蛋白质方法：蛋白质沉淀法生成不溶性盐或盐析和脱水作用。包括：加酸类、重金属盐、中性盐和能与水混溶的有机溶剂等，如：三氯乙酸、高氯酸、Cu2+、硫酸铵、甲醇、乙腈等。组织酶消化法蛋白水解酶，如胰蛋白酶、胃蛋白酶等。必做影响液-液提取和液-固提取效率的因素分别有哪些？必做影响液-液提取的因素有:水相pH 提取溶剂 离子强度影响液-固提取的主要因素有:固定相 洗脱液流速 样品装载量4评价分析方法的效能指标包括哪些项目？如何求算？必做试述体内药物分析方法设定的一般步骤。答：首先进行文献查阅，设计方案，然后通过实验加以验证。一般实验步骤如下：以纯品进行测定选择最佳测定条件（线性，灵敏度、pH、检测波长等）。空白样品测定按设定的方法进行前处理和测定，考察空白值的大小和干扰程度。以水代替空白样品，添加标准品后测定，以获得提取回收率的大致情况，从而对前处理中各步操作条件进行选择。空白样品中添加标准后测定求样品回收率，建立标准曲线等。体内实样测定根据实样测定结果来判断设定的方法是否合理、可行。以上步骤需要反复试验以获得最佳实验条件。必做阐述定量限与检测限的定义、区别及表示方法。答：定量限即定量下限（LLOQ），表示药物可定量测定的最低量，须符合一定精密度和准确度要求，常以标准曲线最低浓度点来确定，或以 S/N=510确定。检测限（LOD）表示药物的最低可测度，不必定量，通常以信噪比（S/N）=23时被测药物的绝对量表示；两者的区别主要在于是否有定量要求：LOD没有定量要求，而LLOQ则有定量要求。必做体内药物分析方法有哪些？各有何优缺点？答：体内药物分析方法可分为三大类：光谱法包括比色法、紫外法和荧光法。方法优点是操作简便、快速，所需设备简单。其缺点是不具备分离功能，选择性较差，对前处理要求高；比色法和紫外法灵敏度较低。免疫法包括放射免疫、酶免疫、荧光免疫等。方法优点是灵敏、专属，操作简便、快速，对样品预处理要求不高。其缺点是精密度较差，需要试剂盒和专属仪器。色谱分析法包括HPLC, GC, LC/MS, GC/MS等。方法优点是具有分离分析功能，是评价其它方法的参比方法。必做5紫外法消除干扰的方法有哪些？说明原理和应用条件。P82必做 1.差示分光光度法（1） 利用最大吸收波长进行测定（2）利用最小吸收波长处的增色效应进行测定（3）利用最大吸收与最小吸收之差（即振幅）进行测定2.双波长测定法如何进行激发光谱和荧光光谱的测定？P91页必做荧光物质吸收紫外光后被激发出荧光，如果将激发荧光的光源用单色器使其分光后，测定在每一波长的激发光照射下，物质所发射的荧光，以荧光强度对激光光波长作图，得到荧光物质的激光光谱，实际上，激发光谱就是荧光物质的吸收光谱。激发光谱中最高峰的波长，能使荧光物质发出最强烈的荧光。如果使激发光的波长和强度保持不变，而让物质所发生的荧光通过单色器色散，依次将不同波长的荧光照射于接收器上，并依次测其荧光强度，然后以荧光强度对相应的荧光波长作图，得到该物质的荧光发射光谱，简称荧光光谱。6免疫分析的基本原理、基本条件是什么？答：基本原理：即抗原-抗体结合反应。在反应体系中，当抗体（Ab）量一定时，抗原（Ag）与标记抗原（Ag*）就与抗体发生竞争性结合反应，生成的Ag*-Ab与Ag的量呈负相关，这种特异的竞争性抑制的数量关系是免疫分析的定量基础。基本条件是：特异性抗体、标记抗原、未标记抗原（即标准品）。必做常用免疫分析有哪几种？相互间区别在哪些方面？答：常用免疫分析有放射免疫法、酶免疫法、荧光免疫法、化学发光免疫法等，它们的主要区别在于标记物不同，由此采用的测定方法也不同。必做在RIA中，结合物与游离标记物的分离方法有哪些？必做7气相色谱仪最常用检测器是什么？有何特点？适用范围？必做GC法定量方法与内标选择原则？答：对内标物的要求：内标物必须是样品中不含有的组分，其保留时间应与待测物tR值相近，但R1.5，并具有足够的纯度。内标物选择原则：内标与被测物相差一个化学元素；或内标与被测物为同系物；或内标与被测物结构相似，或内标与被测物理化性质相似。必做什么是正相色谱？什么是反相色谱？必做说明RP-HPLC法的常用固定相、流动相、适用范围，及流动相中甲醇等有机溶剂浓度变化对被测组分保留时间的影响。答：常用固定相ODS（C18）柱；流动相甲醇-水、乙腈-水、四氢呋喃-水；适用范围非极性至中等极性的各类分子型化合物；流动相中甲醇等有机溶剂浓度增大，被测组分保留时间缩短。必做HPLC仪常用检测器有哪些？指出各种检测器的适用范围和适用注意点。答：常用检测器有：紫外、二极管阵列、荧光、蒸发光散射、电化学、质谱等。紫外检测器通用型检测器，适合具有紫外吸收的各种物质的检测。二极管阵列检测器具有光谱、色谱和三维图谱，可以进行定性和定量分析，以及色谱峰纯度检查。荧光检测器专属检测器，适合具有荧光或潜在荧光物质的检测，灵敏度高。蒸发光散射检测器适合于无紫外吸收物质的检测，要求流动相必须是挥发性的，不能含有非挥发性的缓冲盐。电化学检测器适合于具有氧化还原性质的物质，要求流动相必须有一定的电导率，一般为盐类、有机溶剂和水的混合物。质谱检测器具有定性定量功能和高的灵敏度。必做8什么是手性药物？为什么要研究手性药物？必做常用手性色谱方法有哪些？答：分子结构中含有不对称碳原子（即手性中心）的药物称为手性药物。因手性药物两对映体在体内的生物活性有差异，包括药效学差异（竞争拮抗等）和药动学差异（吸收、分布、代谢、排泄）。为正确评价两对映体的作用和进行对映体药物的质量控制，所以要研究手性药物。常用手性HPLC法有：手性衍生化法、手性流动相添加剂法、手性固定相法。必做9毛细管电泳有哪几种分离模式？毛细管电泳分离模式有 毛细管区带电泳，胶束电动色谱，毛细管凝胶色谱，毛细管等电聚焦，毛细管等速电泳，移动界面毛细管电色谱 。必做10常用联用技术有哪些？常用联用技术有 LC-MS，GC-MS，GC-GC，HPLC-HPLC，GC-HPLC，免疫分析-HPLC 等必做二、名词解释第X章题目要求1TDM答：治疗药物监测，为英文“therapeutic drug monitoring”的缩写。必做2一相代谢答：指药物在体内发生的氧化反应、还原反应、水解反应。必做二相代谢答：指药物在体内的结合反应，包括：葡萄糖醛酸结合、硫酸酯化、甲基化、乙酰基化、氨基酸缀合、谷胱甘肽缀合等。必做生物转化答：主要指体内代谢反应。必做CYP1A2答：细胞色素P450 1族A亚族第2个酶基因。必做3血清答：全血经离心后的上清液。必做血浆答：全血加抗凝剂（肝素等），经离心后的上清液。必做4RSD答：相对标准偏差，即精密度的一种表示方法。必做检测限答：表示药物的最低可测度，不必定量，通常以S/N=23倍时被测药物的绝对量表示。必做定量限答：表示药物可定量测定的最低量，须符合一定精密度和准确度要求，常以标准曲线最低浓度点来确定，或以 S/N=510确定。必做提取回收率答：指药物加入到生物样本中经前处理后测得的量与理论加入量的比值。必做5荧光光谱答：以发射波长为横坐标，荧光强度为纵坐标所作的图。必做激发光谱答：以激发波长为横坐标，荧光强度为纵坐标所作的图必做6酶免疫分析答：酶免疫分析是在放射免疫分析基础上发展起来的一种免疫分析方法，以酶代替同位素来标 记药物，酶与底物、辅酶等反应后引起吸收光谱变化而被检测。必做7反相HPLC答：即流动相极性大于固定相极性的HPLC。必做ODS答：即十八烷基硅烷键合硅胶，为常用反相HPLC的固定相。必做三、填充题第X章题目要求1体内药物分析的特点 干扰杂质多，样品量少浓度低，不能再度获得完全相同的样品，B要有一定的仪器设备、工作量大 等。必做影响血药浓度的因素有 机体因素（生理因素、遗传因素、病理因素）、药物因素（剂型、手性药物相互作用）、环境因素（药酶诱导剂、抑制剂、大气污染、饮食） 等。必做2药物在体内发生的物理变化和化学变化分别是指 和 。必做3常用生物样品有 血样（血浆、血清、全血），尿样，唾液 等必做常用去蛋白的方法有 蛋白质沉淀法（加蛋白质沉淀剂，如：三氯乙酸，高氯酸，Zn2+，Cu2+ ，硫酸铵，氯化钠，甲醇，乙腈，丙酮等）和组织酶消化法（加蛋白水解酶如：胃蛋白酶，胰蛋白酶，枯草菌溶素等）必做生物样品中药物与代谢物的提取方法有 液-液提取和液-固提取 等必做影响液-液提取的因素有 水相pH 值、提取溶剂和离子强度 等。必做4分析方法认证的主要指标 线性范围、 准确度、精密度、专属性、灵敏度、 稳定性 等必做体内药物分析方法包括 光谱法（比色、紫外、荧光），色谱法（HPLC、GC、GC-MS、LC-MS），免疫分析法（放射免疫、酶免疫、荧光免疫） 等。必做5紫外光谱法消除干扰的方法有 差示光谱法、导数光谱法、双波长法 等必做6在放射免疫分析中，结合物与游离标记物的分离方法有 沉淀法、吸附法、固相法、差速迁移法、双抗体法 必做7气相色谱法中常用的检测器有 氢焰离子化检测器、氮磷检测器、电子捕获检测器、MS 等必做液相色谱中常用检测器有 紫外检测器（可变波长、二极管阵列）、荧光检测器、电化学检测器、蒸发光散射检测器、MS 等。必做反相HPLC法常用流动相有 甲醇-水，乙腈-水，四氢呋喃-水 必做8手性HPLC法常用测定方法有 手性试剂衍生化法、手性流动相添加剂法、手性固定相法。必做9在毛细管电泳中，驱动荷电物质前进的两个重要作用力是 电泳流 和 电渗流 。必做四、单选题第X章题目要求1尿中异烟肼及乙酰异烟肼的比色测定是利用（ B ）专属反应（KCN氯胺T反应）A异烟肼 B乙酰异烟肼 C异烟肼及乙酰异烟肼 D异烟腙 E 异烟酸必做药理作用强度与下列哪一项最相关（ C ）A血液浓度 B 摄入量 C 血液中游离药物的浓度 D 与蛋白结合药物的浓度 E血药总浓度必做2引起药物氧化代谢的主要酶是（ D ）A氧化酶 B 硫酸酯酶 C脱氢酶 D细胞色素P450 E葡醛酸转移酶必做属于药物二相代谢酶的是（ E ）A氧化酶 B 酯酶 C脱氢酶 D细胞色素P450 E葡醛酸转移酶必做3欲提取尿中某一碱性药物，其pKa为7.8，要使99.9%的药物能被有机溶剂提取，尿样pH应调节到（ D ）A. 5.8 B.9.8 C. 4.8以下 D.10.8或10.8以上 E. 7.8-9.8必做4表示生物样品测定方法准确度的是（ E ）A 检测限 B 定量限 C精密度 D 线性范围 E回收率必做表示生物介质中药物最低可测度的是（ A ）A检测限 B定量限 C线性范围 D最低检测浓度 E可信限必做方法的专属性也称选择性，在体内药物分析中主要考察（ E ）A相关物质 B内标物 C共存杂质 D降解物 E内源性物质必做表示样品中含有其他共存物质时该法能定量测定被测物的能力的是（ D ）A方法的精密度 B方法的准确性 C方法的相关性D方法的选择性 E方法的线性范围必做5以发射波长对荧光强度所作的图称为（ E ） A激发光谱 B照射光谱 C紫外发射光谱 D吸收光谱 E荧光光谱（发射光谱）必做6放射免疫法与荧光免疫法的区别在于（D ）A抗体不同 B亲和力不同 C标准抗原不同 D标记物不同 E原理不同必做7高效液相中流动相极性大于固定相的称为（ A ）A. RP-HPLC B. HPTLC C. NP-HPLC D. LLPC E. HPCE必做一般键合相色谱的使用pH范围为（ E ）A 39 B 29 C 27 D 38 E 28必做高效液相中流动相极性大于固定相的称为（ A ）A. RP-HPLC B. HPTLC C. NP-HPLC D. LLPC E. HPCE必做五、多选题第X章题目要求1体内药物分析的任务包括（ ABCD ）.A分析方法的研究 B血药浓度监测 C药动学研究D体内内源性物质测定 E新药质量标准研究必做2药物二相代谢物缀合物（结合物）的水解方法有（ ACD ）A酸水解 B碱水解 C溶剂解 D酶水解 E离子对法必做测定血浆蛋白结合率的常用方法（ AB ）A、平衡透析法 B、超滤法 C、酶法 D、衍生化法 E、反相色谱法必做药物在体内的一相代谢包括（ AC ）A氧化反应 B甲基化反应 C水解反应 D缀合反应 E与大分子结合反应必做3影响液-液提取的因素有( ABC )A水相pH B提取溶剂 C离子强度 D流速 E装样量必做影响液-固提取的主要因素有( CDE )A水相pH B提取溶剂 C固定相 D洗脱液流速 E样品装载量必做4体内药物分析方法的专属性主要考察（ BDE ）A辅料 B共服药 C有关物质 D内源性杂质 E代谢物必做5紫外分光光度法中消除干扰的方法有（ ABE ）A 差示分光光度法 B导数光谱法 C 二极管阵列法 D 化学发光法 E 双波长法必做6RIA中分离结合与游离标记物的方法有（ ACDE ）A 双抗体法 B LC/MS法 C 吸附法 D 固相法 E 沉淀法必做抗血清的鉴定指标（ BCD ）A吸光强度 B特异性 C活度 D滴度 E 放射性强度必做免疫分析中基本试剂包括（ ADE ）A特异性抗体 B分离试剂 C免疫原 D标准抗原 E标记抗原必做7气相色谱中常用流动相为（ CDE ）A 甲醇-水 B乙腈-水 C 氦气 D 氮气 E 氢气必做在HPLC法中常用来调节流动相pH的酸碱是（ ABDE ）A枸橼酸 B 稀醋酸 C 稀硫酸 D 三乙胺 E 磷酸盐必做10气-质联用仪中接口的作用是（ BC ）A连接作用 B使压力匹配 C组分浓缩 D检测器作用 E电离作用必做