整理乳铁蛋白申报资料二

精品文档精品文档证明技术上确有必要和使用效果的资料或者文件精品文档(一)食品添加剂的功能类别及作用机理牛乳铁蛋白具有调节铁吸收、 基因转录、 多种酶活性和促进骨骼生长等多种 功能(Brock,2002)，然而目前乳铁蛋白最明确、最有用的功能是抗菌 、消炎 和免疫调节(Brock,2002,Farnaud Evans, 2003)。早在2 0世纪60年代早 期，人乳铁蛋白和牛乳铁蛋白就被定义为具有抗菌和免疫调节功能的糖蛋白。乳 铁蛋白被认为属于自身免疫系统的一部分，通过结合铁以及其他作用机制发挥抗 菌作用。另外，某些文献显示对免疫系统具有促进作用的几个关键营养因素就包 括人乳能够及时提供足量的乳铁蛋(Lonnerdal, 2009;Tomita等人,2002; Walker, 2010)。1.免疫调节 牛乳中发现的乳铁蛋白含量比人乳低。由于人乳中含有乳铁蛋白，且乳铁蛋 白具有潜在的有益功能，所以专家认为乳铁蛋白强化婴幼儿产品(如婴幼儿配方 粉)是合适的(Ferruzzi & Neilson, 2010; Koletzko et al., 2005; Legrand, et al., 2005; Lonnerdal,2009)。大量体外试验、动物试验(表1)和人体临床证据 (表2)表明补充含有牛乳铁蛋白的配方奶粉对机体的抗感染力、免疫应答的调 节等多方面具有积极作用， 有力支持了上述专家的建议。目前，牛乳铁蛋白强 化的婴儿配方奶粉已经在多个国家广为销售，如日本、印度尼西亚、中国、韩国 等。新生儿消化道(如肠道)不成熟且发育不完全，出生后一段时间才能发育成 熟。因此，在这段时间内由于肠道免疫功能尚不完全，婴儿的极易发生肠道感 染。研究证实，在肠道发育成熟的早期，母乳中的某些特殊蛋白质成分像乳铁蛋 白，对早产儿和足月儿的健康具有保护作用(King, 2007; Paolo Manzoni等, 2009; Newburg, 2005; Walker, 2010)。越来越多的临床前和临床期证据证明，牛乳中提取的乳铁蛋白对肠道感染具 有预防作用，对婴幼儿的自身免疫系统具有保护作用。具体来说，在孩童期早期 食用强化牛乳铁蛋白的婴幼儿配方乳粉，有助于保护肠道健康，增强机体免疫调 节能力。精品文档精品文档精品文档表 1 支持乳铁蛋白的免疫调节作用的体外试验和动物试验研究试验设计体外或动物试验 数据牛乳铁蛋白的剂量和 暴露时间结果参考文献细胞模型从健康的成年志 愿者的新鲜血液 中提取的中性粒 细胞50-250/ml结果：牛乳铁蛋白可激发 中性粒细胞的吞噬活性(Miyauchi 等.，1998 )随机三餐饮食 处理断奶仔猪基础饮食+1g/kg 牛乳铁蛋白持续 30 天补充牛乳铁蛋白可降低仔 猪的腹泻率，增加细胞因 子产量。结论：牛乳铁蛋白可调节 并增强断奶仔猪在断奶应 激过程中的免疫调节作 用。(Shan, Wang, Wang,Liu, & Xu, 2007)炎症小鼠模型用酵母聚糖诱发 耳部皮肤炎症的 雄性Balb / c 小鼠0.1、1.0、5、25 mg 牛乳铁蛋白/天 持续 3 天抑制由酵母聚糖诱发的耳 皮肤炎症并降低脾细胞产 生的TNF-a的数量。(Hartog, Leenders, vander Kraan, & Garssen,2007)饮食控制干预公牛1.5-1.6g/ 天 58 天派尔氏淋巴结和血清免疫 球蛋白 IgG 数量增加； 减少促炎性标志基因 IL-1B和 IFN-a的数量，伴随空 肠绒毛高度降低；增加对 乳铁蛋白的细胞凋亡帆影。(Prgomet, Prenner,Schwarz, & Pfaffl, 2007)随机对照雌性 Balb/c 小鼠1 或 25 g LF/L 饮用 水，100mg LF/天的 饲料，或灌胃 8 g / L 牛乳铁蛋白6 周经口给予乳铁蛋白（不包 括经饮用水），可刺激先 天和适应性免疫应答反 应。而经饮用水暴露乳铁 蛋白，并没有引起免疫系 统明显的变化。(Sfeir，Dubarry，Boyaka ， Rautureau ，& Tome， 2004 )随机对照用佐药诱发关节 炎的雄性 Wistar大鼠10 , 30 , 100 mg/kg牛乳铁蛋白，每天一次。1 到 18 天经口给予牛乳铁蛋白，对 佐剂诱发的关节炎的大鼠 具有消炎和免疫调节作 用。乳铁蛋白减轻大鼠关 节炎的恶化，抑制TNF-a的产生，增加 IL -10 的产 生。(Hayashida et al.,2004)经口给予免疫 抑制小鼠牛乳铁蛋白用环磷酰胺（CP）诱发免疫抑制小鼠模型0.5%的牛乳铁蛋白 饮用水（大约相当于20mg/ 天）连续 5 周证实牛乳铁蛋白可恢复免 疫抑制小鼠的免疫系统功 能;乳铁蛋白处理的小鼠 可再生 T 细胞，重组抗体生 成细胞，并增加CD3+和CD4+细胞数量(Artym， Zimecki ，Paprocka ， & Kruzel，2003 )精品文档精品文档表 2 支持牛乳铁蛋白的免疫调节作用的临床研究资料研究设计受试者年龄 特征服用牛乳铁蛋白的 受试者数量（n）剂量范围 持续时间范围结果参考文献随机双盲试验面部患有轻度至中度痤疮的普通健康成人（18-30 岁）n=560.2g/天12 周研究报告指岀牛乳铁蛋 白可促进免疫应答。(Kim, et al., 2010)随机双盲安慰剂 对照试验患有直径 5 毫米息 肉并可能发展成腺 瘤的成人（40-75 岁）n=711.5 或 3 g/天12 个月3 g /天剂量组的息肉直 径缩小。(Kozu, et al., 2009)剂量反应个体重复三次处理健康成年男性（30-55 岁）n=80.1 和 0.2g/天14 天结果证实补充牛乳铁蛋 白可调节参与者的免疫 功能和抗氧化功能状态。最咼剂量0.2g/天未引发 不良反应。牛乳铁蛋白可增加总 T细胞（CD3 +）、辅助 T 细胞（CD4 +）和细胞毒 性 T 细胞（CD8 +）活化，并提高抗氧化能 力。未见细胞因子水平 （IL - 2,IL 4,IL-6,IL-10,TNF-a和 IFN-Y异常。(Mulder, et al.,2008)随机双盲安慰剂 对照试验足月（34 周）健康 婴儿（W4 周龄）n=260.85g/L 天12 个月随着时间 （6 个月）健康的 生长发育。在第 9 个 月，牛乳铁蛋白组婴儿 红细胞压积显著升高， 呼吸道感染率显著降 低。(King, 2007)艾滋病感染治疗 的预研究抗逆转录病毒药物 治疗的 HIV 感染儿童（4-17 岁）n=113g/天4 周添加牛乳铁蛋白可导致 免疫调制。 效应记忆T细胞和终未分化T细胞 的数量增加。可增加 CD14 T 细胞的Toll样受体（TLR- 2 ）的表达。白 色念珠菌囊胚标记的吞 噬细胞的数量显著增加, IL-2/IL-10 对 LPS 激发的 CD14 细胞的响应 也比率也增加。(Zuccotti, et al.,2007)精品文档精品文档研究设计受试者年龄 特征服用牛乳铁蛋白的 受试者数量(n)剂量范围 持续时间范围结果参考文献饮食摄入健康男性志愿者(31-55 岁)n=102g/天4 周结果显示摄入牛乳铁蛋 白可能会影响宿主防御 系统的初级活性并产生 免疫调节作用。10 名 成人中有 3人的多核白 细胞吞噬活性增加， 并 且随着吞噬活力的增 力口，这 3 人中有 2 人的 CD16 增加。 摄入牛乳 铁蛋白可能影响免疫系 统的初级激活作用。(Yamauchi, et al.,1998)综观上述科学研究(体外、动物和人类临床数据)，表明牛乳铁蛋白具有免疫 调节作用，可用于婴儿和儿童营养品中。2.抗菌效应牛乳铁蛋白发挥着重要的抗菌作用，可保护机体免受病原体的侵害。它可抑制微生物的繁殖和粘附，并可通过损伤微生物的“细胞器”直接将其杀死。体外 和动物试验数据以及人体临床数据证实牛乳铁蛋白的抗菌作用包括抑菌、杀菌、 抗病毒、抗真菌和抗寄生虫。牛乳铁蛋白的抗菌性能似乎主要是作用于胃肠道 内，以保护婴幼儿免受病原体的侵害(Egashira等，2009; Egashira等,2007;Paolo Manzoni等,2009; Okuda等，2005; Yamauchi等,2000c)。母乳中丰富的乳铁蛋白可通过哺乳来提供这种保护并维护婴儿的自身防御系统(An derss on, Li ndquist, Lagerqvist & Hernell,2000)。对牛乳中发现的牛乳 铁蛋白的抗病毒、抗菌、抗真菌和寄生虫作用的支持性研究详见表3和表4。表 3 支持牛乳铁蛋白的抗菌效果的体外和动物试验研究试验设计体外和动物实验数据乳铁蛋白的剂量 持续时间结果参考文献细菌细胞模型侵袭性性大肠杆菌(EAEC )10、1、0.1,、 和 0.01mg/mL牛乳铁蛋白4 小时牛乳铁蛋白对 EAEC 生长的抑制呈 现剂量反应关系,但 0.01mg/ml乳铁蛋白剂量组未见 抑制作用。铁可逆转乳铁蛋白的生长抑制作 用。(Ochoa et al.,2006)人类病原体 细胞模型白色念珠菌和 R.红色毛癣菌0.15-150 g/ml人乳铁蛋白24、48、72小时人乳铁蛋白可强烈抑制真菌的生长(Andersson, etal., 2000)精品文档精品文档试验设计体外和动物实验数 据乳铁蛋白的剂量 持续时间结果参考文献动物细胞模 型携带猫萼状病毒猫 肾细胞和携带脊髓 灰质炎病毒的猴胚 胎细胞0.25、0.5、1、1.5、2、2.5 mg/mL 牛乳铁蛋白24 -48 小时同时给予猫肾细胞萼状病毒和牛乳 铁蛋白，牛乳铁蛋白可减少猫的病 毒感染。用乳铁蛋白预处理细胞并不能预防 病毒感染，而同时给予乳铁蛋白与 脊髓灰质炎病毒时，则会减少感 染。(McCann, Lee,Wan, Roginski, &Coventry, 2003)人类细胞模 型腺病毒孵育 HEp-2细胞牛乳铁蛋白1 小时将细胞与牛乳铁蛋白预孵化，可抑 制60%的病毒感染(Pietrantoni etal., 2003)人类细胞模 型接种乙型肝炎病毒（HBV）的肝（实质）细胞0.1 或 1mg/ml 人 和牛乳铁蛋白培养 2 天证实牛和人乳铁蛋白对预防细胞的HBV 感染具有重要作用(Hara et al.,2002)人类细胞模 型人体上皮细胞和大 肠埃希杆菌16mg/mL 牛乳铁蛋白，孵育 30 分钟牛乳铁蛋白对 8 株产肠毒素大肠杆 菌的上皮细胞粘附的抑制呈现剂量 反应关系，可抑制大肠杆菌的粘 附。(Kawasaki et al.,2000)平板计数法大肠埃希氏杆菌：ATCC 25922大肠杆菌与同样体积 0.2%的牛乳铁蛋白或24 训牛乳铁蛋 白混合1 小时与游离乳铁蛋白相比，铁饱和牛乳 铁蛋白的抑制作用较弱。由于不饱和乳铁蛋白可限制游离铁的活性， 因此其对革兰氏阳性和阴性细菌的 生长起到抑制作用。(Recio & Visser,2000)小鼠模型感染鼠伤寒沙门氏 菌肠炎的小鼠200 微升牛乳铁 蛋白8 天牛乳铁蛋白组的死亡率低于对照组，对照组所有小鼠的沙门氏菌血液培 养均呈阳性，高于乳铁蛋白组。对 乳铁蛋白组的动物器官检查发现， 其炎症和局灶性坏死情况较少见。(Mosquito,Ochoa, Cok,& Cleary, 2010)小鼠模型喂养肠毒性大肠杆 菌的无菌小鼠10 mg/mL 牛乳铁蛋白牛乳铁蛋白可减少十二指肠、空 肠、回肠、和结肠中的肠毒性大肠 杆菌菌株的数量。在粪便样品未发 现部分或完全饱和牛乳铁蛋白Lf 的抗菌效果（活菌计数）。(Kawasaki, et al.,2000)小鼠模型接种梭状芽胞杆菌 的小鼠0、0.5、1、1、2%牛乳铁蛋白 14 天牛乳铁蛋白可抑制细菌的繁殖，并 且可明显降低粪便中的梭状芽胞杆 菌的数量。(Teraguchi et al.,1995)精品文档精品文档表 4 支持牛乳铁蛋白抗菌效果的人体临床研究研究设计受试者 年龄特征服用乳铁蛋白的 受试者数量(n)剂量范围 持续时间范围结果参考文献随机双盲安慰剂对照 试验断奶的健康儿童12-36 月龄n=261g/天9 个月补充乳铁蛋白组的粪便 中含贾第鞭毛虫阳性群 的发生率较低； 按身高年龄比得分更 优。(Ochoa, et al.,2008)随机试验日托中心的健康 儿童5 岁n=460.4g/ 天16 周诺如病毒性肠胃炎的发 病率降低(Egashira, et al.,2009)非随机试验健康儿童3 天n=2290.1g/ 天30 天(45 名新 生儿岀生时45 岁n=260.6 或 2g/天8 周各组的皮肤病症状无明 显差异。对中度水泡或 趾间型足癣，乳铁蛋白 组的皮肤病学得分显著 降低，但无真菌学治疗 效果。在第八周，牛乳 铁蛋白的特异血清免疫 球蛋白 G 抗体水平显 著高于预处理，但是bLf 特异免疫球蛋白 E 抗体则低于检测极限。(Yamauchi, etal., 2000c)随机试验慢性丙型肝炎成 人57 岁n=473.6 g/ 天8 周8-异前列烷下降和 ALT 水平下降(Konishi, et al.,2006)随机试验慢性丙型肝炎成 人46-61 岁n=360.6g/ 天12 个月牛乳铁蛋白疗效与非抗 病毒治疗响应器中的氧 化应激抑制的改善有 关。(Ishii, et al., 2003)综上所述，多项人体临床研究、体外试验和动物试验研究均证实牛乳铁蛋白 具有积极的免疫效应和抗致病菌作用。牛乳铁蛋白对婴幼儿免疫系统具有支撑作 用，也具有包括抗病毒、抗细菌、抗真菌等的广谱抗菌性。3.乳铁蛋白促进铁吸收的作用精品文档精品文档由于母乳中铁的吸收比牛乳或婴儿配方奶粉高，因此认为乳铁蛋白具有另一 个重要的作用促进铁的吸收。以下两个事实支持乳铁蛋白具有促进母乳中铁 吸收的作用：1)母乳中乳铁蛋白的含量极高，而且母乳中的大部分铁都以乳铁 蛋白结合的形式存在2)尽管母乳中的铁浓度相对较低，但是完全母乳喂养的婴 儿储存的铁足以维持6个月，这表明母乳中的铁具有很高的生物利用度 (Lonnerdal, 1985)。新生儿早期，乳铁蛋白中的铁可能达到饱和状态，被消化的铁也较少，这可 以预防婴儿在铁充足期发生铁过量(Lonnerdal & Iyer，1995)。随着年龄的增 加和消化功能的改善，在婴儿铁需求期乳铁蛋白会被降解，游离的铁可被机体吸 收。尽管总铁结合能力中只有3 - 5%与母乳中的乳铁蛋白有关，但是在铁的消 化阶段，可能其它物质中的铁被释放并转移给乳铁蛋白(Shan等,2010)。迄今为止，总的研究结果并未证实与喂养硫酸亚铁的婴幼儿相比，补充牛 乳乳铁蛋白强化婴幼儿配方奶粉可促进铁的吸收。 然而有重要证据的显示，对 于6月龄以上的婴儿和幼儿，乳铁蛋白对铁的吸收具有促进作用。鉴于无论是在 发达国家还是发展中国家，缺铁性贫血都是儿童营养问题的头号杀手，上述说法 是很有道理的(Jovani, Barbera & Farre,2003)。当将来源于浓缩牛奶乳清中的乳铁蛋白以100mg/ml的剂量添加到婴儿配方 奶粉中时，未增强或降低铁的日常稳定性(Fairweather-Tait，等，1987)，并 且有临床证据表明，乳铁蛋白结合的铁可被身体利用，利用途径与其它非亚铁血 红素膳食铁相同(King，2007)。乳铁蛋白在铁吸收过程中的作用研究结果见 表5。精品文档精品文档表 5 支持乳铁蛋白在铁吸收作用中的研究研究设计受试者的年龄 特征服用牛乳 铁蛋白的 受试者数 量（n）剂量范围 持续时间结果参考文献双盲随机安慰剂 对照预试验（0-4 weeks）健康足月婴儿 孕期34 周，（0-4 周龄）n=26牛乳铁蛋白0.85g/L12 个月九个月时，乳铁蛋白 添加组的红细胞压积 水平显著高于配方粉 组。乳铁蛋白组的下 呼吸道感染情况明显 减少。(King, 2007)双盲试验足月健康婴儿 （42 周龄）n=10牛乳铁蛋白 1.3g /L6 个月对血液学参数无影 响。在研究期间，长 期摄入未岀现严重感 染。(Her nell &Lonn erdal, 2002)随机双盲试验足月婴儿（6 2 周龄）n=10牛乳铁蛋白 1.4g/L4.5 个月对血液学参数、体重 或身高无影响。(Lonn erdal &Hernell, 1994)随机母乳喂养对 照试验健康足月婴儿（刚岀生）n=28牛乳铁蛋白0.1g/L 或 1g/L150 天与 0.1 g/L 相比，岀生 第30 和 90 天，血液学 参数并无差异，但在第150 天 1g/L 剂量组的血清铁蛋白含量显著升 咼，提示乳铁蛋白可 能有助于铁的吸收(Chierici, et al., 1992)对照试验健康足月婴儿 （3-17 周龄）n=7牛乳铁蛋白1g/L14 周未见乳铁蛋白改善铁 的吸收(Schulz-Lell, et al.,1991)健康足月婴儿（刚岀生）n=13牛乳铁蛋白2.85g/L11 天虽然乳铁蛋白补充组 的铁保留量较高，但 是并无统计学差异。(Fairweather-Tait, etal., 1987)随机双盲试验成年男性长跑 运动员（20.3 1.3岁）n=8牛乳铁蛋白 1.8g/天8 周试验期间，牛乳铁蛋 白组的铁蛋白、血清 铁和血红细胞计数没 有改变，而对照组的 含量降低。牛乳铁蛋白可能会增 加铁的吸收和利用。(Koikawa, et al.,2008)在发达国家和发展中国家，缺铁性贫血都是6个月-5岁幼儿的营养缺乏的首要问题。在较大婴儿（ 6个月）和儿童配方奶粉中添加0.85 - 1g/L/天剂量的牛 乳铁蛋白可能会增加铁的吸收和利用。精品文档精品文档（二）在拟添加的食品中添加与否的效果对比牛乳铁蛋白包括添加至婴儿配方奶粉的使用历史悠久， 事实证明人体对其耐 受性良好（Tomita等人，2009）。迄今为止，使用不超过人乳中含量的牛乳铁 蛋白，在极低出生体重婴儿、早产儿和健康的足月婴儿进行的所有临床和临床前 研究已证明该物质无副作用且耐受性良好（见表6）。表 6 牛乳铁蛋白的人体临床研究研究设计受试者类型研究数量（N） 服用乳铁 蛋白的受试者数量（n）牛乳铁蛋白 暴露量 暴露时间效应参考文献随机双盲 安慰剂对 照试验正常健康足 月婴儿 2 周龄N=1 n=3250.6 - 1.0 g/L1 年婴儿对 1g/L 乳铁蛋白 耐受良好。与 0.6 g/L 乳铁蛋白相比，1g/L 乳铁蛋白 有助于健康成长美赞臣营养品 公司（MJN ）（待岀版）随机双盲 安慰剂对 照试验0-8 周龄的 早产儿或者 正常健康足 月婴儿N=5 n=3500.1- 0.85 g/L30 天-1 年与 0.1 g/L 相比，婴儿对0.85 g/L 的乳铁蛋白耐受良 好，生长发育状况更优(King, 2007) (Lonnerdal & Hernell,1994)0-17 周龄的早产儿或者 正常健康足月婴儿N=7 n=1660.1、1、2.85 g/L婴儿对 1 g/L 乳铁蛋白 耐受良好。(Roberts et al.,1992) (Schulz-Lell,Dorn er, Oldigs,Sievers, & Schaub,1991)十预研究2 -150 天与 0.1 g/L 相比，1 g/L 乳铁 蛋白更有助于婴儿健康成长随机双盲 安慰剂对 照试验低出生体重 新生儿N=1 n=493100mg/ 天30 天耐受良好。体重增重处于 平均水平。与安慰剂组相比，婴儿更 健康。(Paolo Manzoni etal., 2009) (P. Manzo ni et al., 2011)对早产儿、足月儿、儿童进行的几十项临床研究结果表明，乳铁蛋白对婴幼儿并无不良作用（包括过敏反应），婴幼儿对其耐受性良好。另外，与低水平（0.1-0.6g/L）乳铁蛋白相比，较高水平（0.85-2.85 g/L）的乳铁蛋白对婴幼儿 的健康生长更有利，它不仅可以使婴幼儿胃肠道感染率下降，还可能促进铁的吸 收。因此，适当调整婴幼儿配方粉中乳铁蛋白的最大使用量可以有助于婴幼儿的 健康成长。（三）与同一功能类别的食品添加剂使用效果的对比资料目前我国所批准的可用于婴幼儿配方粉中营养强化剂中，没有与乳铁蛋白具 有相同功能及作用机制的有营养强化剂。精品文档精品文档(四)与其他有关技术上确有必要的资料1.牛乳铁蛋白的来源和特性1.1来源乳铁蛋白也称为乳转铁蛋白，1939年首次在牛乳中发现，1960年从人乳 中分离得到(Johansson,1960; Levay & Viljoen, 1995)。乳铁蛋白是人乳乳清 蛋白中的第二大功能蛋白，属于转铁蛋白一族(Chierici, Sawatzki, Tamisari, Volpato, & Vigi, 1992)。大部分哺乳动物都分泌乳铁蛋白，常见于初乳、乳 汁、眼泪、鼻腔分泌物和唾液中(Farnaud & Evans, 2003; Masson & Heremans, 1971)，主要由来自人、牛、狗、羊、啮齿动物和鱼类上皮细胞中 的中性粒细胞产生(Gonzalez-Chavez,Arevalo-Gallegos, & Rascon-Cruz, 2009; Legrand, Elass, Carpentier, & Mazurier, 2005)。1.2物质结构和特性乳铁蛋白是一种由大约700个氨基酸组成的单链多肽，分子量约80 kDa(Lonnerdal & Iyer,1995)，由两个亚单位构成，每个亚单位均可结合三价铁 离子(Fe+3)和一个重碳酸盐离子。由于乳铁蛋白和Fe+3结合是可逆的，所以存在自由型的乳铁蛋白(无铁型乳铁蛋白)和Fe+3结合型乳铁蛋白(富铁型乳铁蛋白)。无铁型乳铁蛋白具有开放式结构，而富铁型乳铁蛋白则是闭合的，能 抵抗蛋白酶的水解(Chierici & Vigi, 1994)。对母乳喂养和配方奶粉喂养婴儿进 行研究，发现他们的粪便中都存在完整的乳铁蛋白(L. A. Davidson & Lonnerdal, 1985; Goldman, Garza, Schanler, & Goldblum, 1990; A.Prentice, Ewing, G., Roberts, S., Lucas, A., MacCarthy, A., Jarjou, L., Whitehead, R, 1987;Schanler, Goldblum, Garza, & Goldman, 1986; Spik, Brunet, Mazurier- Dehaine, Fontaine, &Montreuil, 1982)。这提示乳铁蛋白具有益生元效应(Bezkorovainy, 2001)。2.种属差异人乳中的乳铁蛋白约占人乳总蛋白的20%。与人乳相比，牛乳中的乳铁蛋 白含量明显较低。然而，与人乳中观察到的一样，牛乳铁蛋白也是在泌乳早期较 多，随后减少(Ronayne de Ferrer, Baroni,Sambucetti, Lopez, & Cernadas, 2000; Sanchez-Pozo et al., 1986)。精品文档精品文档牛乳铁蛋白含有寡聚糖，在末端非还原性位置具有-1,3-连接的半乳糖残基， (Lonnerdal & Iyer,1995)。而人乳铁蛋白含两个多聚糖，通过N-糖苷键连接在单个多肽链的C-末端(Chierici & Vigi, 1994)。牛乳铁蛋白与人乳铁蛋白在 核酸序列方面有77%同源，在氨基酸序列方面有68%同源。牛乳铁蛋白和人乳铁蛋白约有70%的同源氨基酸序列。二者结构虽略有差 异，但动物和人体评估研究发现，牛乳铁蛋白和人乳铁蛋白的功能相似(Ochoa & Cleary, 2009)。3.乳铁蛋白消化吸收 与人乳铁蛋白相似，牛乳铁蛋白也不能在肠道中被完全消化吸收。用添加人 或牛乳铁蛋白的牛奶喂养婴儿，在婴儿的粪便中可发现完整的乳铁蛋白。据估 计，若摄入的总蛋白中有10%的乳铁蛋白，那么约有1-2%的乳铁蛋白不能被 肠道消化吸收(Chierici & Vigi, 1994)。对母乳和配方粉喂养的婴儿进行研究， 发现足月儿和极低出生体重早产儿的粪便中存在完整的或大片段的乳铁蛋白(L.A. Davidson & Lonnerdal, 1985; Goldman, et al., 1990; A. Prentice, Ewing, G.,Roberts, S., Lucas, A., MacCarthy, A., Jarjou, L., Whitehead, R, 1987;Schanler, et al., 1986; Spik, et al., 1982)。胃肠道中存在的人或牛乳铁蛋白，可 能具有营养和调节功能(Spik,等人, 1982)。荷兰新资源食品处进行的一项科学风险评估，得出以下结论： “与猪崽和猴崽一样，牛乳铁蛋白在新生儿体内也分解得较慢。因此胃和胰腺蛋 白酶对牛乳铁蛋白的不完全水解产物、生物活性片段和完整的乳铁蛋白分子便可 到达肠道， 而且有充分证据表明完整乳铁蛋白被吸收入婴儿和畜崽的血液中。 因 此，“乳铁蛋白的降解和我们饮食当中的其他蛋白质没什么不同”(BureauNieuwe Voedingsmiddelen, 2010; Kuwata et al., 2001)。其他的动物研究资料显示，牛乳铁蛋白在肠道中耐受蛋白酶的降解，并以抗 原的形式被吸收入血液和小鼠的多种组织中。在摄入乳铁蛋白十分钟内，便可在 血液中发现完整的牛乳铁蛋白。研究显示，除肝脏和脾脏外，肾脏也有清除血液 中牛乳铁蛋白的作用（Fischer等人, 2007）。对早产儿的研究发现，乳铁蛋白 要发挥相关功能，就必须以活性形式存留于肠腔，而不能被消化。研究认为乳铁 蛋白可能被早产儿的胃液降解成分散的片段，但在餐后PH值下乳铁蛋白被水解 的可能性最小，从而使未被降解的乳铁蛋白在婴儿体内发挥后续的生物作用 （Britton & Koldovsky, 1989）。多项动物和人体研究对人和牛乳铁蛋白的消化和代谢情况进行了评价，发现 人体对这两种来源的乳精品文档精品文档铁蛋白的代谢形式相似。从胃肠道吸收的乳铁蛋白首先进 入淋巴，然后再出现在血液中，接着血液中乳铁蛋白被分布到脾脏、肝脏和肾脏 中，从而被迅速从体循环消除，而乳铁蛋白中铁离子则被转运到肝脏中，以便运 送到骨髓中去。最后，完整的乳铁蛋白通过婴儿粪便和尿液排除体外（Troost, Saris, &Brummer, 2002）。4.安全性评估：毒理学研究用细菌回复突变试验、大鼠13周经口重复毒性试验和人体临床研究对牛乳 铁蛋白的安全性进行了评估（见表7）。4.1 AMES试验在细菌中进行回复突变试验，以检测牛乳铁蛋白诱发基因突变的可能性。试 验中共使用了鼠伤寒沙门氏菌和大肠埃希菌的5个试验菌株，其中包括3个碱基 对置换型菌株。采用直接法和代谢活化法 （预孵育活化） 两种方法， 乳铁蛋白的 浓度范围为0.16 5.0 mg/100ml（板）。试验结果显示各浓度的试验溶液中回 复突变的菌落数比对照组少1.4倍（Yamauchi等人, 2000a），牛乳铁蛋白无 致突变性。Ames试验的阴性结果这说明牛乳铁蛋白无遗传毒性。4.2急性和亚慢性毒性试验大鼠经口4周急性毒性试验和13周亚慢性毒性试验显示，2000mg/kg/天的 牛乳铁蛋白未见任何毒性效应（Yamauchi et al., 2000b）。大鼠3组，每组雌雄各12只，每天一次分别给予200、600和2000mg/kg的牛乳铁蛋白，连续13周，试验结束时没有动物死亡，也未见动物的体重、进 食量、眼测试、尿分析、血液学、血生化、器官重量、肉眼和微观组织病理学检 查等出现异常。即使最高剂量组动物，也未发生任何有害效应。在2000mg/kg/天剂量组，动物的尿pH值显著降低，且尿中牛乳铁蛋白的 含量低于检出限，这可能是由于乳铁蛋白片段可能会影响尿pH值，但是尿量、 尿中电解质的量、肾脏的组织病理学检查或血生化均未见异常；该组雌性大鼠的 甲状腺重量也显著降低，但是未见形态学的改变；该组还有一只雌性大鼠患有轻 度的十二指肠轻度糜烂， 但未观察到肠道梗阻或出血的迹象 （Yamauchi,等人，2000b） 。未显示毒理学相关效应。精品文档精品文档4.3经口慢性毒性试验为评估膳食牛乳铁蛋白的长期喂养的安全性，Tamano等对雌雄大鼠进行了 一项慢性毒性研究，以确定能预防大鼠结肠和其他器官癌变的牛乳铁蛋白及其相 关化合物长期喂养研究中是否存在毒性效应。在实验I中，给予雄性大鼠含0.2%牛乳铁蛋白的基础饲料喂养40周，未见有害作用，反而血清甘油三酯水平 显著降低至对照组的72%，提示乳铁蛋白可预防代谢综合征。在实验II中，分 别给予雌雄性大鼠含0.02%、0.2%、2.0%、5.0%的牛乳铁蛋白基础饲料以及 含2.0%牛乳铁蛋白水解物或0.1%乳铁蛋白肽（来自牛乳铁蛋白的肽段）的基 础饲料喂养，雄性大鼠喂食60周，雌性大鼠喂食65周（Tamano,等人, 2008），未见动物体重、进食量、饮水量和致癌性等方面出现异常。精品文档精品文档表 7 牛乳铁蛋白体外和体内安全性研究概述研究设计体外或动 物牛乳铁蛋白剂量 范围结果参考文献Ames 试验细菌0.01-5 mg/100 口1无致突变性(Yamauchi, et al.,2000a)单次经口毒性试验大鼠200、600、2000mg/kg/ 天2000mg/kg/天剂量组未出现有害效应(Yamauchi, et al.,2000b)4 周经口重复毒 性大鼠200、 600、2000mg/kg/ 天2000mg/kg/天剂量组未出现有害效应13 周经口重复 毒性大鼠200、 600、2000mg/kg/ 天2000mg/kg/天剂量组未出现有害效应40 周经口重复 毒性大鼠0.2%的牛乳铁蛋 白0.2%牛乳铁蛋白未引起 有害效应(Tama no, et al.,2008)60 和 65 周经口 重复毒性大鼠0.02、0.2、2.0 和5%的牛乳铁蛋白0.02、0.2、2.0 和 5%牛乳铁蛋白未引起毒性效应(Tama no, et al.,2008)上述经口毒性试验结果显示，牛乳铁蛋白的对大鼠的未见有害作用剂量为2000 mg/kg/天。另外，细菌回复突变试验结果也显示，牛乳铁蛋白无致突变 性。因此，认为牛乳铁蛋白是安全的，其未见有害作用水平（NOAEL）估计不会超过2g/kg/天。4.4致敏性科学评估很多专家和法规机构已对牛乳铁蛋白的致敏性进行了科学评估（表8），包括美国食品药品监督管理局（US FDA）、欧洲食品安全局（EFSA）、法国食品安 全局（AFFSA）以及荷兰新资源食品处。精品文档精品文档表 8 牛乳铁蛋白安全性和无致敏性的科学风险评估汇总科学评估名称*独立专家机构食品致敏性讨论US FDA GRN 77通报：每份运动性和功能性食物中 牛乳铁蛋白的含量为100 毫克2001 年 5 月http:/www.accessdata.fda.gov科学专家小组普通食品 包括供 12个月 以上幼儿食用的食品种类关于科学专家小组对 牛乳铁蛋白的安全性 和无致敏性的评估，FDA 没有异议En famil? Premium Newbor n 孚 L 铁蛋 白强化婴儿配方奶粉上市前通报2011FDA婴儿配方 奶粉和医学食品 部En famil? PremiumNewbor nFDA 冋意美赞臣乳铁 蛋白强化 0-3 月龄婴儿 配方奶粉的上市前通 报新西兰新资源食品处委员会牛乳铁蛋白对消费者的安全性评估2010 年 3 月荷兰卫生、福利 及体育部包括婴儿配方奶 粉在内的各种食 品根据安全性评估，牛 乳铁蛋白并不是一种 主要的致敏蛋白质， 可用于婴儿配方奶粉 中法国食品安全局（AFSSA ） 牛乳铁蛋白的安全性评估2010 年 6 月AFSSA包括婴儿配方奶 粉在内的各种食 品根据安全性评估，牛 乳铁蛋白并不是一种 主要的致敏蛋白质， 可用于婴儿配方奶粉 中欧洲食物安全局对牛乳铁蛋白的科 学意见2012www.efsa.europa.eu/efsajour nal膳食、营养与致 敏专家组（NDA 专家 组）包括婴儿配方奶 粉在内的各种食 品EFSA 在 2012 年 5 月 所给岀的两个意见中 都声明在建议使用量 下，牛乳铁蛋白是安 全的。专家组认为牛乳铁蛋 白的致敏风险与其他 奶源的乳铁蛋白相 似”包括独立科学专家机构的风险评估结果以及有资质评估牛乳铁蛋白的潜在致敏性的科学共识在内的全部证据表明，牛乳铁蛋白可以安全用于婴幼儿食品中另外，牛乳铁蛋白的致敏风险与和其他奶源的乳铁蛋白没有不同5.人乳和牛乳中乳铁蛋白的水平5.1人乳中乳铁蛋白的水平精品文档精品文档人乳中的乳铁蛋白约占人乳总蛋白的20%。 与牛乳相比时， 人乳的乳铁蛋 白的水平较高 （Lonnerdal& Iyer,1995），因此确定人乳中乳铁蛋白的水平对 找到牛乳婴儿配方奶粉中的牛乳铁蛋白的适宜水平非常重要。对大量文献进行分析、比对、评估后，发现在哺乳的第一周，人乳铁蛋白水 平最高（5-7g/L），在随后6个月的哺乳期内，人乳中乳铁蛋白的水平随之迅速 下降（0.6-0.9 g/L）。人乳中丰富的乳铁蛋白水平与婴儿快速生长期以及免疫系 统快速成熟期一致。从2724名受试者（52篇研究论文）中得到的人乳中乳铁蛋白的水平见图1。05.2牛乳中乳铁蛋白的水平与人乳相比，牛乳中乳铁蛋白的水平相对较低。对大量文献进行对比、分析 和评估后发现，与人乳相似，牛乳中乳铁蛋白水平在在牛初乳喂养期较高，随后 也迅速下降至很低的水平（图2）。虽然牛乳中乳铁蛋白的含量要比人乳低10倍之多，但牛乳通常都被用作生产婴幼儿配方产品的原料。另外人和牛乳铁蛋白的 氨基酸序列在很大程度上具有同源性，且在体外和动物模型中，这两种形式的乳图1喘乳期间人乳中乳铁蛋白水平变化6 -4 -精品文档精品文档本文档的前半部分对大量体内、体外和临床研究进行总结，并得出结论：牛乳铁蛋白对婴幼儿是安全有效的。这些研究中乳铁蛋白的使用量范围为：0.1-2.85 g /L,所选择的婴幼儿研究对象来自全球各个地区。另外，几项以婴幼儿 为研究对象的临床研究也证实，每天给予婴幼儿0.1-1.0 g的牛乳铁蛋白是具有有益效应的（Chierici, et al., 1992; Egashira, et al., 2009; Egashira, et al., 2007;Paolo Manzoni, et al., 2009; Okuda, et al., 2005）。鉴于成熟人乳中乳铁蛋白的 水平范围为0.6 -2.85g/L,将婴幼儿配方奶粉中乳铁蛋白的水平调整到不超过1.0g/L是合适的。6.乳铁蛋白的使用历史牛乳铁蛋白从牛乳中分离得到，牛乳铁蛋白的商业化应用已在全球得到广泛 的认可。由于其具有较高的营养价值和功效，已被添加到多种产品中，目前市场 上销售的很多产品如脱脂奶、酸奶和营养补铁蛋白的生物利用度相差不大（Ochoa & Cleary,2009），因此为了使婴幼儿配方产品的成分尽量与人乳一致，应该婴幼儿配方产品中乳铁蛋白的水平。图2哺乳期河牛乳中乳铁蛋白的水平变化01.21 -0.8-初（0-5天）过渡期乳天）咸熟乳（孑21天）囉乳期精品文档精品文档充剂中都含有牛乳铁蛋白（表9）从1989年开始，牛乳铁蛋白就开始被添加到婴幼儿配方粉中（Tomita，Wakabayashi，Yamauchi，Teraguchi，和Hayasawa，2002）。表 9 部分添加牛乳铁蛋白的食品市场公司产品名称含量水平韩国lid ong Food可可粉70mg/17g台湾Un i-Preside nt Enterprises蓝山拿铁1g/100mL美国Cytosport运动饮料标签上未标明含量加拿大Muscletech Researchand Developme nt饮料标签上未标明含量台湾Youluck成人奶粉20mg/100g日本Mori naga Milk In dustry乳铁蛋白 200200mg/120g中国New Hope Group巴斯德灭菌奶25mg/100g韩国Maeil Dairy苹果味酸奶50mg/150mL人乳铁蛋白是人乳乳清蛋白的重要成分之一。对全球人乳中乳铁蛋白的含量 的报告进行综合性评估，发现成熟人乳中乳铁蛋白含量为0.6-2.85 g/L。人乳铁蛋白和牛乳铁蛋白分子相似，都由单一多肽链构成且序列具有很高的同源性（Pierce等人，1991）。鉴于人乳中的乳铁蛋白浓度比牛乳要高10倍，所以增加婴幼儿的配方奶粉中牛乳铁蛋白含量是合理的。综上所述，基于全球范围内的母乳中乳铁蛋白水平的评估、乳铁蛋白促进正 常生长和发育的安全性科学依据、普遍接受的安全使用历史和剂量水平等科学数 据，将婴幼儿配方产品中牛乳铁蛋白的最大使用剂量水平调整至1.0 g/L是合适的。