铅盐沉淀法实用教案

提取提取(tq(tq) )分离分离(fnl)纯化纯化鉴定鉴定(jindng)药效毒理研究、结构修饰、新药研发药效毒理研究、结构修饰、新药研发混合物混合物单单第1页/共93页第一页，共93页。第一节 提取(tq)(tq)方法与技术第2页/共93页第二页，共93页。提取方法(fngf)与技术 溶剂提取法 浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、 连续回流提取法、超声提取法 水蒸气蒸馏法 超临界流体萃取(cuq)技术第3页/共93页第三页，共93页。溶剂(rngj)提取法 基本原理 依据(yj)“相似相溶”原理，选择对有效成分溶解度大而对其他成分溶解度小的溶剂，将有效成分从药材组织中溶解出来的方法。第4页/共93页第四页，共93页。溶剂(rngj)提取法 操作关键 溶剂的选择 根据(gnj)欲提取成分的亲水性及亲脂性选择与之相适应的溶剂进行提取。 常用溶剂？ Pet C Pet C6 6H H6 6 无水EtEt2 2O CHO CH3 3Cl EtOAcCl EtOAc Me Me2 2CO EtOH MeOHCO EtOH MeOH H H2 2O O水亲水性有机溶剂亲脂性有机溶剂第5页/共93页第五页，共93页。溶剂(rngj)提取法 操作技术(jsh)方法浸渍法渗漉法煎煮法回流(hu li)提取法连续回流(hu li)提取法超声提取法常用溶剂常用溶剂仪器装置仪器装置操作过程操作过程适用范围适用范围优缺点优缺点第6页/共93页第六页，共93页。溶剂提取(tq)法浸渍法 常用溶剂：水、乙醇 仪器装置：有盖的容器 操作过程：将药材粗粉置容器中 加入适量的溶剂 常温或加热（4080）浸泡（注：浸泡时应将容器盖严，并经常搅拌或振摇），一般浸泡35日或按规定时间 倾取上清夜过滤 提取液。药材可重复浸泡23次 提取范围：适宜(shy)含淀粉、树胶等成分较多的药材以及含挥发性成分、遇热不稳定宜分解或被破坏成分的提取。 提取优缺点：操作简便，但提取时间长、溶剂用量大，提取效率不高。水为溶剂易发霉、变质，必要时需加适量的防腐剂。第7页/共93页第七页，共93页。溶剂(rngj)提取法渗漉法 常用溶剂：水、乙醇 仪器装置：渗漉装置 操作过程：将药材粉末装于渗漉筒内 上端(shn dun)不断添加新溶剂，使其渗过药粉（溶出可溶性成分） 提取液 提取范围：适宜对热不稳定且易分解的成分的提取。 提取优缺点：有较大的浓度差，提取效率较高。但溶剂用量大，操作较烦。第8页/共93页第八页，共93页。溶剂(rngj)提取法渗漉法 粉碎 浸润 装筒 排气 浸渍(jnz) 渗漉 收集渗漉液第9页/共93页第九页，共93页。溶剂(rngj)提取法煎煮法 常用溶剂：水 仪器装置：砂锅、铝锅等（勿用铁器） 操作过程：将药材饮片或粗粉加适量水 直火加热煮沸1h左右 过滤(gul) 提取液 提取范围：对含挥发性及遇热不稳定的成分的药材不易用本法。 提取优缺点：本法简单易行，提取效率比冷浸法高。但水溶性杂质多，水煎液易发霉。第10页/共93页第十页，共93页。溶剂提取(tq)法回流提取(tq)法 常用溶剂：有机溶剂 仪器装置：回流加热装置 操作过程：将药材粗粉装于圆底烧瓶中 加入适量溶剂 水浴中加热回流提取1h 过滤（残渣重复提取两次，合并提取液） 提取液 提取范围：不适用于对热不稳定及易分解的成分(chng fn) 提取优缺点：提取效率比冷浸法高。但装置较复杂第11页/共93页第十一页，共93页。溶剂(rngj)提取法回流提取法 第12页/共93页第十二页，共93页。溶剂提取法连续(linx)回流提取法 常用溶剂：有机溶剂 仪器装置：连续(linx)回流提取装置（索式提取器） 操作过程：将药材装于滤纸袋，放入提取器内连接装置水浴加热回流提取适当时间 提取液。 提取范围：不适用于对热不稳定成分的提取。 提取优缺点：溶剂用量少，提取效率高。但装置设备要求高。第13页/共93页第十三页，共93页。溶剂(rngj)提取法连续回流提取法蒸气蒸气虹吸管虹吸管 萃取溶剂萃取溶剂（盛放固体）（盛放固体）第14页/共93页第十四页，共93页。溶剂(rngj)提取法超声提取法 定义：是一种利用超声波提取有效成分的方法。 基本原理：利用超声波的空化作用，破坏植物药材的细胞，使溶剂(rngj)易于渗入细胞内，同时超声波的强烈振动能传递大量能给浸提的药材和溶剂(rngj)，使它运动们做高速，大大提高了提取效率。 特点：提取时间短、提取效率高、无需加热。 适用范围：遇热不稳定成分的提取、各种溶剂(rngj)的提取。第15页/共93页第十五页，共93页。水蒸气蒸馏(zhngli)法 原理是将水蒸气通入含有挥发性成分的药材中，使药材中挥发性成分随水蒸气蒸馏出来的提取方法。 适用范围本法适用于能随水蒸气蒸馏而不被破坏并难溶于水的成分的提取，常用于挥发油的提取，此外(cwi)挥发性生物碱如麻黄碱和槟榔碱亦可用此法提取。第16页/共93页第十六页，共93页。水蒸气蒸馏(zhngli)法仪器(yq)装置：包括水蒸气发生器、蒸馏瓶、冷凝管、接收器等几部分。三通三通(sn tn)口口（下有螺旋夹）（下有螺旋夹）第17页/共93页第十七页，共93页。水蒸气蒸馏(zhngli)法 注意事项： 1、发生器内的水量不得超过其容积的2/3。 2、安全玻璃管应插到发生器的底部以调节内压。 3、蒸馏器内药材要先加水润湿。 4、通蒸气的导管应插入蒸馏器内的药材底部。 5、蒸馏结束后，首先应打开(d ki)水蒸气发生器与蒸馏器之间三通下口的螺旋夹，放入空气后，再停止加热。第18页/共93页第十八页，共93页。超临界流体(lit)萃取法（SFE） 定义：SFE是一种利用某物质在临界区域形成的流体，对天然药物中有效成分进行萃取分离的新型技术，集提取和分离于一体。 常用超临界流体：CO2、氧化亚氮、乙烷、乙烯、甲苯等。 基本原理：根据超临界流体对溶质有很强的溶解能力，且在温度和压力变化时，流体和密度、粘度和扩散系数随之变化，溶质的亲和力也随之变化，从而使不同性质的溶质被分段萃取出来(ch li)，达到萃取、分离的目的。第19页/共93页第十九页，共93页。超临界流体(lit)萃取法（SFE） 分类（按溶剂和溶质分离方法的不同）： 1、压力(yl)变化法在一定的温度下，使超临界流体减压、膨胀，从而降低溶剂的密度，进行分离。 2、温度变化法即在恒压下提高温度或降低温度从而将超临界流体与溶质分离。至于采用升温还是降温，则要根据压力(yl)条件决定，一般多采用升温操作。 3、吸附法在分离器内装填能吸附萃取物的吸附剂。第20页/共93页第二十页，共93页。超临界流体(lit)萃取法（SFE） 主要设备：萃取(cuq)器、分离器 CO2-SFE特点： （1）可在低温下提取 （2）完全没有残留溶剂 （3）提取效率高，节约能耗 应用：从石油中脱沥青 从咖啡豆中脱咖啡因 从烟草中脱尼古丁 从啤酒花中提取酒花精 香精和香辛料成分的提取第21页/共93页第二十一页，共93页。课堂(ktng)活动用连线将各种提取(tq)(tq)方法与其特点和应用连接起来用有机溶剂自天然(tinrn)药物中提取脂溶性成分渗漉法 煎煮法 提取能随水蒸气蒸馏且不溶于水的成分 提取有升华性的成分提取受热易破坏的成分最简便的方法不加热而浸出效率高有机溶剂用量少而提出效率高 以水为溶剂加热提取升华法 水蒸气蒸馏法 连续回流提取法 回流提取法 浸渍法 第22页/共93页第二十二页，共93页。 小檗碱微溶于水，能溶于热水及乙醇。其盐酸盐难溶于水，易溶于热水；而硫酸盐易溶于水。利用此性质，可选择水温浸或渗漉法提取(tq)。渗漉法操作如下：取三棵针的根粉碎后用1%硫酸浸泡渗漉，渗漉液用盐酸酸化至pH3，加食盐饱和后，小檗碱盐酸盐结晶即析出。 三棵针中的小檗碱可用什么(shn me)方法提取？ 第23页/共93页第二十三页，共93页。 白头翁皂苷易溶于乙醇，可用回流法提取。取白头翁粉末先用乙醚提取，除去脂溶性物质，然后(rnhu)再用乙醇回流，乙醇回流液浓缩至小体积，加适量丙酮，有大量白色粉末沉淀，为白头翁皂苷。 白头翁中的白头翁皂苷可用什么方法(fngf)提取？第24页/共93页第二十四页，共93页。 丹皮酚有挥发性，可用水蒸气蒸馏法提取。取徐长卿全草粉碎后，水蒸气蒸馏，收集蒸馏液，乙醚萃取，回收(hushu)乙醚，得粗结晶，再用乙醇重结晶即得丹皮酚。 徐长卿中的丹皮酚可用什么(shn me)方法提取？第25页/共93页第二十五页，共93页。其他(qt)提取方法与技术 微波辅助提取法 定义：利用微波加热的特性对物料中目标成分选择性提取的方法。 特点：快速、高效、高度选择性、对环境无危害 例子：微波辅助提取鹰爪豆碱及其代谢产物可将产率由传统的52.3%52.3%提高到80.3%80.3%，且省事(shn sh)(shn sh)、省溶剂。第26页/共93页第二十六页，共93页。其他(qt)提取方法与技术 旋流提取法 定义：采用搅拌机搅拌，一定(ydng)(ydng)的搅拌速度、水提温度、提取时间的提取方法。 例子：提取金盏花，对提取液中黄酮类化合物、皂甙、有机酸等进行分析测定，结构表明旋流法的提取效率高。第27页/共93页第二十七页，共93页。其他提取方法(fngf)与技术 半仿生提取法 定义：即从生物生物学的角度，将整体药物研究法与分子(fnz)(fnz)药物研究法相结合，模拟口服给药后经胃肠道装运的环境，为经消化道给药的中药制剂设计的一种新的提取工艺。即将药粉以一定pHpH的碱水提取，提取用水的最佳pHpH和其他工艺参数的选择，可用一种或几种有效成分结合主要药理作用指标，采用比例分割法来优选。 例子：以芍药甙、甘草次酸为指标，比较芍药止痛颗粒半仿生提取法与传统水煎煮法的提取率，结构半仿生提取法优于传统水煎煮法。第28页/共93页第二十八页，共93页。其他(qt)提取方法与技术 中药动态逆流提取法 采用动态罐组式逆流提取工艺、单罐循环提取工艺和中药三效节能蒸发器与喷雾干燥装置，并将其组合起来，可实现(shxin)(shxin)从药材煎煮、浓缩、醇沉、过滤至浸膏或干粉的过程，适用于多种溶剂连续或间隙提取。第29页/共93页第二十九页，共93页。其他提取(tq)方法与技术 酶解法： 中药制剂中的杂质大多(ddu)(ddu)为淀粉、果胶、蛋白质等，可选择相应的酶予以分解出去。 加压逆流提取法： 是将若干提取装置串连联，溶剂与药材逆流通过，并保持一定接触时间的方法。第30页/共93页第三十页，共93页。第二节 分离精制和鉴定的方法(fngf)与技术第31页/共93页第三十一页，共93页。提取液的浓缩(nn su)浓缩可以通过蒸发或蒸馏来完成浓缩可以通过蒸发或蒸馏来完成(wn (wn chng)chng)，具体的方法有常压蒸发、减压，具体的方法有常压蒸发、减压蒸馏、薄膜蒸发、反渗透法、超滤法等。蒸馏、薄膜蒸发、反渗透法、超滤法等。浓缩过程中应注意防止热敏性成分被破浓缩过程中应注意防止热敏性成分被破坏，尽量避免不必要的损失。坏，尽量避免不必要的损失。第32页/共93页第三十二页，共93页。旋转蒸发仪第33页/共93页第三十三页，共93页。分离、精制(jngzh)方法与技术 系统溶剂(rngj)分离法 两相溶剂(rngj)萃取法 沉淀法 结晶法 分馏法 透析法 升华法 色谱法第34页/共93页第三十四页，共93页。系统(xtng)溶剂分离法 原理：按极性由小到大的顺序选用不同极性的溶剂组成溶剂系统(xtng)，一次提取分离提取液中各种不同成分，使各溶解度差异的成分得到分离。 目的：确定有效部位第35页/共93页第三十五页，共93页。第36页/共93页第三十六页，共93页。思考题？ 某中药(zhngyo)中含有脂肪油、生物碱、果胶、皂苷等成分，写出采用适当溶剂，以系统溶剂分离法使之分离的流程，并指出各种成分出现的部位。第37页/共93页第三十七页，共93页。两相溶剂萃取法 原理：利用混合物中各种成分(chng fn)在两种互不相溶的溶剂中的分配系数的差异而达到分离的目的2) 分离分离(fnl)因子（因子（ b值）与分离值）与分离(fnl)难易的关系难易的关系K = CU / CLb b= KA / KBK值与萃取值与萃取(cuq)次数成反比，即次数成反比，即K值越大，值越大， 萃取萃取(cuq)次数越少，反之越多次数越少，反之越多b b值越大，越易分离；值越大，越易分离； b 1b 1时，无法分离时，无法分离 1) 分配系数（分配系数（K值）与萃取次数的关系值）与萃取次数的关系第38页/共93页第三十八页，共93页。两相溶剂萃取法 方法(fngf)： 简单萃取法 逆流连续萃取法 逆流分溶法 液滴逆流分配法第39页/共93页第三十九页，共93页。两相溶剂萃取法简单(jindn)萃取法 操作方法 注意事项乳化乳化(rhu)现象现象如何避免(bmin)？如何破坏？第40页/共93页第四十页，共93页。简单(jindn)萃取法 避免乳化避免乳化(rhu)(rhu)： 在操作过程中，可采用旋转混合、改用氯仿在操作过程中，可采用旋转混合、改用氯仿- -乙醚混合溶剂萃取或加大有机溶剂乙醚混合溶剂萃取或加大有机溶剂量等措施尽量避免乳化量等措施尽量避免乳化(rhu)(rhu)现象的发生。现象的发生。 第41页/共93页第四十一页，共93页。简单(jindn)萃取法 破坏乳化：破坏乳化： 较长时间放置。较长时间放置。 轻度乳化可用一金属丝在乳化层中搅动使之破坏。轻度乳化可用一金属丝在乳化层中搅动使之破坏。 将乳化层抽滤。将乳化层抽滤。 将乳化层加热或冷冻。将乳化层加热或冷冻。 分出乳化层，再用新溶剂萃取。分出乳化层，再用新溶剂萃取。 若因两种溶剂能部分互溶而发生乳化，可加入少量若因两种溶剂能部分互溶而发生乳化，可加入少量电解质（如氯化钠），利用盐析作用加以破坏。在两电解质（如氯化钠），利用盐析作用加以破坏。在两相比重相差很小时相比重相差很小时(xiosh)(xiosh)，也可加入食盐增加水，也可加入食盐增加水的比重。的比重。 滴加数滴醇类如戊醇改变表面张力，破坏乳状液。滴加数滴醇类如戊醇改变表面张力，破坏乳状液。第42页/共93页第四十二页，共93页。两相溶剂萃取法简单(jindn)萃取法 pH梯度萃取法？ 碱性、酸性、两性成分 举例：生物碱、黄酮、蒽醌 提示：全书(qun sh)重点内容之一 利用混合物中各成分的酸（或碱）性强弱不同，相应改变溶剂PH值使之相继成盐或游离，改变成分在溶剂系统中的分配系数而与其他分成(fn chn)分离的一种方法。第43页/共93页第四十三页，共93页。两相溶剂萃取法逆流连续(linx)萃取法 利用相对(xingdu)密度差异第44页/共93页第四十四页，共93页。两相溶剂萃取法逆流(nli)分溶法 利用分配(fnpi)系数不同第45页/共93页第四十五页，共93页。两相溶剂萃取法液滴逆流分配法 利用(lyng)分配系数不同第46页/共93页第四十六页，共93页。沉淀法 1、含义 在天然药物的提取液中加入某些试剂，使产生沉淀或降低(jingd)溶解度，从而获得有效成分或去除杂质的方法。若生成的沉淀是有效成分，要求反应必须可逆；若生成的沉淀是杂质，则为不可逆反应。 2、方法 酸碱沉淀法、试剂沉淀法、铅盐沉淀法第47页/共93页第四十七页，共93页。沉淀法酸碱沉淀法黄连(hunglin)粗粉乙醇乙醇(y chn)(y chn)温浸温浸、浓缩、浓缩乙醇(y chn)浓缩液放置、过滤放置、过滤滤液加浓加浓HClHCl，放置，放置酸性母液NH4OH碱化，乙醚处理沉淀甲基黄连碱第48页/共93页第四十八页，共93页。沉淀法酸碱沉淀法 1、原理 利用某些成分能在酸（或碱）中溶解，继而又在碱（或酸）中生成沉淀的性质。这种反应是可逆的，可使有效成分与其他(qt)杂质分离。 2、适用(shyng)范围 此法适用(shyng)于分离提纯酸性、碱性或两性有 机化合物，如黄酮、蒽醌类酸性成分、一些 生物碱、蛋白质等。第49页/共93页第四十九页，共93页。沉淀法酸碱沉淀法 3、应用(yngyng)（1）酸溶碱沉法碱性化合物（生物碱） 例1：曼陀罗叶石灰水适量，搅拌均匀石灰水适量，搅拌均匀(jnyn)(jnyn)，苯回，苯回流提取流提取苯提取液0.5%H2SO40.5%H2SO4萃取萃取(cuq)(cuq)酸性水液 苯 液NaOHNaOH碱化碱化到到pH11pH11，苯提，苯提硫酸阿托品第50页/共93页第五十页，共93页。沉淀法酸碱沉淀法例2：苦参(k cn)粗粉MeOHMeOH室温室温(sh wn)(sh wn)浸渍浸渍3 3次，每次，每次次24h24hMeOH提取液回收回收(hushu)Me(hushu)MeOHOHMeOH浓缩液加水稀释，加稀加水稀释，加稀HClHCl调调pH3pH34 4，EtEt2 2O O洗涤洗涤2 2次次药 渣酸水液 Et2O液稍浓缩，加稍浓缩，加NaOHNaOH调调pH13pH13左右，加入左右，加入CHCH2 2ClCl2 2提取提取总生物碱第51页/共93页第五十一页，共93页。沉淀法酸碱沉淀法 3、应用（2）碱溶酸沉法酸性(sun xn)化合物（具有酚羟基的黄酮，具有羧基、酚羟基的蒽醌） 具有内酯环结构的化合物（香豆素）例：槐米粗粉加约加约6 6倍量已煮沸的倍量已煮沸的0.4%0.4%硼砂水溶液，搅拌下加石灰乳至硼砂水溶液，搅拌下加石灰乳至pH8pH89 9，并保持该，并保持该pHpH值下微沸值下微沸202030min30min，趁热，趁热(chn r)(chn r)抽滤抽滤同法再提同法再提2 2次，合并提取液次，合并提取液 提取液在在60607070，搅拌下用浓，搅拌下用浓HClHCl调调pH3pH34 4，静置，沉淀完全抽，静置，沉淀完全抽滤，水洗至洗液呈中性滤，水洗至洗液呈中性(zhngxng)(zhngxng)，6060干燥干燥 芸香苷粗品第52页/共93页第五十二页，共93页。沉淀法酸碱沉淀法 3、应用（3）等电点沉淀(chndin)法两性化合物（蛋白质） 蛋白质等两性物质，通过调节pH至蛋白质的等电点使其沉淀(chndin)，从而达到提取和纯化的目的。第53页/共93页第五十三页，共93页。沉淀法试剂(shj)沉淀法例例1 1：生物碱沉淀试剂（碘：生物碱沉淀试剂（碘- -碘化碘、钾化汞钾、碘化碘、钾化汞钾、碘化铋钾、苦味酸，等）碘化铋钾、苦味酸，等）能使生物碱类能使生物碱类生成沉淀自酸性溶液生成沉淀自酸性溶液(rngy)(rngy)中析出。中析出。例例2 2：雷氏铵盐沉淀法：雷氏铵盐沉淀法雷氏铵盐可与水溶雷氏铵盐可与水溶性季铵碱生成难溶于水的生物碱雷氏铵盐沉性季铵碱生成难溶于水的生物碱雷氏铵盐沉淀析出。淀析出。例例3 3：胆甾醇沉淀法：胆甾醇沉淀法胆甾醇能与甾体皂苷胆甾醇能与甾体皂苷生成沉淀。生成沉淀。第54页/共93页第五十四页，共93页。沉淀法试剂(shj)沉淀法 1、原理(yunl) 利用一些成分能与某些试剂产生沉淀的性质，或利用某些成分在不同溶剂中溶解度的差异，通过加入特定试剂或溶剂使生成沉淀，与其他成分分离。 2、常用(chn yn)方法乙醇沉淀法第55页/共93页第五十五页，共93页。沉淀法试剂(shj)沉淀法（1）水提醇沉法 在药材浓缩的水提液中加入数倍量高浓度乙醇(y chn)，使之沉淀而除去多糖、淀粉、黏液质、蛋白质等水溶性杂质。（2）醇提水沉法 在药材浓缩的乙醇(y chn)提取液中加入数倍量水稀释，放置使之沉淀而除去树脂、叶绿素等水不溶性杂质。第56页/共93页第五十六页，共93页。沉淀法试剂(shj)沉淀法水提醇沉法操作要点水提醇沉法操作要点 药液浓缩时，最好采用减压、低温，浓缩前可药液浓缩时，最好采用减压、低温，浓缩前可视情况调节视情况调节pHpH，以保留更多的有效成分。，以保留更多的有效成分。 以分次方式或梯度递增方式加入乙醇，逐步提以分次方式或梯度递增方式加入乙醇，逐步提高乙醇浓度，当药液中乙醇浓度达到高乙醇浓度，当药液中乙醇浓度达到80%80%以上，以上，可使蛋白质、淀粉、黏液质、油脂、树脂、树胶可使蛋白质、淀粉、黏液质、油脂、树脂、树胶(shjio)(shjio)等杂质沉淀去除。等杂质沉淀去除。 加乙醇后，将容器口盖严。自然降至室温，再加乙醇后，将容器口盖严。自然降至室温，再移至冷库中静置移至冷库中静置12-2412-24小时。小时。第57页/共93页第五十七页，共93页。沉淀法试剂(shj)沉淀法醇提水沉法操作要点醇提水沉法操作要点 先用乙醇提取，树脂、油脂、色素等杂质可溶先用乙醇提取，树脂、油脂、色素等杂质可溶于乙醇而被提取出来。于乙醇而被提取出来。 醇提取液回收乙醇。醇提取液回收乙醇。 加水搅拌，静置冷藏一段时间。加水搅拌，静置冷藏一段时间。 待完全沉淀待完全沉淀(chndin)(chndin)后滤过除去。后滤过除去。第58页/共93页第五十八页，共93页。沉淀法铅盐沉淀法 1、原理 利用中性醋酸铅和碱式醋酸铅在水或稀醇溶液中，能与多种天然药物化学成分生成难溶性的铅盐或铅络合物沉淀，使有效成分与杂质(zzh)分离。此法既可使杂质(zzh)生成铅盐除去，又可使有效成分生成铅盐沉淀。 第59页/共93页第五十九页，共93页。沉淀法铅盐沉淀法 2、适用范围 中性醋酸(c sun)铅具有羧基、邻二酚羟基的酸性物质 如:有机酸、蛋白质、氨基酸、黏液质、鞣质、树脂、酸性皂苷、部分黄酮苷、蒽醌苷、香豆素、某些色素，等 碱式醋酸(c sun)铅凡具有酚羟基的物质 大部分中性成分，如中性皂苷、糖类、某些异黄酮及其苷、某些碱性较弱的生物碱，等第60页/共93页第六十页，共93页。沉淀法铅盐沉淀法3、操作过程 沉淀(chndin) 脱铅 脱硫第61页/共93页第六十一页，共93页。、沉淀、沉淀(chndin)(chndin)、脱铅、脱铅、脱硫、脱硫混合(hnh)成分的水或乙醇溶液滴加饱和中性(zhngxng)醋酸铅至不再生成沉淀，抽滤沉淀(脱铅处理)滤液滴加饱和碱式醋酸铅碱式醋酸铅至不再生成沉淀，抽滤沉淀(脱铅处理)滤液(脱铅处理) 沉淀或沉淀或滤液悬浮于水或乙醇中通入硫化氢硫化氢，抽滤黑色沉淀（PbS）滤液水洗黑色沉淀洗水 合并脱铅滤液通CO2气体气泡（CO2、H2S）净化液第62页/共93页第六十二页，共93页。沉淀法铅盐沉淀法 、沉淀 通常将天然药物的水或醇提取液先加入中性醋酸铅浓溶液，静置后滤出沉淀，并将沉淀洗液并入滤液，于滤液中加碱式醋酸铅饱和溶液至不发生沉淀为止，这样就可得到(d do)中性醋酸铅沉淀物、碱式醋酸铅沉淀物及母液三部分。第63页/共93页第六十三页，共93页。沉淀法铅盐沉淀法 、脱铅 方法：硫化氢法 中性硫酸盐法 阳离子交换树脂法 硫化氢脱铅比较彻底，将铅盐沉淀悬浮于新溶剂中，通以硫化氢气体，使分解并转为不溶性硫化铅而沉淀。含铅盐母液亦须先如法脱铅处理(chl)，再浓缩精制。第64页/共93页第六十四页，共93页。沉淀法铅盐沉淀法 、脱硫 原因：溶液中可能存有多余的硫化氢，可能会参与化学反应(huxu fnyng) 方法：通入二氧化碳气体第65页/共93页第六十五页，共93页。黄芩(hun qn)粗粉加加1010倍量沸水倍量沸水(fi shu)(fi shu)，煎煮，煎煮2 2次，每次次，每次1h1h 沉淀(chndin) 上清液（水溶性杂质）加适量水悬浮，加加适量水悬浮，加40%NaOH40%NaOH调调pHpH至至7 7再加等量再加等量95%95%乙醇，滤过乙醇，滤过 药渣 滤液加加HClHCl调调pH1pH12 2，充分搅拌，充分搅拌8080保温保温30min30min，放冷过夜，滤过，放冷过夜，滤过 沉淀（粗品） 滤液水洗，水洗，50%50%乙醇洗，再用乙醇洗，再用95%95%乙醇洗，或重结晶乙醇洗，或重结晶黄芩苷课堂练习课堂练习第66页/共93页第六十六页，共93页。人参(rnshn)废渣（550g）30%EtOH30%EtOH渗漉渗漉 EtOH渗漉液 残渣(cn zh) （含人参皂苷）沸水沸水(fi shu)(fi shu)煮提煮提2 2次，次，每次每次6h6h，滤过，滤过滤液浓缩至原体积的浓缩至原体积的1/101/10加加EtOHEtOH至含醇量达至含醇量达85%85%静置滤过，离心静置滤过，离心人参多糖粗品（约50g）课堂练习课堂练习第67页/共93页第六十七页，共93页。中药材90%EtOH90%EtOH提取提取(tq)(tq)提取液浓缩浓缩(nn su)(nn su)浓缩液CHCl3CHCl3萃取萃取(cuq)(cuq)氯仿层 水层加碱式醋酸铅液，滤过加碱式醋酸铅液，滤过滤液 沉淀通通H H2 2S S脱铅，过滤，水洗，悬浮于水中脱铅，过滤，水洗，悬浮于水中 滤液 沉淀课堂练习课堂练习第68页/共93页第六十八页，共93页。课堂(ktng)活动七叶一枝花七叶一枝花Paris polyphylla Paris polyphylla 有清热解毒、消肿有清热解毒、消肿散瘀的作用，其含有的甾体类皂苷的提取分离方法散瘀的作用，其含有的甾体类皂苷的提取分离方法如下：取药材粉末用乙醇回流提取三次，提取液减如下：取药材粉末用乙醇回流提取三次，提取液减压浓缩压浓缩(nn su)(nn su)后，残留物用石油醚脱脂，加水溶解，水液后，残留物用石油醚脱脂，加水溶解，水液用正丁醇萃取，所得萃取液水洗后减压浓缩用正丁醇萃取，所得萃取液水洗后减压浓缩(nn su)(nn su)，残留，残留物溶于少量乙醇，加大量丙酮即析出沉淀物，必要物溶于少量乙醇，加大量丙酮即析出沉淀物，必要时，可将沉淀物再溶于乙醇，加丙酮沉淀，反复处时，可将沉淀物再溶于乙醇，加丙酮沉淀，反复处理几次，滤过，即得淡黄色皂苷粉末。请分析此提理几次，滤过，即得淡黄色皂苷粉末。请分析此提取分离方法，回答以下问题：取分离方法，回答以下问题：第69页/共93页第六十九页，共93页。课堂(ktng)活动（1）操作过程中使用了什么分离）操作过程中使用了什么分离(fnl)技术？技术？（2）萃取）萃取(cuq)的两相溶剂分别是什么？的两相溶剂分别是什么？（3）萃取结束后应保留上层液还是下层液？）萃取结束后应保留上层液还是下层液？（4）萃取过程中若出现了乳化现象，该如何破乳？）萃取过程中若出现了乳化现象，该如何破乳？（5）选择的沉淀技术属于哪一种？）选择的沉淀技术属于哪一种？第70页/共93页第七十页，共93页。结晶法 原理：利用混合物中各成分对某种溶剂溶解度的差别，使单一(dny)成分以结晶状态析出，从而达到分离目的。 关键：结晶溶剂的选择条件？ 第71页/共93页第七十一页，共93页。结晶( jijng)与重结晶( jijng)法关键关键(gunjin)(gunjin)选择合适(hsh)(hsh)的溶剂是结晶法的关键。 理理想想溶溶剂剂具具备备的的条条件件1 1、不与结晶物质发生化学反应。、不与结晶物质发生化学反应。 2 2、对结晶物质的溶解度随温度不同有显著差异，、对结晶物质的溶解度随温度不同有显著差异，热时溶解度大，冷时溶解度小。热时溶解度大，冷时溶解度小。3 3、对可能存在的杂质，溶解度非常大或非常小、对可能存在的杂质，溶解度非常大或非常小（即（即冷热均溶或均不溶冷热均溶或均不溶），前一种情况可使杂质留），前一种情况可使杂质留在母液中，后一种情况可趁热滤过以除去。在母液中，后一种情况可趁热滤过以除去。 4 4、沸点适中，不宜过高或过低，过低则易挥发、沸点适中，不宜过高或过低，过低则易挥发损失，过高则不易去除。损失，过高则不易去除。5 5、能给出较好的结晶。、能给出较好的结晶。第72页/共93页第七十二页，共93页。结晶( jijng)与重结晶( jijng)法关键关键(gunjin)(gunjin)选择合适的溶剂(rngj)(rngj)是结晶法的关键。 常常用用溶溶剂剂查阅有关的文献资料查阅有关的文献资料参考同类型化合物的性质及其所选结晶溶剂参考同类型化合物的性质及其所选结晶溶剂遵循遵循“相似相溶相似相溶”规律，结合被提纯物的极性规律，结合被提纯物的极性小量摸索试验小量摸索试验第73页/共93页第七十三页，共93页。结晶( jijng)与重结晶( jijng)法关键关键(gunjin)(gunjin)选择(xunz)(xunz)合适的溶剂是结晶法的关键。 混混合合溶溶剂剂乙醇乙醇- -水、醋酸水、醋酸- -水、丙酮水、丙酮- -水、吡啶水、吡啶- -水、乙醚水、乙醚- -甲甲醇、乙醚醇、乙醚- -丙酮、乙醚丙酮、乙醚- -石油醚、苯石油醚、苯- -石油醚等，以石油醚等，以两种能以任意比例互溶的溶剂组成。两种能以任意比例互溶的溶剂组成。要求低沸点溶剂对被提纯物的溶解度大，而高沸要求低沸点溶剂对被提纯物的溶解度大，而高沸点溶剂对被提纯物的溶解度小。点溶剂对被提纯物的溶解度小。 第74页/共93页第七十四页，共93页。结晶( jijng)与重结晶( jijng)法 1、结晶溶液的制备、结晶溶液的制备 2、趁热滤过，除去、趁热滤过，除去(ch q)不溶性杂质不溶性杂质 3、将滤液放冷，使析出结晶、将滤液放冷，使析出结晶 4、抽气滤过，将结晶从母液中分出、抽气滤过，将结晶从母液中分出 5、重结晶、重结晶 6、晶体的干燥、晶体的干燥操作步骤操作步骤第75页/共93页第七十五页，共93页。课堂(ktng)活动槐米中主含化学成分为芸香苷，其溶解度在槐米中主含化学成分为芸香苷，其溶解度在冷水中为冷水中为1:100001:10000，沸水中为，沸水中为1:2001:200；冷醇中；冷醇中为为1:6501:650，热醇中为，热醇中为1:601:60，不溶于乙醚、苯、，不溶于乙醚、苯、氯仿、石油醚等溶液中，经提取后所得的粗氯仿、石油醚等溶液中，经提取后所得的粗制芸香苷进一步精制的方法如下：取粗制品制芸香苷进一步精制的方法如下：取粗制品2 2克，悬浮于蒸馏水中，煮沸至芸香苷全部克，悬浮于蒸馏水中，煮沸至芸香苷全部溶解，趁热抽滤，放冷后即可析出精制芸香溶解，趁热抽滤，放冷后即可析出精制芸香苷结晶。请进行简单苷结晶。请进行简单(jindn)(jindn)的操作练习，并回答以的操作练习，并回答以下问题：下问题：第76页/共93页第七十六页，共93页。课堂(ktng)活动（1 1）此方法）此方法(fngf)(fngf)属于何种分离技术？属于何种分离技术？（2 2）选择）选择(xunz)(xunz)的溶剂是什么？的溶剂是什么？（3 3）选择此方法利用了芸香苷什么性质？）选择此方法利用了芸香苷什么性质？（4 4）若自然放冷无结晶析出或析出量少，可用什么）若自然放冷无结晶析出或析出量少，可用什么方法促使生成良好结晶？方法促使生成良好结晶？第77页/共93页第七十七页，共93页。透析法 透析法是利用小分子物质在溶液(rngy)中可通过透析膜，而大分子物质不能通过透析膜的性质达到分离的方法。第78页/共93页第七十八页，共93页。透析法 透析法是利用提取液中小分子物质可通过透析膜，而大分子物质不能通过透析透析法是利用提取液中小分子物质可通过透析膜，而大分子物质不能通过透析膜的性质使分子量差异较大的物质达到分离膜的性质使分子量差异较大的物质达到分离(fnl)的方法。的方法。第79页/共93页第七十九页，共93页。透析法透析法示意图水水透析膜透析膜水水第80页/共93页第八十页，共93页。透析法 所选透析膜合适与否是透析法成败的关键所选透析膜合适与否是透析法成败的关键(gunjin) 透析膜的膜孔有不同规格，要根据具体情况加以选择。透析膜的膜孔有不同规格，要根据具体情况加以选择。 常用的透析膜有动物性膜、火棉胶膜、羊皮纸膜（硫酸纸膜）、玻璃纸膜，蛋常用的透析膜有动物性膜、火棉胶膜、羊皮纸膜（硫酸纸膜）、玻璃纸膜，蛋白胶（明胶）膜等。白胶（明胶）膜等。操作操作(cozu)(cozu)提示提示第81页/共93页第八十一页，共93页。透析法 本法常用于分离纯化天然本法常用于分离纯化天然(tinrn)药物化学成分中的大分子物质如：皂苷、蛋药物化学成分中的大分子物质如：皂苷、蛋白质、多肽、多糖等。白质、多肽、多糖等。 透析结束后，无机盐、单糖、双糖等小分子杂质可被除去。透析结束后，无机盐、单糖、双糖等小分子杂质可被除去。操作操作(cozu)(cozu)提示提示第82页/共93页第八十二页，共93页。分馏法 此法是利用混合物中各成分沸点的不同进行分离的方法。 适用于能够(nnggu)完全互溶的液体混合物的分离。 在中药化学成分的研究工作中，常用分馏法分离挥发油及一些液体生物碱。第83页/共93页第八十三页，共93页。分馏法 一般液体混合物沸点相差在100以上，可将溶液重复蒸馏多次，即可达到(d do)分离的目的，如沸点相差在25以下，则需采用分馏法。沸点相差越小，需要的分馏装置越精细。第84页/共93页第八十四页，共93页。分馏法 一般情况下，如果液体混合物成分间沸点相差较大一般情况下，如果液体混合物成分间沸点相差较大(jio d)(jio d)，可将溶液通过重，可将溶液通过重复多次的蒸馏即可达到分离的目的；如果沸点相差较小，则需采用分馏柱；当复多次的蒸馏即可达到分离的目的；如果沸点相差较小，则需采用分馏柱；当沸点相差越小，需要的分馏装置越精细。沸点相差越小，需要的分馏装置越精细。 可用此法分离天然药物中得到的液体混合成分，如挥发油、液体生物碱等。可用此法分离天然药物中得到的液体混合成分，如挥发油、液体生物碱等。操作操作(cozu)(cozu)提示提示第85页/共93页第八十五页，共93页。升华(shnghu)法 原理：利用某些固体物质具有在低于其熔点的温度下受热后，不经熔融就直接转化为蒸气，遇冷后又凝固为原来的固体的性质(xngzh)，使之从天然药物中提出的方法。 适用范围：本法适用于具有升华性的某些生物碱类、香豆素类、有机酸类的提取，如咖啡碱、苦马豆素、山道年、樟脑、丹皮酚、七叶内酯、水杨酸、苯甲酸等。 第86页/共93页第八十六页，共93页。升华(shnghu)法第87页/共93页第八十七页，共93页。补充(bchng)：盐析法 是向混合物水溶液中加入易溶于水的无机盐至一定浓度或成饱和状态，使某些中药成分在水中溶解度降低而析出(xch)，达到与其他杂质分离的目的。 常用于盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。 第88页/共93页第八十八页，共93页。课堂(ktng)活动请用连线将下列各种混合成分与其(yq)相适应的分离方法连接起来。毒芹总碱中的毒芹碱（沸点(fidin)166167）和羟基毒芹碱（沸点(fidin)226）两相溶剂萃取法 沉淀法 向黄柏粗粉渗漉液中加入一定量的氯化钠得盐酸小檗碱粗品分离蛋白质中含有的无机盐和其他小分子 杂质分离除去生物碱盐水提取液中所含的鞣质杂质分离水提液中皂苷与其他杂质，加入戊醇精制盐酸小檗碱粗制品（已知盐酸小檗碱热水易溶，冷水难溶）分离提取液中未知的各种混合成分盐析法 分馏法 透析法 结晶法 系统溶剂分离法 第89页/共93页第八十九页，共93页。 栝楼提取液可取新鲜栝楼根刨去表皮，压汁，汁栝楼提取液可取新鲜栝楼根刨去表皮，压汁，汁液液(zhy)(zhy)放置过夜，离心后倾出上清液获得。放置过夜，离心后倾出上清液获得。分离提取液中的天花粉蛋白可选择试剂沉淀法。分离提取液中的天花粉蛋白可选择试剂沉淀法。取提取液加等量乙醇至有沉淀析出，离心除去，取提取液加等量乙醇至有沉淀析出，离心除去，母液再加母液再加0.50.5倍量乙醇，离心收集此部分沉淀；倍量乙醇，离心收集此部分沉淀；往母液中再加往母液中再加1 1倍量的乙醇，析出较纯蛋白质沉倍量的乙醇，析出较纯蛋白质沉淀，沉淀用水溶解后，冷冻干燥，即得天花粉蛋淀，沉淀用水溶解后，冷冻干燥，即得天花粉蛋白纯品。白纯品。栝楼中的天花粉蛋白可用什么方法(fngf)分离？第90页/共93页第九十页，共93页。 尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的溶解度相差很小，尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的溶解度相差很小，化学结构只在侧链上相差一个化学结构只在侧链上相差一个CH2CH2基团，可利用基团，可利用(lyng)(lyng)两者在氯仿和两者在氯仿和pH 5.0pH 5.0的磷酸氢二钠的磷酸氢二钠柠檬酸缓冲液中的分配系数不同，对提取液进柠檬酸缓冲液中的分配系数不同，对提取液进行行4040管逆流分配法分离，最后经薄层色谱检查，管逆流分配法分离，最后经薄层色谱检查，表明表明5 51010号管中得到三尖杉酯碱，号管中得到三尖杉酯碱，11111414号管号管中得到三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的混合物，中得到三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的混合物，15152020号管中得到高三尖杉酯碱，获得部分分号管中得到高三尖杉酯碱，获得部分分离。离。如何(rh)分离三尖杉提取物中的三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱？第91页/共93页第九十一页，共93页。 将甘草用冷水浸泡提取将甘草用冷水浸泡提取2 2次，合并两次滤液，蒸发浓次，合并两次滤液，蒸发浓缩，放冷，加入乙醇并在低温下放置缩，放冷，加入乙醇并在低温下放置2 2天后滤过，所天后滤过，所得滤液再次蒸发浓缩至形成黑褐色粘稠状抽提液，得滤液再次蒸发浓缩至形成黑褐色粘稠状抽提液，内含内含(ni hn)(ni hn)甘草甜素约为甘草甜素约为1515，继续将此抽提，继续将此抽提液浓缩，干燥后生成粗结晶，最后用稀乙醇对此粗液浓缩，干燥后生成粗结晶，最后用稀乙醇对此粗结晶进行重结晶，即可得到精制的甘草甜素。结晶进行重结晶，即可得到精制的甘草甜素。用结晶法分离(fnl)纯化甘草提取液中的甘草甜素第92页/共93页第九十二页，共93页。感谢您的观看(gunkn)！第93页/共93页第九十三页，共93页。