加味香连丸的定性鉴别及黄连生物碱的含量测定

会计学1加味香连丸的定性鉴别及黄连生物碱的加味香连丸的定性鉴别及黄连生物碱的含量测定含量测定一、仪器与药品1）层析缸 2）三用紫外分析仪3）喷雾瓶 4）吹风机5）紫外分光光度计6）小层析柱：高13cm,内径8mm，2个 7）中性Al2O3(150200目) 8）滴管9）加味香连丸样品 10）盐酸小檗碱对照品、黄连、木香对照药材11）95%乙醇第1页/共33页1、定量用样品的净化1）定容：将索氏提取样品定容到25mL。2）净化A、装柱：取2个高13cm、内径8mm的Al2O3柱，平行装柱。分别垫上少许棉花，装入中性氧化铝，高度1.5cm左右。1个作空白，另1个加入样品。B、加样与洗脱：将两根小柱下分别接上10mL容量瓶，样品用小柱中精密加入样品液0.5mL，待样品完全被填料吸收后，加入95%EtOH至洗脱完全。空白用小柱中的填料直接用95%乙醇平行洗脱。接近10mL时停止洗脱，分别定容到10mL。C、含量测定：采用外标一点法于350nm 测定含量供试品紫外测定：空白采用自制空白对照品紫外测定：空白采用95%乙醇，对照品浓度：0.06mg/mLD、计算（100g干品中含有多少克总生物碱）二、实验步骤A供/A标 = C供/C标约0.1g25mL0.5mL10mL含量(%) =C供Dm 100%第2页/共33页1、加味香连丸中黄连和木香的薄层鉴别1）黄连的鉴别取本品60mg，研细，加乙醇5ml，置水浴中加热回流15分钟，滤过，滤液补加乙醇使成5ml，作为供试品溶液。另取黄连对照药材50mg，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.04mg的溶液。用点样用毛细管分别取1.5cm左右，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：氯仿：甲醇：氨水：二乙胺（8：2：2：1：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个黄色荧光斑点。二、实验步骤 O O O O O O O O 小檗碱样品黄连对照药材例1.5cm圆形点样饱和10min第3页/共33页1、加味香连丸中黄连和木香的薄层鉴别2）木香的鉴别取本品0.5g，研细，加乙醚5ml，放置2小时，时时振摇，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取木香对照药材0.2g，加乙醚5ml，同法制成对照药材溶液，用点样用毛细管分别取1.5cm左右，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：丙酮（10：3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色至蓝紫色斑点。二、实验步骤 O O OO O O 加味香连丸针对木香提取液木香对照药材例第4页/共33页开机自检通过后，经过15分钟的预热，系统自动进入主菜单。第5页/共33页波长：波长：546.0nm 09：21：19取消下翻选取D2W系统主菜单系统主菜单光度计模式光度计模式 定量测量定量测量光谱扫描光谱扫描动力学测量动力学测量DNA/蛋白质测量蛋白质测量测试波长当前时间氘灯点亮显示钨灯点亮显示第6页/共33页波长：波长：546.0nm 09:21:19取消下翻选取D2W系统主菜单系统主菜单光度计模式光度计模式定量测量定量测量光谱扫描光谱扫描动力学测量动力学测量DNA/DNA/蛋白质测量蛋白质测量点击点击“选取选取”功能键，或点功能键，或点 ，进入光度计模式。，进入光度计模式。ENTER第7页/共33页波长：波长：546.0nm I: 19669 09:21:19设置单位模式因子标样测量D2W0. 0 0 0 A b s首先选择测量所需要的波长。首先选择测量所需要的波长。点点 进入进入。GOTO第8页/共33页波长：波长：546.0nm I: 19669 09:21:19D2W0. 0 0 0 A b s 请输入波长：请输入波长：546.0_使用数字键和小数点输入所需要的波长。使用数字键和小数点输入所需要的波长。第9页/共33页波长：波长：546.0nm I: 19669 09：21：19D2W0. 0 0 0 A b s请输入波长：请输入波长：350.0_350.0_输入完毕后，点击输入完毕后，点击 进行确认。进行确认。ENTER输入的测量波长第10页/共33页波长：波长：350.0nm I ：19669 09:21:19设置单位模式因子标样测量D2W0. 0 0 0 A b s波长将自动调节到所设置的波长，系统将自动校零。波长将自动调节到所设置的波长，系统将自动校零。波长已调整第11页/共33页波长：波长：350.0nm I: 19669 09:21:19设置单位模式因子标样测量D2W样品浓度单位设定键0. 0 0 0 A b s使用四个方向键来选择设置单位模式，选择完毕后，使用四个方向键来选择设置单位模式，选择完毕后，点点 确认。确认。ENTER第12页/共33页波长：波长：350.0nm I ：19669 09：21：19D2W0. 0 0 0 m g / L 请输入含量单位：请输入含量单位：mg/L使用四个方向键来选择浓度单位，选择完毕后，点使用四个方向键来选择浓度单位，选择完毕后，点 确认。确认。ENTER第13页/共33页波长：波长：450.0nm I: 19669 09:21:19设置单位模式因子标样测量D2W0. 0 0 0 A b s设定测量模式：吸光度模式、透过率模式、浓度模式。设定测量模式：吸光度模式、透过率模式、浓度模式。点击点击“模式模式”功能键进入。功能键进入。“模式”功能键第14页/共33页吸光度模式：显示样品的吸光度；透过率模式：显示样品的透过率；含量模式： 根据系数法C=KA，直接显示试样浓度。波长：波长：350.0nm I: 19669 09:21:19D2W0. 0 0 0 A b s请输入模式：请输入模式： 吸光度吸光度使用四个方向键来选择测量模式，选择完毕后，使用四个方向键来选择测量模式，选择完毕后，点点 确认。确认。ENTER第15页/共33页波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位模式因子标样测量D2W0. 0 0 0 m g / L模式已变为浓度模式模式已变为浓度模式第16页/共33页浓度测定的原理是公式浓度测定的原理是公式C=KA。C浓度浓度 A吸光度吸光度 K吸收系数吸收系数 K值设定有两种方法：值设定有两种方法：一是选择一是选择“因子因子”功能键直接输入功能键直接输入K值；值；二是选择二是选择“标样测量标样测量”，测定吸光度，输入浓度，求出，测定吸光度，输入浓度，求出K值值第17页/共33页波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位模式因子标样测量D2W0. 0 0 0 m g / L选择选择“因子因子”模式，直接输入模式，直接输入K值。值。吸收系数设定键吸收系数设定键第18页/共33页波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19D2W0. 0 0 0 m g / L 请输入请输入F因子：因子：1.000_使用数字键和小数点输入所需要的使用数字键和小数点输入所需要的K值。值。K值来源：以前实验所做、查询相关文献。值来源：以前实验所做、查询相关文献。第19页/共33页波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19D2W0. 0 0 0 m g / L 请输入请输入F因子：因子：3.000_输入完毕后，点击输入完毕后，点击 进行确认。进行确认。ENTER输入的吸收系数输入的吸收系数K第20页/共33页波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位模式因子标样测量D2W0. 0 0 0 m g / LF 因子因子 3.000设定的吸收系数设定的吸收系数K第21页/共33页波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位模式因子标样测量D2W0. 0 0 0 m g / LF 因子因子 3.000测量浓度已知样品的浓度，输入浓度，由机器自动求出测量浓度已知样品的浓度，输入浓度，由机器自动求出K值。值。选择选择“标样测量标样测量”功能键。功能键。进入浓度法求进入浓度法求K值值第22页/共33页波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19D2W0. 0 0 0 m g / L 请输入标样含量：请输入标样含量：1.000_将标样放入光路中，使用数字键和小数点输入标样的浓度。将标样放入光路中，使用数字键和小数点输入标样的浓度。第23页/共33页波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19D2W0. 0 0 0 m g / L 请输入标样含量：请输入标样含量：4.000_输入完毕后，点击输入完毕后，点击 进行确认。进行确认。ENTER输入的标样浓度输入的标样浓度第24页/共33页波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位模式因子标样测量D2W4. 0 0 0 m g / LF 因子因子 3.258计算出的吸收系数计算出的吸收系数K标样浓度标样浓度 4.000 第25页/共33页波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位模式因子标样测量D2W4. 0 0 0 m g / LF 因子因子 3.258输入的标样浓度输入的标样浓度标样浓度标样浓度 4.000 第26页/共33页1、定量用样品的净化1）定容：将索氏提取样品定容到25mL。2）净化A、装柱：取2个高13cm、内径8mm的Al2O3柱，平行装柱。分别垫上少许棉花，装入中性氧化铝，高度1.5cm左右。1个作空白，另1个加入样品。B、加样与洗脱：将两根小柱下分别接上10mL容量瓶，样品用小柱中精密加入样品液0.5mL，待样品完全被填料吸收后，加入95%EtOH至洗脱完全。空白用小柱中的填料直接用95%乙醇平行洗脱。接近10mL时停止洗脱，分别定容到10mL。C、含量测定：采用外标一点法于350nm 测定含量供试品紫外测定：空白采用自制空白对照品紫外测定：空白采用95%乙醇，对照品浓度：0.06mg/mLD、计算（100g干品中含有多少克总生物碱）二、实验步骤A供/A标 = C供/C标约0.1g25mL0.5mL10mL含量(%) =C供Dm 100%第27页/共33页波长：波长：546.0nm 09:21:19取消下翻选取D2W系统主菜单系统主菜单光度计模式光度计模式定量测量定量测量光谱扫描光谱扫描动力学测量动力学测量DNA/DNA/蛋白质测量蛋白质测量点击点击“选取选取”功能键，或点功能键，或点 ，进入光度计模式。，进入光度计模式。ENTER第28页/共33页波长：波长：350.0nm I: 19669 09:21:19设置单位模式因子标样测量D2W样品浓度单位设定键0. 0 0 0 A b s使用四个方向键来选择设置单位模式，选择完毕后，使用四个方向键来选择设置单位模式，选择完毕后，点点 确认。确认。ENTER第29页/共33页波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位模式因子标样测量D2W0. 0 0 0 m g / L模式已变为浓度模式模式已变为浓度模式第30页/共33页波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位模式因子标样测量D2W0. 0 0 0 m g / LF 因子因子 3.000设定的吸收系数设定的吸收系数K第31页/共33页波长：波长：450.0nm I ：19669 09：21：19设置单位模式因子标样测量D2W0. 0 0 0 m g / LF 因子因子 3.000测量浓度已知样品的浓度，输入浓度，由机器自动求出测量浓度已知样品的浓度，输入浓度，由机器自动求出K值。值。选择选择“标样测量标样测量”功能键。功能键。进入浓度法求进入浓度法求K值值第32页/共33页谢谢您的欣赏。第33页/共33页