腺病毒安全使用和注意事项

席汰恒生!I-HAN6I0卄一1HAM6IO更好的基因科技Uft ILT H 4 N 久.L1TE1.腺病毒安全使用和注意事项?腺病毒安全使用注意事项（*非常重要！ * ）1）腺病毒相关实验请在生物安全柜（ BL-2级别）内操作。2）操作病毒时请穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。3）操作病毒时需要特别小心病毒溅出。如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用70%乙醇加1%的SDS溶液擦拭干净。4）接触过病毒的枪头、离心管、培养板及培养瓶请用84消毒液浸泡后统一处理。5）如实验过程中需要离心，应使用密封性好的离心管，必要时请用封口膜封口后离心。6）病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌后处理。7）实验完毕后请用香皂清洗双手。?腺病毒储存与稀释的注意事项1）腺病毒的储存收到病毒液后若在短期内使用，可将病毒放置于4C保存（一周内使用完最佳）；如需长期保存请分装后放置于-80 C。注：臾好的墓因科技a. 反复冻融会降低病毒滴度（每次冻融会使病毒滴度降低10%50% ），因此在病毒使用过程中尽量避免反复冻融。汉恒生物对病毒已进行分装（200 gZtube ），收到后请直接放置-80 C冰箱保存即可。b. 若病毒储存时间超过 6个月，汉恒生物建议在使用前重新测定病毒滴度（参见附表2-慢病毒滴度测定方法）。2）腺病毒的稀释需要稀释病毒时，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用PBS或培养目的细胞用的无血清培养基（含血清或含双抗不影响病毒感染）混匀分装后置于 4 C保存（一周内使用完最佳）。重组腺病毒是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。重组腺病毒具有以下几个显著优点：感染范围广，几乎可以感染所有的细 胞系、原代细胞和部分组织；感染效率高达100%，可全面超越其他病毒载体工具和脂质体转染；对外源基因容载能力大（可以高达 8Kb ）;不整合基因组；滴度高，操作方便。 因此，重组腺病毒是一种最具有潜力的基因递送工具。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型（Ad5 ），其基因组是36Kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维（fiber ）和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从 内吞体（endosome ）转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的 复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。目前最常用的腺病毒包装体系有AdEasy和AdMAX两种，其共同特点是目的基因首先克隆到穿梭载体，然后再重组到腺病毒的大骨架上。这两个系统均具有腺病毒早期转录 复制基因E1和E3的缺陷（AE1, AE3），其中E3基因对病毒产生并非必需。因此，腺病毒更好的基因科技U ft IL T lH 4 N 4 L h I 1 Li MiOLiJiih包装必需依赖表达 E1的细胞系，例如 HEK-293 , HEK-293A等。相对于Adeasy系统，AdMAX 系统操作便利，并且可以获得更好的病毒滴度。本操作说明均基于 AdMAX 系统，该系统由pHBAd系列穿梭质粒、腺病毒骨架载体pBHGIox(delta)E1,3Cre 双载体组成。