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.丙型肝炎病毒抗体检测（酶联免疫法）1、原理：本法采用间接法酶联免疫吸附试验原理。在微孔条上预包被基因重组HCV结构和非结构区，配以酶标记IgG抗体及TMB显色等其他试剂，检测人血清或血浆中的丙型肝炎病毒抗体。2、标本采集与处理2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。2.4标本处理：血液标本应尽快地送实验室。本试剂使用样品为人血清或血浆，含EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。 2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。2.6标本储存：样品中应无微生物，可在2-8oc储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。 3、试剂与仪器：3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：北京万泰生物药业股份有限公司3.1.2批准文号：国药准字S200100143.1.3包装：96T13.1.3试剂配置： 浓缩洗涤液 50ml1瓶 样品稀释液 12ml1瓶HCV酶标板 812孔或128孔 HCV酶标试剂 12 ml1瓶 HCV阳性对照 0.2ml1支 HCV阴性对照 0.2ml1支 底物液A、B液 各6ml1瓶 终止液 6ml1瓶 自封袋 1个 封版膜 2张 说明书 1份32测定仪器：3.2.1酶标仪： 上海安泰model MT-8583.2.2洗板机： ANALYTECH 8284、操作步骤：41配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。42编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔（空白对照孔只加稀释液不加样品及酶标试剂）其余各孔加入100UL样本稀释液。43 加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照10微升，轻轻振荡混匀。44温育：用封版膜封版后，置37oc温育60分钟。45 洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。46加酶标抗体：空白对照孔不加 酶标试剂，每孔加入酶标记抗体100微升，轻轻振荡混匀。47温育：置37oc温育30分钟。48洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干49 显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振荡匀，37oc避光显色30分钟。410终止：每孔加终止液1滴（50微升），轻轻振荡混匀。411测定：10分钟内测定结果，设定酶标仪单波长450 nm或双波长450 nm /600-650 nm测定。用空白孔调零点后测定各孔A值。5：结果判断51目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为丙型肝炎病毒抗体（抗HCV）阳性；无色者为丙型肝炎病毒抗体（抗HCV）阴性。52酶标仪检测：521临界值（CUT/OFF）计算：CUT/OFF=阴性对照孔A均值+0.12。（不足0.02按0.02计算）522阳性判定：样品A值临界值（CUTOFF）者判为抗HCV阳性。(注意初试阳性应重新取样双孔复试)523阴性判定：样品A值临界值（CUTOFF）者判为抗HCV阴性。 6：注意事项：61本品仅用于体外诊断，操作应按说明书严格进行。封版膜不能重复使用，不同批号酶标板、酶标试剂和阴阳对照不可混用，不能与其他厂家试剂混用。62避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒剂（如84消毒液）的环境下操作。63 使用前请将试剂平衡至室温（平衡30分钟以上）实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即放回2-8oc.未用完的微孔板条与干燥剂一起用自封袋密封2-8oc保存。过期试剂请勿使用。64加样时必须使用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组分时，用更换加样器吸头和加样槽，以防出现交叉污染。65洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定30-60秒浸泡时间。再洗板结束后，必须立即进行下一步，不可使酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。66结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指印或划痕都可能影响板孔的读值。67所有样品、废液和废弃物都应按传染物处理。终止液为硫酸，使用时必须注意安全。68显色时必须加显色剂A液后再加显色剂B液，以免显色过低。69由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测阴性并不排除HCV感染的可能。检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。7：临床意义：检测人血清或血浆中的HCV抗体。适用于血液的筛查及临床丙型肝炎病毒感染的辅助诊断。梅毒螺旋体抗体（酶联免疫法）1、原理：本试剂盒采用双抗原夹心法酶联免疫吸附试验原理。在微孔条上预包被梅毒螺旋体抗体基因重组抗原，配以酶标记抗原及TMB显色剂等其他试剂，检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。2、标本采集与处理2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。2.4标本处理：血液标本应尽快地送实验室。本试剂使用样品为人血清或血浆，含EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。2.6标本储存：样品中应无微生物，可在2-8oc储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。 3、试剂与仪器：3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：北京万泰生物药业股份有限公司3.1.2批准文号：国药准字S200100133.1.3包装：96T13.1.3试剂配置： 浓缩洗涤液 50ml1瓶TP酶标板 812孔或128孔 TP酶标试剂 12 ml1瓶 TP阳性对照 0.2ml1支 TP阴性对照 0.2ml1支 显色剂A、B液 各6ml1瓶 终止液 6ml1瓶 自封袋 1个 封版膜 2张 说明书 1份32测定仪器：3.2.1酶标仪： 上海安泰model MT-8583.2.2洗板机： ANALYTECH 8284、操作步骤：41配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。42编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）43 加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照100微升，轻轻振荡混匀。44温育：用封版膜封版后，置37oc温育60分钟。45 洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。46加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶标记抗体100微升，轻轻振荡混匀。47温育：用封版膜封板后，置37oc温育30分钟。48洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干49 显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振荡匀，37oc避光显色30分钟。410终止：每孔加终止液1滴（50微升），轻轻振荡混匀。411测定：10分钟内测定结果，设定酶标仪波长于450 nm（建议双波长450 nm /600-650 nm测定）用空白孔调零点后测定各孔A值。5：结果判断51目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为梅毒螺旋体抗体（TP-AB）阳性；无色者为梅毒螺旋体抗体（TP-AB）阴性。52酶标仪检测：521临界值（CUT/OFF）计算：临界值=阴性对照孔A均值+0.18。522阳性判定：样品A值临界值（CUTOFF）者判为TP阳性。(注意:初试阳性应重新取样双孔复试)523阴性判定：样品A值临界值（CUTOFF）者判为TP阴性。 6：注意事项：61本品仅用于体外诊断，操作应按说明书严格进行。封版膜不能重复使用，不同批号酶标板、酶标试剂和阴阳对照不可混用，不能与其他厂家试剂混用。62避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒剂（如84消毒液）的环境下操作。63 使用前请将试剂平衡至室温（平衡30分钟以上）实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即放回2-8oc.未用完的微孔板条与干燥剂一起用自封袋密封2-8oc保存。过期试剂请勿使用。64加样时必须使用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组分时，用更换加样器吸头和加样槽，以防出现交叉污染。65洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定30-60秒浸泡时间。再洗板结束后，必须立即进行下一步，不可使酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。66结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指印或划痕都可能影响板孔的读值。67所有样品、废液和废弃物都应按传染物处理。终止液为硫酸，使用时必须注意安全。68显色时必须加显色剂A液后再加显色剂B液，以免显色过低。69由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测阴性并不排除HCV感染的可能。检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。7：临床意义：检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。适用于血液的筛查及临床梅毒螺旋体抗体感染的辅助诊断。乙肝五项操作规程1、目的：通过对乙型肝炎病毒抗原、抗体系统的检测，用于乙肝的临床诊断，还可应用于对供血员的乙肝筛选、乙肝流行病学的调查，了解各地人群乙型肝炎感染状况。此外，还可用于乙肝疫苗免疫效果的观察。2、方法：酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）试验过程大致分三个步骤：包被：将已知抗原或抗体通过物理吸附结合到固相载体表面，使抗原或抗体固相化。抗原抗体反应：先后加入被检标本和酶标记物，使之与固相抗原或抗体发生免疫反应而被结合固定，经洗涤除去游离的酶标记物。酶促反应：在反应体系中加入酶的相应底物，使之发生酶促反应而显色。3. 临床意义：HBV抗原抗体血清学标志与临床关系较为复杂，必须结合临床特点，对各项检测结果进行综合分析，必要时进行HBV-DNA的检测。常见的HBV抗原、抗体血清学标志物检测结果的分析见下表：HBsAgHBsAbHBcAbHBeAgHBeAb结果分析IgMIgG潜伏期、感染早期或无症状携带者急性乙型肝炎/急性乙型肝炎后期或慢性感染曾感染过HBV感染过HBV或接种乙型肝炎疫苗后乙型肝炎表面抗原（HBsAg）1、原理：采用抗-HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗-HBs-HRP,当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗- HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。2、标本采集与处理2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。2.4标本处理：血清：采血后，室温下自然放置1-2小时，待血液凝固、血块收缩后，在于3000转每分钟离心15分钟，吸出血清待用。血浆：采血后，样本和抗凝剂轻轻颠倒混匀6-8次后，充分离心，将血浆与血细胞分离后，吸出血浆待用。2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。2.6标本储存：一般该标本应随到随做，血清和血浆标本在2-8oc保存。如需长期保存，可在-20保存，并避免反复冻融。3、试剂与仪器：3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：英科新创（厦门）科技有限公司3.1.2批准文号：国药准字S109101483.1.3包装：48T1、96T13.1.3试剂配置： 25倍浓缩稀释液 40ml1瓶HBsAg微孔反应板 96孔 HBsAg酶结合物 6.2 ml1瓶 HBsAg阳性对照 1.0 ml1瓶 HBsAg阴性对照 1.0 ml1瓶 显色液A、B液 各8.0 ml1瓶 终止液 7 ml1瓶 封板纸 5片 说明书 1份32测定仪器：3.2.1酶标仪： 上海安泰 MODEL MT-8583.2.2洗扳机： ANALYTECH828 4、操作步骤：41配液：配制工作浓度洗涤液（以纯化水做25倍稀释）42编号：将样品对应微孔按序编号（共预留阴性对照孔3孔、阳性对照1孔、建议预留空白对照1孔）43加样：加入75微升待测样本和阴、阳性对照与反应孔中。44温育：用封片纸覆盖反应板后，置37oc温育60分钟。45加酶标抗体：取出反应板，撕去封片，在已加入待测样本和阴性、阳性对照孔中加入50微升酶结合物。微孔振荡器或手工轻轻振荡10秒钟。46温育：用封片纸覆盖反应板后，置37oc温育30分钟。46洗涤：461手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。462洗板机：将孔内液体甩干。选择5次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。47显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振荡匀，用封板纸覆盖反应板后，将反应板放置37oc孵育30分钟。48终止：每孔加终止液1滴（50微升），混匀。49测定：用酶标仪读数，波长450nm。（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm或630相近的波长）若需扣除显色剂空白，则先用显色剂空白对照孔校零，然后读取各孔OD值。5：结果判断51目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性；无色者为乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性。52酶标仪检测：521临界值（CUT/OFF）计算：COV:Cut-off Value参考值PC：阳性对照OD值NCx:阴性对照平均OD值。NCx=(NC1+NC2+NC3)3检测有效性：NCx0.1、PC1.0,则检测结果有效。COV=NCx+0.100S:待测样品的OD值，S/COV：待测样本和COV的比值。522阳性判定：样品OD值S/COV1.0者判为HBsAg阳性。523阴性判定：样品OD值S/COV1.0者判为HBsAg阴性。6：注意事项：61从冷藏环境中取出时应室温平衡至室温后方可使用，未用完的微孔条用加有干燥剂的自封袋密封保存。在平衡试剂的同时，待测样本需平衡至室温后再行测试。62使用前试剂应摇匀。63显色过程必须封片。所有封片纸不能重复使用。64结果判断须在反应终止后10分钟内完成。65严格按操作步骤进行，不同批次试剂不可混用。66洗板机洗板是应时常检查加液头，确保其畅通无阻塞，洗板是所用的吸水纸请勿反复使用。洗板机的管路用纯化水冲洗，以防阻塞和腐蚀。67待测样品不可用NaN3防腐。68本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。7：临床意义：检测人血清或血浆样本中的乙型肝炎病毒表面抗原，用于血源筛查及临床乙型肝炎病毒感染的辅助判断。 乙型肝炎表面抗体（抗-HBs）1、原理：采用纯化HBsAg包被反应板，加入待测样品，同时加入HBsAg-HRP，如待测样品中含有抗-HBs时，该抗-HBs就与包被HBsAg、HBsAg-HRP结合形成HBsAg-抗-HBs-HBsAg-HRP复合物。加入TMB底物产生显色反应，反之就显色反应。2、标本采集与处理2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。2.4标本处理：血清：采血后，室温下自然放置1-2小时，待血液凝固、血块收缩后，在于3000转每分钟离心15分钟，吸出血清待用。血浆：采血后，样本和抗凝剂轻轻颠倒混匀6-8次后，充分离心，将血浆与血细胞分离后，吸出血浆待用。2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。2.6标本储存：一般该标本应随到随做，血清和血浆标本在2-8oc保存。如需长期保存，可在-20保存，并避免反复冻融。3、试剂与仪器：3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：英科新创（厦门）科技有限公司3.1.2批准文号：国药准字2009第34007023.1.3包装：48T1、96T13.1.3试剂配置： 25倍浓缩稀释液 40ml1瓶HBsAb包被板 96孔 HBsAb酶标记抗体 6.21ml1瓶 HBsAb阳性对照 1.0ml1瓶 HBsAb阴性对照 1.0ml1瓶 底物液A、B液 8.0ml1瓶终止液 7.0ml1瓶 封片 2片说明书 1份32测定仪器：3.2.1酶标仪： 上海安泰 MODEL MT-8583.2.2洗扳机： ANALYTECH828 4、操作步骤：41配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀（如有结晶析出应充分溶解），将浓缩洗涤液（20*）用蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。42编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂）43加样：分别在相应孔中加入待测样品50微升和阴，阳对照50微升及质控血清。44加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶结合物50微升，轻轻振荡混匀。45温育：置37oc温育30分钟。46洗涤：461手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。 462洗板机：将孔内液体甩干。选择4次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。47显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振荡匀，37oc避光显色15分钟。48终止：每孔加终止液1滴（50微升），混匀。49测定：用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm）测定各孔OD值先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。5：结果判断51目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎表面抗体（抗HBs）阳性；无色者为乙型肝炎表面抗体（抗HBs）阴性。52酶标仪检测：521临界值（CUT/OFF）计算：COV=阴性对照平均OD值2.1。（阴性对照孔OD值低于0.05者按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。522阳性判定：样品的OD值大于或等于COV值时，说明HBsAg阳性。523阴性判定：样品OD值小于COV值时，说明为HBsAg阴性。6：注意事项：61从冷藏环境中取出时试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37应室温平衡30分钟方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。在平衡试剂的同时，待测样品需置室温平衡30分钟后在进行测试。62使用前试剂应摇匀，并弃去1-2滴后垂直滴加。63封片不能重复使用。64结果判断须在反应终止后10分钟内完成。65严格按操作步骤进行，不同批次试剂不得混用。66待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。67本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。乙型肝炎核心抗体（抗-HBc）1、原理：采用基因工程重组HbcAg包被反应板，加入待测样品，同时加入抗-HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样品中抗-HbcAg含量高，则抗-HBc-HRP与HbcAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。2、标本采集与处理2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。2.4标本处理：血清：采血后，室温下自然放置1-2小时，待血液凝固、血块收缩后，在于3000转每分钟离心15分钟，吸出血清待用。血浆：采血后，样本和抗凝剂轻轻颠倒混匀6-8次后，充分离心，将血浆与血细胞分离后，吸出血浆待用。2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。2.6标本储存：一般该标本应随到随做，血清和血浆标本在2-8oc保存。如需长期保存，可在-20保存，并避免反复冻融。3、试剂与仪器：3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：英科新创（厦门）科技有限公司 3.1.2批准文号：国药准字2008第34007003.1.3包装：48T1、96T13.1.3试剂配置： 25倍浓缩稀释液 40ml1瓶HBcAb包被板 96孔 HBcAb酶标记抗体 6.21ml1瓶 HBcAb阳性对照 1.0ml1瓶 HBcAb阴性对照 1.0ml1瓶 底物液A、B液 8.0ml1瓶终止液 7.0ml1瓶 封片 2片说明书 1份32测定仪器：3.2.1酶标仪： 上海安泰 MODEL MT-8583.2.2洗扳机： ANALYTECH828 4、操作步骤：41配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀（如有结晶析出应充分溶解），将浓缩洗涤液（25*）用蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。42编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂）43加样：将待测样本用生理盐水1:30稀释。（稀释样本检测结果为临床意义；样本原液加样，检测结果为流行病学意义。用户可根据实际情况选择。）分别在相应孔中加入稀释样本50微升和阴，阳对照50微升及质控血清。44加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶结合物50微升，轻轻振荡混匀。45温育：置37oc温育30分钟。46洗涤：461手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。462洗板机：将孔内液体甩干。选择4次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。47显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振荡匀，37oc避光显色15分钟。48终止：每孔加终止液1滴（50微升），混匀。49测定：用用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm）测定各孔OD值先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。5：结果判断51目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎表面抗体（HBcAb）阳性；无色者为乙型肝炎表面抗体（HBcAb）阴性。52酶标仪检测：521临界值（CUT/OFF）计算：未稀释样品CUT/OFF=阴性对照孔OD均值N0.3。1:30稀释样品CUT/OFF=阴性对照孔OD均值N0.5。522阳性判定：样品OD值小于COV，说明该样品HBcAb阳性。523阴性判定：样品OD值大于或等于COV,说明该样品HBcAb阴性。6：注意事项：61从冷藏环境中取出时试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37应室温平衡30分钟方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。在平衡试剂的同时，待测样品需置室温平衡30分钟后在进行测试。62使用前试剂应摇匀，并弃去1-2滴后垂直滴加。63封片不能重复使用。64结果判断须在反应终止后10分钟内完成。65严格按操作步骤进行，不同批次试剂不得混用。66待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。67本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。乙型肝炎e抗原（HBeAg）1、原理：采用抗-HBe包被反应板，加入待测样品，同时加入抗-HBe-HRP，如待测样品中含有HBeAg时就与包被抗-HBe、抗-HBe-HRP结合形成复合物，加入底物产生显色反应，反之就无显色反应。2、标本采集与处理2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。2.4标本处理：血清：采血后，室温下自然放置1-2小时，待血液凝固、血块收缩后，在于3000转每分钟离心15分钟，吸出血清待用。血浆：采血后，样本和抗凝剂轻轻颠倒混匀6-8次后，充分离心，将血浆与血细胞分离后，吸出血浆待用。2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。2.6标本储存：一般该标本应随到随做，血清和血浆标本在2-8oc保存。如需长期保存，可在-20保存，并避免反复冻融。3、试剂与仪器：3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：英科新创（厦门）科技有限公司3.1.2批准文号：国药准字2009第34007023.1.3包装：48T1、96T13.1.3试剂配置： 25倍浓缩稀释液 40ml1瓶HBeAg包被板 96孔 HBeAg酶标记抗体 6.21ml1瓶 HBeAg阳性对照 1.0ml1瓶 HBeAg阴性对照 1.0ml1瓶 底物液A、B液 8.0ml1瓶终止液 7.0ml1瓶 封片 2片说明书 1份32测定仪器：3.2.1酶标仪： 上海安泰 MODEL MT-8583.2.2洗扳机： ANALYTECH828 4、操作步骤：41配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀（如有结晶析出应充分溶解），将浓缩洗涤液（25*）用蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。42编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂）43加样：分别在相应孔中加入待测样品50微升和阴，阳对照50微升及质控血清。44加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶结合物50微升，轻轻振荡混匀。45温育：置37oc温育30分钟。46洗涤：461手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置浸泡30-60秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。462洗板机：将孔内液体甩干。选择4次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。47显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振荡匀，37oc避光显色15分钟。48终止：每孔加终止液1滴（50微升），混匀。49测定：用用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm）测定各孔OD值先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。5：结果判断51目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性；无色者为乙型肝炎e抗原（HBeAg）阴性。52酶标仪检测：521临界值（CUT/OFF）计算：CUT/OFF=阴性对照孔OD均值N2.1。（阴性对照孔OD值低于0.05者按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算）522阳性判定：样品OD值大于或等于COV值时，说明该样品HBeAg阳性。523阴性判定：样品OD值小于COV值时，说明该样品HBeAg阴性。6：注意事项：61从冷藏环境中取出时试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37应室温平衡30分钟方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。在平衡试剂的同时，待测样品需置室温平衡30分钟后在进行测试。62使用前试剂应摇匀，并弃去1-2滴后垂直滴加。63封片不能重复使用。64结果判断须在反应终止后10分钟内完成。65严格按操作步骤进行，不同批次试剂不得混用。66待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。67本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。乙型肝炎e抗体（抗-HBe）1、原理原理：采用抗-HBe、HBeAg包被反应板，加入待测样品，同时加入抗-HBe-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样品中抗-HBe含量高，则抗-HBe-HRP与HBeAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。2、标本采集与处理2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。2.4标本处理：血清：采血后，室温下自然放置1-2小时，待血液凝固、血块收缩后，在于3000转每分钟离心15分钟，吸出血清待用。血浆：采血后，样本和抗凝剂轻轻颠倒混匀6-8次后，充分离心，将血浆与血细胞分离后，吸出血浆待用。2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。2.6标本储存：一般该标本应随到随做，血清和血浆标本在2-8oc保存。如需长期保存，可在-20保存，并避免反复冻融。3、试剂与仪器：3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：英科新创（厦门）科技有限公司3.1.2批准文号：国药准字2009第34007043.1.3包装：48T1、96T13.1.3试剂配置： 25倍浓缩稀释液 40ml1瓶HBeAb包被板 96孔 HBeAb酶标记抗体 6.21ml1瓶 HBeAb阳性对照 1.0ml1瓶 HBeAb阴性对照 1.0ml1瓶 底物液A、B液 8.0ml1瓶终止液 7.0ml1瓶 封片 2片说明书 1份32测定仪器：3.2.1酶标仪： 上海安泰 MODEL MT-8583.2.2洗扳机： ANALYTECH828 4、操作步骤：41配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀（如有结晶析出应充分溶解），将浓缩洗涤液（25*）用蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。42编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂）43加样：分别在相应孔中加入待测样品50微升和阴，阳对照50微升及质控血清。44加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶结合物50微升，轻轻振荡混匀。45温育：置37oc温育30分钟。46洗涤：461手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。462洗板机：将孔内液体甩干。选择4次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。47显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振荡匀，37oc避光显色15分钟。48终止：每孔加终止液1滴（50微升），混匀。49测定：用用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm）测定各孔OD值先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。5：结果判断51目测：在白色背景下观察各孔显色情况，无色者为乙型肝炎e抗体（HBeAb）阳性；黄色者为乙型肝炎e抗体（HBeAb）阴性。52酶标仪检测：521临界值（CUT/OFF）计算：COV=(阴性对照平均OD值+阳性对照平均OD值)0.5522阳性判定：样品OD值S/CO1者判为HBeAb阳性。523阴性判定：样品OD值S/CO1者判为HBeAb阴性。6：注意事项：61从冷藏环境中取出时试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37应室温平衡30分钟方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。在平衡试剂的同时，待测样品需置室温平衡30分钟后在进行测试。62使用前试剂应摇匀，并弃去1-2滴后垂直滴加。63封片不能重复使用。64结果判断须在反应终止后10分钟内完成。65严格按操作步骤进行，不同批次试剂不得混用。66待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。67本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。丙肝抗体检测（HCV-Ab）1.方法：胶体金法2.原理：本品采用胶体金免疫层析专业技术，在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗人IgG抗体，在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被丙肝混合抗原和人IgG抗体。检测阳性标本时，血清样本中HCV-Ab与胶体金标记鼠抗体IgG抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原结合形成“Au-anti-IgG Ab-HCV Ab-HCV Ag”夹心物而凝聚显色，游离金标鼠抗人IgG抗体则在对照线处与人IgG抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色，15分钟内观察结果即可。3 .试剂 英科新创（厦门）科技有限公司4 .试剂组成 4.1HCV胶体金试纸条 50条 4.2说明书 1份4.3样品稀释液 4.4塑料滴管5 .仪器 目测6 .操作步骤6.1将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。6.2用塑料滴管加1滴样本血清或血浆，加到试纸条指示箭头下端的加样处。6.3 随即加2滴样本稀释液。6.4加样后，阳性标本可在1-15分钟内检出，建议15分钟再最终观察并记录试验结果。7.结果判断 阴性：出现一条红线。 阳性：出现二条红线。 无效：不出现红线。8 .正常参考值 阴性9 .临床意义 同ELISA法测定。10 .标本采集10.1 无菌条件下抽取静脉血2毫升，及时分离血清。10.2 如采用血浆测定，临床常用抗凝剂（EDTA、肝素、枸橼酸钠）不影响实验结果。10.3 标本溶血、脂血、严重黄疸或加热灭活的血清标本均可能影响检测结果。11. 注意事项11.1标本应新鲜澄清。11.2在良好光线下判断结果。11.3试剂从包装中取出后，应尽快进行实验，避免放置于空气中时间过长，导致受潮。11.4检测线颜色的深浅程度与样品中抗体的滴度没有一定的必然；联系。11.5任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度抗体存在，所以阴性结果任何时候不能排除含有HCV暴露和感染的可能。11.6实验证实，乙肝、艾滋、甲肝、庚肝、类风湿因子、红斑狼疮等各种类型的标本不会对测试产生干扰。 梅毒抗体检测（TP-Ab）1.方法：胶体金法2.原理：本品采用胶体金免疫检测技术和层析原理，定性检测血清（浆）样本中的梅毒螺旋体抗体。检测时，样本中梅毒抗体可与胶体金标记抗原结合形成抗原抗体复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原结合形成 “Au-TPAg-TPAb-TPAg”夹心物而凝聚显色，游离胶体金标记梅毒抗原则在对照线处与与预包被的兔抗TP抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色。3 .试剂 英科新创（厦门）科技有限公司4 .试剂组成 4.1TP胶体金试纸条 50条 4.2说明书 1份5 .仪器 目测6 .操作步骤6.1将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。6.2将试剂置于干净平坦的台面上，在加样条上用微量加样器加入100ul样本。6.3加样后，20分钟观察并记录试验结果。 7.结果判断 阴性：出现一条红线。 阳性：出现二条红线。 无效：不出现红线。8 .正常参考值 阴性9 .临床意义 同ELISA法测定。10 .标本采集10.1 静脉的血清、血浆样本必须在无菌条件下，并避免样品溶血。10.2血清和血浆样品（EDTA抗凝）收集后7天内检测，样品须放在2-8保存。如果大于7天则须冷冻保存。11. 注意事项11.1本试剂盒仅用于体外诊断试验，仅用于人血清（浆），其它体液和样本可能得不到准确结果。11.2样本的加样建议使用微量加样器准确加入。11.3试剂从包装中取出后，应尽快进行实验，避免放置于空气中时间过长，导致受潮。11.4检测线颜色的深浅程度与样品中抗体的滴度没有一定的必然；联系。22分钟后判读，结果无效。11.5任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度抗体存在，所以阴性结果任何时候不能排除含有梅毒螺旋体暴露和感染的可能。本品检测阳性样本，需用其它方法作进一步的确认。 乙肝病毒表面抗原（HBsAg）1方法 胶体金法2原理 本品采用胶体金免疫层析专业技术，在玻璃纤维素膜上预包被HBsAg,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被HBsAg单抗（sAb2）和羊抗鼠IgG.检测阳性血清或血浆样本时，样本中HBsAg与胶体金标记抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗体结合形成夹心物而凝聚显色，游离金标抗体则在对照线处与羊抗鼠IgG结合而富集显色。阴性标本则尽在对照线处显色。3 试剂 英科新创（厦门）科技有限公司4 试剂组成 4.1试纸条 25条 4.2说明书 1份5 仪器 目测6 操作步骤6.1将试纸条取出，水平放置并做好标记。6.2用加样器或毛细吸管吸取60ul新鲜全血（或血清、血浆）缓慢滴加与试剂条箭头下方的垫片上6.3为防止弱阳性标本的漏检，请于加样后10分钟观察并记录试验结果。7 结果判断 阴性：出现一条红线。 阳性：出现二条红线。 无效：不出现红线。8 正常参考值 阴性9 临床意义 同ELISA法测定。10 标本采集10.1 可采用全血、血清、血浆进行检测，血浆标本对抗凝剂无要求。10.2 采集静脉血的血清血浆应在无菌条件下，避免样品溶血。10.3 血清、血浆在7天内检测，样品须放在2-8保存，大于7天则冷冻保存。11 注意事项11.1实验室环境应保持一定湿度、避风。避免在过高温度下进行。11.2试纸可在室温下保存，谨防受潮。低温保存下的应平衡室温方可使用。11.3试剂从包装中取出后，应尽快进行实验，避免放置于空气中时间过长，导致受潮。11.4实验应在加样10分钟内判读结果，只需在检测线出现紫红线，即可判断阳性结果。室内质量控制程序1. 目的：保证ELISA检测结果准确可靠, 充分发挥其方法学的优点。 2. 该SOP变动程序：本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 3. 方法 3.1 分析前质控 3.1.1 人员培训 实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识： 检验项目的基本原理（ELISA原理）； 临床意义； 熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点； 熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）； 熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。 某些特殊项目检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。 室内质控血清的制备： 质控血清每年列出计划报质控组采购，一般采用Cut Off值附近的阳性 质控血清-20冻存备用； 使用前室温复融。 试剂盒选择卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品。 试剂盒评价： 根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂； 通过询问试剂包被物的组成，如原料来源（基因工程或合成多肽），片段的组合（按比例混合或化学合成），片段的长短等判断试剂的优劣； 参考室间质评报告中对试剂的评价结果，了解不同试剂的质控成绩。 临床实验室根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。 仪器质控 clin- 为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪。 移液器：ELISA加样量小（5-100l），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在10%以内； 水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有1的误差； 洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞； 酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。酶标仪的主要