新药申报资料(总)

综合药学实验报告研究药物： 盐酸普萘洛尔研究成员： 陈重均、朱俊峰、陈厚柳、王焕威 研究单位： 浙江大学药学院本科教学实验中心 试验起止日期：2011.3.32011.6.10目录一、盐酸普萘洛尔药学研究资料综述（药学资料7）二、盐酸普萘洛尔生产工艺的研究资料及文献资料（药学资料8）三、盐酸普萘洛尔注射液处方及工艺的研究资料及文献资料（药学资料8）四、盐酸普萘洛尔质量研究工作的试验资料及文献资料（药学资料10）五、盐酸普萘洛尔注射液质量研究工作的试验资料及文献资料（药学资料10）六、盐酸普萘洛尔检验报告书（药学资料12）七、盐酸普萘洛尔注射液检验报告书（药学资料12）八、盐酸普萘洛尔主要药效学试验资料及文献资料（药理毒理研究资料17） 申请分类：新药申报临床试验注册分类： 第二部分 药学研究资料 编号：7药 品 名 称：盐酸普萘洛尔资料项目名称：药学研究资料综述研究机构名称（加盖公章）：浙江大学药学院本科教学实验中心研究机构地址：浙江省杭州市西湖区余杭塘路388号研究机构邮编：310058研究机构电话：0571-88208406研究机构主要研究者姓名（签字）：姚彤炜试验者姓名： 王焕威、陈重均、朱俊峰、陈厚柳试验起止日期：2011.3.32011.6.10原始资料保存地点：浙江大学药学院实验中心申请人机构联系人姓名：陈厚柳申请人机构联系人电话：13732216542申请人机构联系人E-mail:zju_whw申请人机构名称（公章）： 浙江大学药学院药学研究资料综述1. 品种概况药品名称：盐酸普萘洛尔注射液 注册分类：化学药品6类 产品功效：普萘洛尔为肾上腺素受体阻断药，阻断心肌的受体，减慢心率，抑制心脏收缩力与房室传导，循环血流量减少，心肌氧耗量降低。临床上用于治疗多种原因所致的心律失常，如房性及室性早搏、窦性及室上性心动过速，心房颤动等，但室性心动过速宜慎用。1.1产品研发状况简介：1.2社会经济效益分析：2. 主要研究成果总结2.1质量标准研究及起草说明2.1.1 盐酸普萘洛尔质量研究与标准制订2.1.2 盐酸普萘洛尔注射液的质量研究与标准制订2.2剂型选择依据2.3制备工艺及研究内容2.3.1制备工艺2.3.2制备工艺选择3. 参考文献申请分类：新药申报临床试验注册分类： 第二部分 药学研究资料 编号：8药 品 名 称：盐酸普萘洛尔资料项目名称：生产工艺的研究资料及文献资料研究机构名称（加盖公章）：浙江大学药学院本科教学实验中心研究机构地址：浙江省杭州市西湖区余杭塘路388号研究机构邮编：310058研究机构电话：0571-88208406研究机构主要研究者姓名（签字）：姚彤炜试验者姓名： 王焕威、陈重均、朱俊峰、陈厚柳试验起止日期：2011.3.32011.6.10原始资料保存地点：浙江大学药学院实验中心申请人机构联系人姓名：陈重均申请人机构联系人电话：13732216542申请人机构联系人E-mail:zju_whw申请人机构名称（公章）： 浙江大学药学院生产工艺的研究资料及文献资料一、品种基本情况通用名称： 盐酸普萘洛尔 英文名称：propranololhydrochloride 汉语拼音：yansuanpunailuoer化学名称：1-异丙氨基-3-(1-萘氧基)-丙醇盐酸盐 化学结构式： 分子式：C16H21NO2HCl 分子量：295.81 基本的理化性质：白色或类白色结晶性粉末，无臭，味微甜后苦，可溶于水或乙醇，微溶于氯仿。二、合成工艺路线及选择依据根据文献报道，目前普萘洛尔的合成路线有8条，但主要有只有以下 4 条，后几种路线的原料均为较难获得的的化合物，因而不做考虑:1、合成路线一合成路线二合成路线三合成路线四路线的确定：选择路线时我们优先选择药化实验室中已有的或容易合成的试剂为原料，一些操作后处理和反应时间等相关因素也采取简便易行的。从反应式里我们可以看到3这个化合物(环氧丙基醚)都是必不可少的。因而反应路线一、三、四在原理上基本是相同的。而从3合成普奈洛尔,采用路线一据文献报道即可达到80%以上产率。相较后两种少一步操作，因而采用路线一位反应路线。三.反应路线3.1工艺反应路线四、工艺操作过程4.1 合成路线一的反应 4.1.1 工艺配比 名称规格投料量a萘酚g25.017g氢氧化钠g20g乙醇ml适量环氧氯丙烷ml68ml三乙胺ml1ml异丙胺ml42ml 4.2.2 操作过程 全流程实验方法：(1)取l一萘酚25019g、环氧氯丙烷68ml(质量比1：5)作为起始原料，加催化剂三乙胺20滴投入到装有回流冷凝管250mL圆底烧瓶中，加热，水浴控温85，保持温度反应6h，薄层跟踪至1-萘酚反应完毕。降温到40，加入100克20NaOH溶液，振荡混匀，保持体系温度为50，反应20min左右。充分静置分层，放掉碱层，有机层加入50mL去离子水充分搅拌，慢慢加入稀盐酸(浓盐酸：水=1：5)约05mL充分中和到pH为7。静置分层，收集有机层，用50mL的去离子水再洗涤一次，静置分层，收集有机层。用旋转蒸发仪将有机层减压蒸馏，彻底回收未反应的氧氯丙烷(体系温度不要超过80)。得到第一步反应产物，称得重量32.81mg，然后计算产物收率为94.4%。(2)将上步反应所得的3281g中间体全部用于下一步反应，再加入异丙胺42ml。控制温度404550，体系密封，按梯度温度分别反应422h，薄层层析跟踪至反应完毕。慢慢升温，用旋转蒸发仪减压蒸馏回收未反应的异丙胺，彻底回收异丙胺。加入10ml甲苯充分搅拌至凝固，冷却过夜，加入酒精洗涤抽滤得白色固体，干燥后称重得20.84g，则该步实际收率为43.0%。(3)将所得的白色色固体5.005g用于第三步反应、酒精投入到装有回流冷凝管的150mL的圆底烧瓶中，加入颗粒状活性炭，体系密封，加热回流，趁热过滤，滤液慢慢滴加浓盐酸至pH为2，冷却结晶，过滤，晶体用适量的酒精洗涤，得到白色的晶体，干燥得成品，称量重量6.000g g，计算产物收率99.7%，已满足纯度要求因而不再做重结晶。五实验结果与讨论5.1 收率m总=57.219g，m表面皿=36.378g，m产物=20.841g产率 = 实际获得质量/理论产量=20.841g/51.437g=40.6%5.2 结构确认所需的资料、HPLC 纯度等5.2.1TLC 检查(现象及结果)第一步合成点板结果 展开剂: 石油醚: 乙酸乙酯=8:1 显色剂: FeCl3加入NaOH重新环合后 展开剂: 石油醚: 乙酸乙酯=8:1 第一步乙酸乙酯萃取结果第二步合成点板的结果5.2.2熔点测定熔点测定为162.3163.4，熔程较短说明样品纯度高。5.2.3 HPLC的纯度测定我们对样品进行了面积归一化法的计算，得出了样品的纯度为99.7%99%，但整个峰的峰型拖尾较严重，我们试着调整溶液的极性来改善这一现象(详见药分部分)。5.3 讨论5.3.1 文献中，第一步合成中间产物 3(萘氧基)1,2环氧丙烷的较佳合成工艺条件:萘酚(34g,0.24mol)、环氧氯丙烷(75ml,0.96mol)的投料比 1:4(摩尔比)，催化剂三乙胺与 萘酚的投料比 0.5mL:14.4g(0.0035mol:0.1mol)，NaOH(20g,0.5mol)，反应温度 8085，反应时间 6h。产品纯度 91，产率 96.8。为了保证我们产物产率，我们适当的增加了环氧氯丙烷的比例改为(1:5)反应，从点板我们可以看出环氧氯丙烷确实在高温下易发生开环反应，在点板中出现了异于原料产物的点。从以往的实验中我们了解到低温是可以减少这种开环的发生的但是会大大降低反应速率，而开环的产物也可以通过加入NaOH重新环合，因而我们没有采纳低温的方法。5.3.2 实验中我们曾经将在盐酸普萘洛尔落入水中，由于样品的水溶性，使得相应水溶性杂质也混入，随后我们采用酸溶碱沉法可用于提取碱性有机物，普萘洛尔的二乙基胺基侧链有碱性与盐酸成盐可在水中进行溶解，加入强碱NaOH后重新反应为普萘洛尔并析出。此时用乙酸乙酯萃取，收集有机相，并重复一次，抽滤掉溶剂后再次成盐。从这一次教训中，我们学到了很多实验上的失误是可以补救的，处理得当可以节约较多工时以及成本。5.3.3合成的普萘洛尔有微红色，洗涤成盐后呈白色粉末状，实验过程中可用活性炭进行脱色，由于本身考虑合成的量较大，在抽滤洗涤环节我们较注重样品的纯度，洗脱次数以及要求较高。这可能是我们实验最终产率较低的重要原因之一。5.3.4 熔点测定文献上的范围为162164，显然我们所测的落在该范围内，且熔程只有1.1由此我们实验中没有再对样品进行重结晶而直接用HPLC进行测定而测定的结果也符合了我们的预期。5.3.5 实验操作的(2)中温度阶梯反应后，回收异丙胺后用二甲苯凝固，考虑实验室中无二甲苯相当难获得，而其与甲苯的性质对于该反应影响不大，参考了学长学姐意见后选用甲苯为凝固剂。5.3.6 盐酸盐易吸潮，需真空干燥，密闭保存，可考虑置入密闭盒中并放入干燥剂。六.参考文献张英 盐酸普萘洛尔的合成工艺研究 浙江工业大学硕士学位论文 2008 年朱宝泉等 新编药物合成手册 化学工业出版社 2003 年版李安良 药物化学 高等教育出版社(第二版)申请分类：新药申报临床试验注册分类： 第二部分 药学研究资料 编号：8药 品 名 称：盐酸普萘洛尔注射液资料项目名称：处方及工艺的研究资料及文献资料研究机构名称（加盖公章）：浙江大学药学院本科教学实验中心研究机构地址：浙江省杭州市西湖区余杭塘路388号研究机构邮编：310058研究机构电话：0571-88208406研究机构主要研究者姓名（签字）：姚彤炜试验者姓名： 王焕威、陈重均、朱俊峰、陈厚柳试验起止日期：2011.3.32011.6.10原始资料保存地点：浙江大学药学院实验中心申请人机构联系人姓名：陈厚柳申请人机构联系人电话：13732216542申请人机构联系人E-mail:zju_whw申请人机构名称（公章）： 浙江大学药学院目 录1处方组成与制备工艺1.1 处方组成1.2 制备工艺2工艺流程3处方依据4原辅料在处方中的作用5原辅料来源及质量标准盐酸普萘洛尔注射液生产工艺的研究资料及质量标准1处方组成与制备工艺1.1 处方组成 原辅料 用量 盐酸普萘洛尔 1g 枸橼酸 适量（调节PH至3.5左右） 注射用水 加至1000ml 共制成 5ml盐酸普萘洛尔注射液200支1.2制备工艺称取盐酸普萘洛尔1.0029g于烧杯，加注射用水一定量搅拌至溶解，再加注射用水至接近总量（900ml左右），用10%的枸橼酸调节PH至3.5左右，添加注射用水至总量，加入活性炭，然后粗虑。过滤（022um滤膜过滤），灌封。用100摄氏度灭菌30分钟即得。然后对灌封好的安瓿瓶进行检漏，然后取一定量去进行质量检查至符合药典要求。2.工艺流程3.处方依据 对于小体积溶液型注射液辅料方面主药需要增溶剂、助溶剂、PH调节剂、防腐剂、抗氧剂、等渗调节剂等。主药盐酸普萘洛尔能溶解于水中，且制备的盐酸普萘洛尔的注射液浓度较小，故不需要加增加溶解度的增溶剂和助溶剂。盐酸普萘洛尔在酸性条件下稳定性较好，故不需要增加抗氧剂，同时由于制备的注射液不用于人体故不需要进行等渗调节。与偶遇盐酸普萘洛尔在中性和碱性条件下易分解，不稳定故增加PH调节剂枸橼酸来调节PH至3.5左右（药典要求3-4）。4 原辅料在处方中的作用 盐酸普萘洛尔 主药 枸橼酸 PH调节剂 注射用水 溶剂 5原辅料来源及质量标准 原料由本组成员自行合成，辅料（枸橼酸）由药剂实验室提供，质量均符合药典规定。 主要参考文献 1 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2005年版二部申请分类：新药申报临床试验注册分类： 第二部分 药学研究资料 编号：10药 品 名 称：盐酸普萘洛尔资料项目名称：质量研究工作的试验资料研究机构名称（加盖公章）：浙江大学药学院本科教学实验中心研究机构地址：浙江省杭州市西湖区余杭塘路388号研究机构邮编：310058研究机构电话：0571-88208406研究机构主要研究者姓名（签字）：姚彤炜试验者姓名： 王焕威、陈重均、朱俊峰、陈厚柳试验起止日期：2011.3.32011.6.10原始资料保存地点：浙江大学药学院实验中心申请人机构联系人姓名：王焕威申请人机构联系人电话：13732216542申请人机构联系人E-mail:zju_whw申请人机构名称（公章）： 浙江大学药学院质量研究工作的试验资料1 样品来源盐酸普萘洛尔的原料药在浙江大学药学院药物化学实验中心合成，批号为20110315。2 含量限度本品含C16H21NO2HCl应不少于标示量的99.0%。3 性状本品为白色的结晶状粉末；无臭。在水或乙醇中溶解，在三氯甲烷中微溶。4 鉴别 紫外吸收光谱法：取本品，用甲醇溶解制成每1ml中含20g的溶液，照紫外-可见分光光度法测定，按药典规定在290nm的波长处有最大吸收，测得本品在292nm有最大吸收。见图10-1。5 检查本品的有关物质与分解产物检查选用高效液相色谱法测定。5.1 仪器和色谱条件仪器：Agilent Technologies 高效液相色谱仪；UV检测器。色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶Agilent (1504.6mm,5mm)；流动相：甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾缓冲液（50：50）；流速：1ml/min ；柱温：20.8；检测波长：292nm；进样量：20ml。5.2 流动相的选择参考部分文献后，流动相可以选择：乙腈-水-硫酸（55:45:0.1）；甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾缓冲液（50：50）。经流动相比例调整试验和多种因素综合考虑，最终决定采用甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾缓冲液（50：50）为本品的有关物质检查和含量测定的流动相较为适宜。5.3方法的专属性：取空白溶剂（即流动相）、合成中间体甲萘酚和普萘洛尔溶液各20l，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。另取盐酸普萘洛尔样品适量，配成2mg/ml、3mg/ml溶液，按上述色谱条件进行HPLC测定。另取盐酸普萘洛尔样品适量采用碱破坏性实验，然后进行HPLC测定。以上各溶液所得色谱图见图10-2（A-F）。5.4有关物质的检查5.4.1方法：取盐酸普萘洛尔对照品(对照品为样品经试验室重结晶所得)和样品适量，精密称定，用流动相配成1mg/ml的溶液。20mL注入高效液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的7倍, 样品测定液如显示杂质峰，量取各杂质峰峰面积，单个杂质峰面积不得超过对照液主峰面积的0.5倍(1.0%),各杂质峰面积之和应不得大于对照液色谱图中主成分峰面积2倍(1.5%)。5.4.2样品测定：取盐酸普萘洛尔对照品与样品上述方法进行高效液相色谱测定，记录图谱，测定结果见图10-3（A-B）和表10-1。表10-1 有关物质的HPLC法检查结果样品批号总杂质（%）最大杂质（%）201103150.100.035.5 结论在上述色谱条件下本品中有关物质可达到良好的分离，且专属性符合要求，本法可用于盐酸普萘洛尔原料药中有关物质检查。6 含量测定6.1方法的筛选根据相关文献查询，原料药含量测定方法研究结果采用HPLC法测定。6.2色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶Agilent (1504.6mm,5mm)；流动相：甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾缓冲液（50：50）；流速：1ml/min ；柱温：20.8；检测波长：292nm；进样量：20ml；理论塔板数按盐酸普萘洛尔峰计算不低于500，盐酸普萘洛尔峰与相邻杂质峰的分离度符合要求。6.3重复性实验取盐酸普萘洛尔对照品约10mg置10ml容量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度，滤过后连续进样6次，测定峰面积，计算RSD为1.89%。表10-2 盐酸普萘洛尔重复性实验次数123456RSD(%)峰面积24492.924938.724039.924325.125167.624166.81.89%6.4线性关系考察取盐酸普萘洛尔对照品适量，精密称定，用流动相稀释成10mg/ml的对照溶液。用移液管取对照溶液0.80、0.90、1.00、1.10、1.20ml，分别置于10ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。取20l进行测定，记录色谱图。结果表明，盐酸普萘洛尔在0.81.2mg/ml浓度范围内面积与浓度呈现良好的线性关系，回归方程为y = 22640x + 821.86，r = 0.9996。表10-3 盐酸普萘洛尔线性关系考察C(mg/mL)0.80.911.11.2A标/ A内18945.521115.223576.125696.127974.9图10-4 盐酸盐酸普萘洛尔线性关系曲线6.5稳定性实验取含量测定项下同一份溶液，分别在0，2，4，6，8h测定，记录峰面积，RSD为1.56%。表10-4 盐酸普萘洛尔稳定性试验时间（h）02468RSD(%)峰面积23669.424020.724202.423676.823240.51.56%6.6含量测定取盐酸普萘洛尔对照品和样品适量，精密称定，用流动相配成1mg/ml的溶液。按外标法计算即得，结果见表1。表10-5 样品含量测定结果（%）批号含量/（%）RSD/（%）20110315105.21.13参考文献1 曾苏，药物分析学（第五版），高等教育出版社，p362-365；2 中国药典委员会，中国药典（2010版），化学工业出版社；3 李发美，分析化学实验指导，人民卫生出版社；4 马春燕，高效液相法测定盐酸普萘洛尔含量，中国药师2005年第8卷第8期；5 李发美，分析化学（第六版），人民卫生出版社。附：色谱图图10-1 盐酸普萘洛尔紫外光谱扫描曲线A BC DE FA 空白溶剂 B 合成中间体甲萘酚 C 合成中间体普萘洛尔D 2mg/ml样品 E 3mg/ml样品 F 碱破坏图10-2 盐酸普萘洛尔的有关物质检查的专属性考察A BA 对照品 B 样品图10-3 盐酸普萘洛尔的有关物质检查的样品测定申请分类：新药申报临床试验注册分类： 第二部分 药学研究资料 编号：10药 品 名 称：盐酸普萘洛尔注射液资料项目名称：质量研究工作的试验资料研究机构名称（加盖公章）：浙江大学药学院本科教学实验中心研究机构地址：浙江省杭州市西湖区余杭塘路388号研究机构邮编：310058研究机构电话：0571-88208406研究机构主要研究者姓名（签字）：姚彤炜试验者姓名： 王焕威、陈重均、朱俊峰、陈厚柳试验起止日期：2011.3.32011.6.10原始资料保存地点：浙江大学药学院实验中心申请人机构联系人姓名：王焕威申请人机构联系人电话：13732216542申请人机构联系人E-mail:zju_whw申请人机构名称（公章）： 浙江大学药学院质量研究工作的试验资料1 样品来源制备盐酸普萘洛尔注射液的原料药由浙江大学药学院药物化学实验中心合成，注射液在浙江大学药学院药物制剂实验中心制备，批号为20110419。2 含量限度本品含C16H21NO2HCl应为标示量的90.0%-110.0%。3 性状本品为无色的澄明液体。4 鉴别 紫外吸收光谱法：取含量测定本品，照紫外-可见分光光度法测定，按药典规定在290nm的波长处有最大吸收，测得本品在290nm有最大吸收。见图10-5。5 检查5.1 pH值，应为3.04.0。结果见表10-6。表10-6 盐酸普萘洛尔注射液pH值测定次数123pH3.623.673.695.2 可见异物在灯检下，有小白点、毛屑等异物。5.3 不溶微粒符合要求6 含量测定6.1方法的筛选根据相关文献查询，盐酸普萘洛尔的含量测定方法研究结果采用紫外分光光度法测定。6.2仪器北京普析通用1901紫外分光光度计6.3测定波长的选择精密量取本品适量，加甲醇定量稀释制成每1ml中约含20g的溶液，摇匀，照紫外-可见分光光度法，以水为空白，在400200nm波长范围内扫描得到盐酸普萘洛尔注射液的紫外吸收光谱图，见图10-5。盐酸普萘洛尔注射液在290nm波长处有最大吸收，而辅料在此波长处无干扰，见图10-6，故选取用290nm波长为测定波长。6.4回收率实验精密量取1.0mg样品，置于10mL容量瓶中，加入约1.0mg普萘洛尔原料药混合，加水适量溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0mL置于10mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，照紫外分光光度法测量于290nm处得吸光度，按照吸光系数为207计算，测得平均回收率为100.35%，RSD为1.35%。见表10-7。表10-7 盐酸普萘洛尔注射液的回收率实验（n=9）次数加入量（mg）测得量（mg）回收率平均回收率RSD10.8080.809100.15%100.35%1.35%20.8080.80199.19%30.8080.79998.89%41.0100.99998.87%51.0101.014100.40%61.0101.032102.21%71.2141.240102.08%81.2141.236101.76%91.2141.20999.57%6.5吸光系数法含量测定结果取样品10支，将其内容物混匀，精密量取2.0mL（约相当于盐酸普萘洛尔2.0mg）置于10mL量瓶中，加水至刻度。从中精密量取1.0mL置于10mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，以水为空白，测定吸光度，测得结果如下表10-8。表10-8 盐酸普萘洛尔注射液的含量测定结果次数吸光度（A）相当于标示量的百分含量平均值10.370689.5%20.371089.6%89.6%30.370889.6%7 规格5mL：5mg参考文献1 曾苏，药物分析学（第五版），高等教育出版社，p362-365；2 中国药典委员会，中国药典（2010版），化学工业出版社；3 李发美，分析化学实验指导，人民卫生出版社；4 马春燕，高效液相法测定盐酸普萘洛尔含量，中国药师2005年第8卷第8期；5 李发美，分析化学（第六版），人民卫生出版社。附：光谱图图10-5 盐酸普萘洛尔注射液紫外光谱扫描曲线图10-6 辅料枸橼酸的紫外光谱扫描曲线申请分类：新药申报临床试验注册分类： 第二部分 药学研究资料 编号：12药 品 名 称：盐酸普萘洛尔资料项目名称：检验报告书研究机构名称（加盖公章）：浙江大学药学院本科教学实验中心研究机构地址：浙江省杭州市西湖区余杭塘路388号研究机构邮编：310058研究机构电话：0571-88208406研究机构主要研究者姓名（签字）：姚彤炜试验者姓名： 王焕威、陈重均、朱俊峰、陈厚柳试验起止日期：2011.3.32011.6.10原始资料保存地点：浙江大学药学院实验中心申请人机构联系人姓名：王焕威申请人机构联系人电话：13732216542申请人机构联系人E-mail:zju_whw申请人机构名称（公章）： 浙江大学药学院药品检验报告单品名盐酸普萘洛尔批号20110315包装塑料袋装数量1份送样单位浙大药学院送样日期2011.4检验目的是否符合中国药典检验项目质量检查检验依据中国药典报告日期2011.7.3检验项目质量标准草案要求实际测定结果性状白色结晶性粉末白色结晶性粉末鉴别UV法290nm处有最大吸收292nm处有最大吸收检查HPLC法单个杂质峰面积不得超过对照液主峰面积的0.5倍(1.0%),各杂质峰面积之和应不得大于对照液色谱图中主成分峰面积2倍(1.5%)最大杂质峰面积为对照液主峰面积的0.03%，总杂质峰面积为对照液主峰面积的0.10%。含量测定HPLC法盐酸普萘洛尔含量不得低于99.0%盐酸普萘洛尔含量为105.2%检验项目与结果检验结论: 符合中国药典规定检验单位: 浙江大学药学院检验者：陈厚柳、陈重均 复核者：朱俊峰 负责人：王焕威 申请分类：新药申报临床试验注册分类： 第二部分 药学研究资料 编号：12药 品 名 称：盐酸普萘洛尔注射液资料项目名称：检验报告书研究机构名称（加盖公章）：浙江大学药学院本科教学实验中心研究机构地址：浙江省杭州市西湖区余杭塘路388号研究机构邮编：310058研究机构电话：0571-88208406研究机构主要研究者姓名（签字）：姚彤炜试验者姓名： 王焕威、陈重均、朱俊峰、陈厚柳试验起止日期：2011.3.32011.6.10原始资料保存地点：浙江大学药学院实验中心申请人机构联系人姓名：王焕威申请人机构联系人电话：13732216542申请人机构联系人E-mail:zju_whw申请人机构名称（公章）： 浙江大学药学院药品检验报告单品名盐酸普萘洛尔注射液批号20110419包装塑料袋装数量200支送样单位浙大药学院送样日期2011.6检验目的是否符合中国药典检验项目质量检查检验依据中国药典报告日期2011.7.3检验项目质量标准草案要求实际测定结果性状无色的澄明液体无色的澄明液体鉴别UV法在290nm处有最大吸收在290nm处有最大吸收检查pH值3.04.03.66可见异物无可见异物有可见异物含量测定UV法盐酸普萘洛尔注射液含量应为标示量的90.0%-110.0%盐酸普萘洛尔注射液含量为89.6%检验项目与结果检验结论: 不符合中国药典规定检验单位: 浙江大学药学院检验者：陈厚柳、陈重均 复核者：朱俊峰 负责人：王焕威 申请分类：新药申报临床试验注册分类： 第二部分 药理毒理研究资料 编号：17药 品 名 称：盐酸普萘洛尔资料项目名称：主要药效学试验资料及文献资料研究机构名称（加盖公章）：浙江大学药学院本科教学实验中心研究机构地址：浙江省杭州市西湖区余杭塘路388号研究机构邮编：310058研究机构电话：0571-88208406研究机构主要研究者姓名（签字）：姚彤炜试验者姓名： 王焕威、陈重均、朱俊峰、陈厚柳试验起止日期：2011.3.32011.6.10原始资料保存地点：浙江大学药学院实验中心申请人机构联系人姓名：朱俊峰申请人机构联系人电话：13732216542申请人机构联系人E-mail:zju_whw申请人机构名称（公章）： 浙江大学药学院盐酸普萘洛尔对氯仿诱发小鼠心律失常模型的拮抗作用研究目的构建氯仿诱发小鼠心律失常的模型，观测小鼠心电图变化，统计其室颤发生率，研究盐酸普萘洛尔对小鼠心率失常的影响。材料药品和试剂：生理盐水 氯仿 自制盐酸普萘洛尔注射液（0.05%，0.2%） 标准盐酸普萘洛尔（0.1%）-来源、批号仪器和设备：500ml烧杯 手术器械 心电图机 天平 棉球实验动物：小鼠40只（雌雄等量，2330g）-来源、动物生产许可证号方法1将小鼠随机分为甲、乙、丙、丁、戊5组，分别为阴性对照组、阳性对照组、实验高剂量组、实验中剂量组、实验低剂量组，每组10只，标记称重。2阴性对照组：腹腔注射生理盐水，0.1ml/10g； 阳性对照组：腹腔注射0.1%标准盐酸普萘洛尔，0.1ml/10g；实验高剂量组：腹腔注射0.2%盐酸普萘洛尔，0.1ml/10g；实验低剂量组：腹腔注射0.05%盐酸普萘洛尔，0.1ml/10g。3. 给药20min后,逐一将小鼠放入含34ml氯仿棉球的倒置烧杯内，至出现呼吸停止时立即取出，记录心电图，也可剖开胸腔，肉眼观察室颤发生率；对实验数据进行统计学分析。4. 实验记录仪器采用生物机能实验系统进行实时采集与显示，仪器参数选择时间常数为0.02s，滤波30Hz，扫描速度80msdiv，增益为0.5mvdiv，信号输入连接方法是用针形电极插人小鼠（或大鼠）右上肢及双侧下肢，连续地实时记录观察心电图。结果记录小鼠心电图，观察其室颤发生状况。将小鼠心电情况分为以下三等并打分： 基本正常：指小鼠未发生室颤，心率正常，记为0分，心电图如下：图1.正常小鼠心电图 部分心率失常：指小鼠发生心室纤颤，但保持正常心脏节律，记为1分，心电图如下：图2.小鼠轻度室颤心电图 室颤：指小鼠发生重度室颤，无心脏节律，记为2分，心电图如下：图3.小鼠室颤心电图也就是说，室颤越明显，心率失常越严重，所得分数越高。统计各组小鼠所得分数，结果如下：表1. 小鼠心率失常得分结果编号阴性对照组阳性对照组高剂量组低剂量组112022211132111422215200062111721208211091220102121平均1.81.21.20.7t检验，阳性对照组与阴性对照组比较，P=0.0220.05；高剂量组与阴性对照组比较，P=0.0480.05；低剂量组与阴性对照组比较，P=0.00小于0.05。说明：阳性对照组、高剂量组、低剂量组与阴性对照组结果有显著差异。t检验，阳性对照组与高剂量组比较，P=10.05；阳性对照组与低剂量组比较，P=0.1050.05；高剂量组与低剂量组比较，P=0.1450.05。说明：阳性对照组、高剂量组、低剂量组之间结果无显著差异。讨论 1. 开胸腔观察室颤，对小鼠影响比较大，所得结果不准确，所以通过心电图判断室颤的发生。实验中关键的一点是判断小鼠呼吸停止，需要谨慎小心，小鼠晕厥后，观察到其胸腹腔起伏不明显至停止，即取出小鼠，记录心电图。 2. 为了区分盐酸普萘洛尔的作用效果，本实验没有采用单纯的记录小鼠是否发生室颤来评价药物的作用效果。一些现象如心室纤颤，心律失常无室颤那么强烈，说明药物也发生了一定的作用。因此评分可以体现药物的轻度作用，打分越高，说明小鼠室颤越明显，心率失常越严重。3. t检验结果显示，阳性对照组、高剂量组、低剂量组与阴性对照组结果有显著差异，说明各剂量的盐酸普萘洛尔均发挥了抗心律失常作用。阳性对照组、高剂量组、低剂量组之间结果无显著差异，说明各剂量的盐酸普萘洛尔发挥抗心律失常作用的差别不大，可以调节剂量差以区分最佳剂量的范围。推测低剂量的盐酸普萘洛尔抗心律失常作用更好。结论阳性对照组、高剂量组、低剂量组的盐酸普萘洛尔均具有抗心律失常作用，但各剂量组之间抗心律失常作用差别不明显。参考文献盐酸普萘洛尔对乌头碱诱发大鼠心律失常模型的保护作用研究目的构建乌头碱诱发大鼠心律失常模型，观测给药后大鼠心电图变化，统计诱发大鼠心率失常所需时间，研究盐酸普萘洛尔对大鼠心率失常的影响。材料药品和试剂：20%乌拉坦溶液 盐酸普萘洛尔注射液（0.05%，0.2%） 标准盐酸普萘洛尔（0.1%） 6ug/ml乌头碱溶液 生理盐水-来源仪器和设备：心电图机 心电图示波器 大鼠固定台 手术刀 止血钳 眼科镊 头皮静脉注射针头 注射器 天平实验动物：大鼠20只（雌雄等量，体重175-200g）-来源方法 1将大鼠随机分为甲、乙、丙、丁4组，分别为阴性对照组、阳性对照组、实验高剂量组、实验低剂量组，每组5只，标记称重。2各鼠均用乌拉坦1.2g/kg(20%溶液0.6ml/100g)腹腔注射麻醉，背位固定。在四肢皮下插入心电图机的针形电极，作描记心电图的准备。3实验记录仪器采用生物机能实验系统进行实时采集与显示，仪器参数选择时间常数为0.02s，滤波30Hz，扫描速度80msdiv，增益为0.5mvdiv，信号输入连接方法是用针形电极插人小鼠（或大鼠）右上肢及双侧下肢，连续地实时记录观察心电图。4各鼠均于一侧腹股沟部剪毛，沿股静脉走向剪开皮肤约1.5cm，暴露股静脉，插入与注射器相连的头皮静脉注射针头，以备注射药物。5阴性对照组：股静脉注射生理盐水，0.1ml/100g； 阳性对照组：股静脉注射0.1%标准盐酸普萘洛尔，0.1ml/100g；实验高剂量组：股静脉注射0.2%盐酸普萘洛尔，0.1ml/100g；实验低剂量组：股静脉注射0.05%盐酸普萘洛尔，0.1ml/100g。 6各鼠均于给药后10min，静注乌头碱30ug/kg(6ug/ml溶液，0.5ml/100g，1min注完)。各鼠均于注完乌头碱后开始计算时间，用心电图示波器监视心电图的变化，必要时描记心电图。密切注意异常心率（包括室性早搏、室性心动过速、室颤等）的出现时间。比较4组大鼠诱发心律失常所需的时间（从注完乌头碱至出现心律失常所经时间）的长短。对照鼠的诱发心律失常所需时间一般为23min。结果实验过程中由于手术难度很大，本批大鼠对于实验室提供的乌头碱不敏感，因此成功的个例很少，结果无统计学意义。经小组成员讨论通过，取出其中四只大鼠分别设为阴性对照组、阳性对照组、高剂量组、低剂量组，改用5水合氯醛0.5mL/100g诱发大鼠心律失常，考察水合氯醛是否适合作为诱发大鼠心律失常药物。以下为分组和造模情况：表1. 盐酸普萘洛尔对大鼠心律失常模型的保护作用分组及造模情况诱发大鼠心率失常药物阴性对照组阳性对照组高剂量组低剂量组乌头碱 1+ +-2-+-3+-4-水合氯醛 1 +-+ 注：“+”表示手术成功，“”表示手术失败鉴于以上结果，展示造模成功个例中的典型实验结果。1.乌头碱诱发大鼠心律失常模型阴性对照组1号：初始注射生理盐水有轻中度室颤，注射乌头碱之后室颤更明显，一段时间后大鼠心律恢复正常。图1.注射生理盐水大鼠心电图图2.注射乌头碱后2分0.31s大鼠心电图图3.注射乌头碱后16分38.25s大鼠心电图2.乌头碱诱发大鼠心律失常模型阳性对照组3号：未给任何药时心律正常，15分20s注射标注盐酸普萘洛尔后可发现心率稍稍变慢，31分14s注射乌头碱，44分47s出现心律失常，持续到1小时10分记录停止。图4.未给药时大鼠心电图图5.注射盐酸普萘洛尔后大鼠心率变慢图6.注射乌头碱后大鼠出现心率失常 3. 水合氯醛诱发大鼠心律失常模型阴性对照组1号：未给药时大鼠心电图正常，8分44s注射水合氯醛，9分14s出现心律失常，后心律失常加重，不久心跳变慢变微弱，14分53s死亡。图7.未给药时大鼠心电图图8. 注射水合氯醛后出现心律失常（9分14s）图9.心律失常加重（12分46s）图10.心率变慢（13分16s）图11.大鼠心跳变慢变弱图12.大鼠逐渐死亡，心电图变平（14分53s）4. 水合氯醛诱发大鼠心律失常模型低剂量组1号：14分55s注射水合氯醛，至34分11s期间，大鼠心率变慢，34分11s开始出现心律失常，最后心跳变弱变慢，43分左右接近死亡，后面未记录。图13.未给药时大鼠心电图图14.注射盐酸普萘洛尔后心电图图15.注射水合氯醛一段时间后大鼠出现心律失常（34分11s）讨论 1.股静脉注射难度较大，且本批大鼠对于实验室提供的乌头碱不敏感，实验动物数量少，因此实验结果不理想。2. 对乌头碱诱发大鼠心律失常模型阴性对照组1号分析可知：手术后大鼠即有轻度的心率失常，注射乌头碱约2min后心律失常有加重趋势，时间与文献相符合。心律失常持续15min左右，时间较短，说明乌头碱的诱发大鼠心律失常作用不明显。3.对乌头碱诱发大鼠心律失常模型阳性对照组3号分析可知：注射标准盐酸普萘洛尔可能有减慢心率的作用，从注射乌头碱到出现心律失常的时间为13min左右，比阴性对照组（约2min）的时间延长，说明标准盐酸普萘洛尔可能具有对大鼠心律失常的保护作用。 4. 对水合氯醛诱发大鼠心律失常模型阴性对照组1号分析可知：水合氯醛诱发大鼠心律失常所需时间约为30s，且诱发心律失常的作用较重，并导致大鼠心率变慢，心跳变弱，最终死亡。从注射水合氯醛到大鼠死亡时间约为6min。 5.对水合氯醛诱发大鼠心律失常模型低剂量组1号分析可知：注射水合氯醛至诱发大鼠心律失常所用时间为20min左右，其间大鼠心率变慢。最后大鼠心跳变慢变弱，最终死亡。从注射水合氯醛到大鼠死亡时间约为30min。 6.从以上结果可推测，实验室乌头碱诱发大鼠心律失常不明显，而水合氯醛虽能有效地诱发大鼠心率失常，但容易导致大鼠死亡，考虑改变水合氯醛的用量。较阴性对照组，注射盐酸普萘洛尔后两个模型中从注射乌头碱或水合氯醛到出现心律失常出现时间变长，说明盐酸普萘洛尔对于大鼠的心律失常有一定的保护作用。且盐酸普萘洛尔可延长水合氯醛诱发大鼠心律失常大鼠的存活时间，验证了盐酸普萘洛尔对于大鼠的心律失常的保护作用。结论 乌头碱诱发大鼠心律失常模型有待改良，改用水合氯醛诱发可能是一个有效的途径。盐酸普萘洛尔对于大鼠的心律失常有一定的保护作用。参考文献