人参甘草诱导PBMC分泌细胞因子和SIL2R的作用及机制探讨

人参、甘草诱导PBMC分泌细胞因子和SIL-2R的作用及机制探讨张剑平，徐克沂，高燕菁，樊文梅，魏红山，徐道振，陆蕴茹【摘要】目的探讨人参、甘草体外诱导人外周血单个核细胞 （PBMC）分泌细胞因子机制。方式咱们选择生晒参、红参、甘草三种 中药的提取液加入PBMC培育液中，孵育5d后，采纳ELISA方式测定 上清液中的细胞因子水平。结果生晒参、红参、甘草能诱导PBMC分 泌细胞因子和SIL-2R,其中药组TNF-a、SIL-2R、IL-二、IFN-Y含 量明显高于细胞对照组，专门是生晒参诱生PBMC高分泌IFN-Y尤其 突出。结论生晒参、红参、甘草对体外诱导PBMC分泌TNF-a、IL- 二、IFN-丫细胞因子和SIL-2R。【关键词】生晒参红参甘草PBMC细胞因子Studies on the role of induced cytokines, SIL_2 by ginseng and glycyrrhiza in PBMCAbstract Objective In order to elucidate the role of ginseng and glycyrrhiza in cellular immunity regulation and study the mechanism of induced cytokines by the Chinese medicines in PBMC were induced by water-solubility extract respectively from radix ginseng , radix ginseng rubra and glycyrrhiza and cytokines levels was assayed by the methods of Radix ginseng, radix ginseng rubra and glycyrrhiza could induce high levels of cytokines. The levels of TNF- a , SIL-2R, IL-2 and IFN- Y among the group of Chinese medicine were significant higher than that of control group, especially high-level production of IFN- y induced by radix Radix ginseng, radix ginseng rubra and glycyrrhiza play a role of positive regulation for immunity system in vitro as immunopotentiator. Radix ginseng was stronger than the radix ginseng rubra and glycyrrhiza, but they have a different mechanism of immune regulation.Key words radix ginseng radix ginseng rubra glycyrrhiza PBMC cytokines最近几年来有关人参、甘草调剂免疫功能的研究己有许多报导 1,但对其体外诱导PBMC分泌细胞因子和SIL-2R很少报导。本实 验人参、甘草诱导外周血单个核细胞的细胞因子和SIL-2R分泌的调剂 作用。1材料与方式材料生晒参、红参、甘草标准品购自中国药品生物制品检定所。诱生细胞本院职工健康献血员。TXF- a检测试剂美国Genzyme公司。淋巴细胞分离液中国医学科学院天津血液病研究所。IMDM营养液 美国GIBCO公司。IL-2 （白细胞介素H）检测试剂盒 美国Biosos公司。IFN-y （干扰素-丫）检测试剂盒 美国Biosos公司。SIL-2R检测试剂盒白求恩医科大学免疫教研室。方式中药制备取生晒参、红参、甘草标准品各5g,别离加入双蒸水50ml,浸泡24h,加热回流2h,用中性滤纸过滤，置4c冰箱沉降24ho 4 14000rpm离心lOmin,弃沉淀物，将上清液除菌，分装，4 保留备用。分离PBMC取肝素抗凝血50ml,用无Ca2+, Mg2+, Hank, s液 将抗凝血L1稀释后，缓慢加在淋巴细胞分离液上，抗凝血与无Ca2+, Mg2+, Hank * s液和淋巴细胞分离液的比例为1： 1： 1, 1700rpm离 心20min,吸取淋巴细胞层，加入无Ca2+、Mg2+, Hank, s液混匀洗 涤，1300rpm离心lOmin,弃上清，重复洗涤2次。进行细胞计数后， 备用。细胞因子诱生 以细胞浓度X 106/孔置入24孔细胞培育板，实 验组别离加入用IMDM营养液按必然比例稀释的生晒参、红参和甘草无 菌溶液，对照组别离加入等量IMDM营养液,37、5%C02孵育5d,别 离掏出培育上清，2000rpm离心lOmin,弃沉淀物，待检测。细胞因子测定严格按说明书操作测定细胞培育上清中细胞因 子水平和SIL-2Ra统计学方式应用t查验。2结果生晒参、红参及甘草在没有任何诱生剂参与的情形下，体外诱导 PBMC产生细胞因子，结果显示对照组的TXF-a、SIL-2R、IL-二、IFN- 丫效价明显比实验组低，而生晒参诱导的PBMC上清液中IFN-Y水平 又明显高于红参组，P图13讨论研究说明人参是一种正向免疫调剂剂2。最近几年来国内外对 人参、甘草的研究要紧集中在药源开发、提取新的有效成份及药理药 效方面的研究。研究中发觉人参不仅可协同PHA对PBMC促诱生IFX- Y，而且还可增进IFN-丫基因表达，促使IFN-Y mRNA转录量增加及 高分泌 IFN-Y 3, 4o以往对人参、甘草的免疫药理学研究多偏重于体内观看及动物实 验，尚未见到在体外实验中直接作用于PBMC并诱导分泌TNF-a . SIL-2R、1L-二、IFN-a的研究报导。淋巴细胞是机体免疫应答的核心, 而淋巴细胞分泌的TNF-a、SIL-2R、IL-二、IFN-a等多种细胞因子, 又是T淋巴细胞的活化指标。IL-2是一种由TH细胞分泌的具有显著 调剂免疫应答作用的介质，能活化巨噬细胞，增强NK细胞和LAK细胞 活性，诱生IF,及激活B细胞产生抗体等生物效应，因此许多学者 主张以细胞因子水平来研究免疫功能具有关键意义。本实验在没有任 何诱生剂参与的情形下，生晒参和红参及甘草都能诱导高效价的细胞因子，说明人参和甘草均具有重要免疫调剂作用。专门是生晒参诱生PBMC 高分泌IFN-丫尤其突出。并能提高单位细胞中各类因子产量的作用 5,进而通过IL-2广谱的免疫增强作用，改善或提高机体的免疫功 能。再一次证明了红参和生晒参及其有效成份能够增加人的特异性与非特异性细胞免疫功能 6o说明生晒参及红参和甘草均具有明显增进淋巴细胞活化和增进 内源性IL-2、IFN-Y的产生，但体外诱导细胞因子水平不完全相同。 其结果说明这些细胞因子是生晒参、红参及甘草发挥药效的分子介质 和物质基础，是其适应原样作用，也是增强机体对各类有害因素的非 特异性抗击力的药效机理之一。也可能中药进入体内后对不同的免疫 应答可有不同的作用，这种选择性作用的现象进一步反映了中药免疫 药理学作用的精细性与复杂性。甘草的作用机理及药理药效等方面仍 然是尔后研究的重点。【参考文献】1尹旭辉，杨晓临，姜在福，等.甘草酸单胺对严寒进程中小鼠 脾细胞NK活性及IL-2产生能力的调剂作用.解放军预防医学杂志， 1993, 11 (5)： 382-383.2罗晶，郭谀，勾敏慧，等.人参养荣汤对小鼠免疫功能的调剂.中国现代医学杂志，2002, 5： 250.3田志刚，扬贵贞.人参三醇皂忒增进人淋巴细胞IFX-Y基因 表达.上海免疫学杂志，1991, 11 (2)： 82.4常雅萍，扬贵贞.几种中药提取物诱生人干扰素.中国实验临 床免疫学杂志，1992, 29 (2)： 37.5扬吉成，盛伟华，张云，等.装甲基茯苓多糖对HPBL分泌IL- 二、TNF、IL-六、IFN-丫的调剂作用.中国免疫学杂志，1997, 13 (5)： 293.