农杆菌介导的马铃薯转基因优化试验及基因型响应能力评价

农杆菌介导的马铃薯转基因优化试验及基因型响应能力评价马铃薯是重要的蔬菜、 粮食兼用作物 , 世界总产量仅次于水稻、 小麦、玉米, 居第四位。我国是马铃薯最大生产国 , 但是单产水平远低于美国、荷兰等国。优良品种的缺乏和育种方式的落后是造成马铃薯单产水平低的重要因素 , 基 因工程育种是马铃薯品种改良的有效手段。目前 , 虽然马铃薯转基因技术已经获 得成功 , 但技术还不够成熟。本研究的内容包括 :(1) 马铃薯品种遗传转化响应能力的评价 ;(2) 遗传转化 技术体系的试验 , 包括添加乙酰丁香酮、添加表面活性剂 SilwetL-77 、进行超声 辅助转化以及进行真空渗透辅助转化。获得如下研究结果 :1. 测试的 8 个马铃薯 早熟品种中,宁3、宁8、云薯505、V0024-6、V0379-2、CV92028-1六个品种能 在含有潮霉素 (HygB) 的培养基上产生抗性愈伤组织 , 愈伤组织形成率从 62.8%到 70.5%不等,其中宁 8最高,说明品种间遗传转化响应能力差异较大。2.添加乙酰丁香酮能够显著提高农杆菌介导的马铃薯遗传转化效率,100卩M乙酰丁香酮将马铃薯品种 Desiree 茎段外植体的转化率从 2.7%提高到 4.6%,乙酰 丁香酮的最适添加量在100卩M-200卩M之间。3.添加Silwet L-77没有显著提高 转化率, 并且 Silwet L-77 对植物有毒害作用 , 当添加量达到 0.01%就开始降低转 化率。4. 超声辅助处理后 , 在愈伤形成培养基上农杆菌大量繁殖 , 从而导致茎段大 量死亡,无法形成愈伤组织 ,所以这种方法不适合马铃薯的遗传转化。 5.真空渗透 处理对茎段造成一定的损伤 ,1 min 以上的真空处理会导致愈伤形成率和转化率 的大幅下降 , 降低了转化率