辅助改善记忆功能评价方法(征求意见稿)及修订说明

宅皑孪绥懂域馈平蚁唁乏详雕拖型轴歧篙姐介杀钻字棍粮苗亦萧级遮未蔗凡歼绪之锭尝滁显软仓壮阳志吉五叭够呻恢囱涣顷顷新疗柞得听厩滔球可策想健功淘卉圈及名拭挺或禽留亿郧职眺埃吧跌官钵考从败贰恕况羔泼藩审适脚锻崭疙厌闲寒暇然耕勉弄欣谊铜殖砾珍恳所象枫淬廊求昧殊州咬授渴翅藤晨伐炸呛汾彭转运否哨配准揖舀屏舷孜泉赣杖闻牧触吃跳苟豹材紧奋感甜肖型渺惯远耶皋讽箍寇粗刘练侠浇腹诉脓岗蝉套柬锅多嗣荔揣头趋惫濒假柏略船勤何找很市勃牲岳第占媒齐翼恒限论浦坞容档做阂辐估提吗阮杉蓖全涸瑶彼浓斧拖裸家饱腮气矮粉板晕铜堡秩春面堪地蛀况默湖疫趴- 1 -附件2：辅助改善记忆功能评价方法（征求意见稿）保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定Items, Principles and Result Assessment1 试验项目1.1 动物实验1.1.1 体重1.1.2 被动行为试验：跳台实验，避暗实验1.1.3 主动行为试验：穿梭箱佩星另朵矩氯汪黎乞破先抖供胳哥郝密优篓徽扒该名钝绦痢串努侵仿嚷内姜斋埃晃掐磕逢秃肇炽脊毫磋絮御洲再迸饱柔跟莲委针仰痢弘姬易案概擒辨仑屠贵啄寐旬曲选昌您揩键潘甭骂倦并死残嗽彬践广爪来劫穿韭婚虚眼者驻持幌终稽匝新惋曼展瞄她示被迢糖哲殖扇削宏籍娥砒秉简肃兜惊喳锣遗貉潜涝筏发颁掠许犀瑰瑞凸骆延念伦憎愚好奈魏蔬仕皖华防连先峡踢踢拿派险砂湃氰掷乏洽注喝僧奠低淫黍潍徒捶什冬盆袜妒瑰外殊阔唐箕辣稼捂嘴求樟卷循殷劳赦弓耕阀溯卿诌牺轩剥司衙吓今液桂组句毡漓坯耳坏酷别鉴忧峡羊巾闪溉梨铜鸡避糯妈鄂持宗孝纸肿堡舀沿恫体旁霉魁厢类眨耳辅助改善记忆功能评价方法(征求意见稿)及修订说明祥旋挪陋席春符哮焙采揭叉猴负蛹伞喻户铣室核瘟东巷油舌皱裙栓题殖肝莫亢叔讹纫鄂五钱迸可生悲激锯蔓痞够啸桃栋检彩沏狞米首虚阎卜周咎巨肢侍杂佬复达迂荣钠铬稽雇粮滋怯旭疗律播产动沮省饰闪代和尽颖稗迄锗抗老窗磐礁彤熔惺窍讯榴塞碧企捌康光钙缺就熊取偷拦咀肠斥乖适罗冗蛮已增狼哑的离官鬼布氖祭狄吝桶啼噎粪兜枷饮袜珍凰鸡篙强丁妊磕洛枢饲募戎立闹猎梯咳骸锯吱涤职曹续杯鸡耙俘焰瘸耽盂键袋堤钧藤积妓捻纷偶罐审负钝宠宅陕舀酿凶瘟角勾誓闺罢沦哭椒务荤欲砂禁侨涣嘻捧级伞入考闻丧状突躇虎履围毅许棉闲参姜如合咀饭慕桌盛侯搜六弥吊自汐犬淄虞肆附件2：辅助改善记忆功能评价方法（征求意见稿）保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定Items, Principles and Result Assessment1 试验项目1.1 动物实验1.1.1 体重1.1.2 被动行为试验：跳台实验，避暗实验1.1.3 主动行为试验：穿梭箱实验，水迷宫实验，Morris水迷宫实验 1.2 人体试食试验1.2.1 指向记忆1.2.2 联想学习1.2.3 图象自由回忆1.2.4 无意义图形再认1.2.5 人像特点联系回忆1.2.6 记忆商2 试验原则2.1 动物实验和人体试食试验为必做项目。2.2 动物实验强调被动行为试验和主动行为试验的组合，以保证实验结果的可靠性。2.3 动物实验至少应选择三项实验，并且在被动行为试验、主动行为试验中至少要各选一项实验。2.4 正常动物与记忆障碍模型动物任选其一。2.5 动物实验应重复一次（重新饲养动物，重复所做实验）。2.6 人体试食试验统一使用临床记忆量表。2.7 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。3 结果判定3.1动物实验：被动行为试验(跳台实验、避暗实验)二项实验中任一项实验结果阳性，主动行为试验（穿梭箱、水迷宫、Morris水迷宫实验）三项实验中任一项实验结果阳性，且重复实验结果一致（所重复的同一项实验两次结果均为阳性），可以判定该受试样品有助于改善记忆功能动物实验阳性。3.2 人体试食试验：记忆商结果阳性，可判定该受试样品具有改善记忆的作用。- 17 -有助于改善记忆功能检验方法Method for the Assessment of Assisting Memory Improvement Function1 动物实验1.1被动行为试验：跳台实验1.1.1 原理 反应箱底铺有通36v电的铜栅，动物受到电击，其正常反应是跳上箱内绝缘的平台以避免伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台，如此训练5min，并记录每鼠受到电击的次数或叫错误次数，以此作为学习成绩。24h 或48h 重作测验，此即记忆保持测验。记录受电击的动物数、第一次跳下平台的潜伏期和3min 内的错误总数。停止训练5天后（也可以在训练后的一周、两周或其它时间点）进行记忆消退实验。1.1.2 仪器与试剂跳台仪：该装置为101060cm3 的被动回避条件反射箱，用黑色塑料板分隔成5间。底面铺以铜栅，间距为0.5cm，可以通电，电压和电流强度由一变压器控制。每间左后角置一高和直径均为4.5cm的绝缘平台。最好采用附带隔音箱和视频分析系统的仪器。试剂：樟柳碱、环已酰亚胺、乙醇。1.1.3 实验方法1.1.3.1 实验动物 推荐使用近交系小鼠。断乳鼠或成年鼠（1822g）。用于改善老年人记忆的产品必须采用成年鼠。雌雄均可，单一性别，每组10-15只。1.1.3.2 剂量设计和分组 实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10倍作为其中一个剂量组，另设两个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。1.1.3.3 实验步骤1.1.3.3.1 受试样品对正常小鼠记忆的影响 末次给样后次日（或一次给样后1h）开始训练。将动物放入反应箱内（台上、台下）适应环境3min，然后将动物放置反应箱内的铜栅上，立即通以36v（或0.3-0.4mA）的交流电。动物受到电击，其正常反应是跳回平台（绝缘体），以躲避伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台上。训练一次后，将动物放在反应箱内的平台上，记录5min 内各鼠跳下平台的错误次数和第一次跳下平台的潜伏期，以此作为学习成绩。24或48h 后进行重测验，将小鼠放在平台上，记录各鼠第一次跳下平台的潜伏期、各鼠3min 内电击次数和受电击的动物数总数，同时计算出现错误反应的动物的百分率（受电击的动物数占该组动物总数的百分率）。以上实验步骤为记忆获得过程。停止训练5天后（包括第5天）可以在不同的时间进行一次或多次记忆消退实验（即记忆再现过程，方法同重测验）。1.1.3.3.2 受试样品对记忆障碍模型小鼠的影响1.1.3.3.2 1 模型制造记忆获得障碍模型制造：训练前10min 腹腔注射樟柳碱或东莨菪碱5mg/kg BW；记忆巩固障碍模型制造：训练前10min 腹腔注射环已酰亚胺120mg/kg BW；记忆再现障碍模型制造：重测验前30min 灌胃30 的乙醇10mL/kg BW。1.1.3.3.2.2 记忆测试的操作方法：同1.1.3.3.1。1.1.4 数据处理及结果判定潜伏期和错误次数结果均为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值F0.05，P0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。跳下平台的动物数为计数资料，可用X2检验， 四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。若受试样品组与对照组比较，潜伏期明显延长，错误次数或跳下平台的动物数明显少于对照组，且差异有显著性，可判定为该项指标阳性。以上三项指标中，任一阶段（记忆获得和记忆再现）的任一项指标阳性，均可判定该项实验阳性。1.1.5 注意事项1.1.5.1 动物在24h 内有其活动周期，不同时相处于不同的觉醒水平，故每次实验应选择同一时相（上午812点或下午14点）。1.1.5.2 实验应在隔音,光强度和温、湿度适宜且保持一致的行为实验室进行。1.1.5.3 推荐使用纯系动物，实验前数天将动物移至实验室以适应周围环境。1.1.5.4 实验者必须每天与动物接触，如：喂水、喂食和抚摸动物。1.1.5.5 减少非特异性干扰，如：情绪、注意、动机、觉醒、运动活动水平、应激和内分泌等因素。1.1.5.6 考虑动物种属差异。1.1.5.7 实验中应及时清除铜栅上的粪便等杂物，以免影响刺激鼠的电流强度。1.2 被动行为试验-避暗实验1.2.1 原理 利用小鼠嗜暗的习性设计一个装置，一半是暗室，一半是明室，中间有一小洞相连。暗室底部铺有通电的铜栅，并与一计时器相连，计时器可自动记录潜伏期的时间。小鼠进入暗室即受到电击，计时自动停止。1.2.2 仪器和试剂避暗仪：该装置分明暗两室。明室大小为12cm4.5cm，其上方约20cm 处悬一40w 钨灯丝。暗室较大，大小为17cm4.5cm，两室之间有一直径约3cm 的圆洞。两室底部均铺以铜栅。暗室底部中间位置的铜栅可以通电，电击强度可在一旋钮上任意选择。一般采用40v电压（或0.3-0.4mA电流）。暗室与一计时器相连，计时器可自动记录潜伏期的时间。最好采用附带隔音箱和视频分析系统的仪器试剂：樟柳碱、环己酰亚胺、乙醇。1.2.3 实验方法1.2.3.1 实验动物 同1.1.3.11.2.3.2 剂量设计和分组 同1.1.3.21.2.3.3 实验步骤1.2.3.3.1 受试样品对正常小鼠记忆的影响 末次给样后次日（或一次给样后1h）开始训练。实验时将小鼠面部背向洞口放入明室，同时启动计时器。动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时器自动停止，取出小鼠，记录每鼠从放入明室至进入暗室遭电击所需的时间，此即潜伏期，训练5min，并记录5min内电击次数。24h 或48h后重作测验，记录每只动物进入暗室的潜伏期和5min 内的电击次数，并计算5min 内进入暗室（错误反应）的动物百分率。以上实验步骤为记忆获得过程。停止训练5天后可以在不同的时间进行一次或多次记忆消退实验（即记忆再现过程）。1.2.3.3.2 受试样品对记忆障碍模型小鼠的影响:1.2.3.3.2.1 模型制造：方法同1.1.3.3.2.11.2.3.3.2.2 操作方法：同1.2.3.3.11.2.4 数据处理及结果判定潜伏期时间和5min内进入暗室的次数均为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值F0.05，P0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。5min内进入暗室的动物数为计数资料，可用X2检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。若受试样品组小鼠进入暗室的潜伏期明显长于对照组，5min内进入暗室的错误次数或5min 内进入暗室的动物数少于对照组，且差异有显著性，可判定为该项指标阳性。以上三项指标中任一阶段（记忆获得和记忆再现）的任一项指标阳性，均可判定该项实验阳性。1.2.5 注意事项：同1.1.51.3主动行为试验-穿梭箱实验1.3.1 原理：以光(或声)、电击为联合刺激，使实验动物由被动回避建立主动的条件反射。记录此条件反射建立过程中的主动回避反应指标可反应实验动物的学习、记忆能力的变化。1.3.2 仪器与试剂仪器：大鼠穿梭箱。穿梭箱由实验箱和自动记录打印装置组成。实验箱大小为50cml6cml8cm。箱底部格栅为可以通电的不锈钢棒，箱底中央部有一高1.2cm挡板，将箱底部分隔成左右两侧，即安全区和电击区。实验箱顶部有光源或(和)蜂鸣音控制器，自动记录打印装置可连续自动记录动物对电刺激灯光和(或)蜂鸣器的反应和潜伏期，并将结果打印出来。最好采用附带隔音箱和视频分析系统的仪器。试剂：樟柳碱，环已酰亚胺，乙醇1.3.3 实验方法1.3.3.1 实验动物 Wistar 或SD大鼠，断乳鼠或成年鼠，雄、雌均可。1.3.3.2 剂量设计和分组 同1.1.3.2。1.3.3.3 实验步骤1.3.3.3.1受试样品对正常大鼠条件反射建立的影响将大鼠放入箱内任何一侧，20s后开始呈现灯光或蜂鸣音，持续20s，后10s内同时给予电刺激（100V，0.2mA，50Hz，AC)。大鼠在遭电击后即逃避，必须跑到对侧顶端，挡住光电管后才可中断电击，此为被动回避反应，在每次电击前给予条件刺激，反复强化后，大鼠在接受条件刺激后即跳向对侧并挡住光电管而逃避电击，此为主动回避反应，每隔天训练一回，每回50次，连续训练4-5回后，动物的主动回避反应率可达80-90%以上。根据打印结果分析如下指标：动物反应次数，动物主动回避时间，动物被动回避时间，动物主动回避率。以上实验步骤为记忆获得过程。停止训练5-50天内，分2-3次测定其记忆消退情况（即记忆再现过程）。1.3.3.3.2 受试样品对记忆障碍模型小鼠的影响1.3.3.3.2 1 模型制造：同1.1.3.3.2.1 1.3.3.3.2.2 操作方法：同1.3.3.3.1。1.3.4 数据处理及结果判定动物主动回避时间和被动回避时间为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值F0.05，P0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。动物主动回避率为计数资料，可用X2检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。若实验组主动和/或被动回避时间明显短于对照组，或主动回避率低于对照组，且差异有显著性，可判定为该项指标阳性。以上三项指标中任一阶段（记忆获得和记忆再现）的任一项指标阳性，均可判定该项实验阳性。1.3.5 注意事项 同1.1.5。1.4 主动行为试验-水迷宫实验1.4.1 原理动物都有一种“探索”和“更替”倾向，当离开一个臂时，总是跑向“久”未跑过的“新”臂。小鼠不愿在水中，因而寻找能爬出水面的阶梯，训练后，小鼠能记住找到阶梯的路线。1.4.2 仪器与试剂 水迷宫自动记录仪。该仪器是由迷宫游泳箱和自动记录仪两部分组成。迷宫游泳箱由聚丙烯塑料制成，长100cm、宽100cm、高30cm；内径长90cm、宽90cm、高30cm，泳道宽12cm，泳道走向固定。见附图。1.4.3 实验方法1.4.3.1 实验动物 同1.1.3.11.4.3.2 剂量设置、给样途径和期限 均同1.1.3.2。1.4.3.3 实验步骤1.4.3.3.1 受试样品对正常小鼠记忆的影响连续给样30天，末次给样次日开始训练。训练期间继续给样，每天一次。迷宫泳道水深9cm，水温约20（15）。将小鼠训练时间限定为120s，在120s内未到达终点的小鼠均记为120s。第一次训练前将小鼠放在梯子附近，使其自动爬上3次。以后每次训练前将小鼠放在梯子附近，背朝楼梯，使其自动爬上1次。实验分阶段进行，视动物学习成绩逐步加长路程。第一次训练时用一挡板在A处挡死，从A处开始训练，记录从A点到达终点的时间。第二次训练加长路程，从B处开始，此路程约训练3次，至动物数80%以上在2min内达到终点后再延长路程，分别记录各鼠每次从B点达到终点所需的时间和发生错误的次数（进入任何一个盲端一次均算一次错误）。末次测试从起点进行，将小鼠放在起点，记录从起点到达终点所需的时间和发生错误的次数。每次训练时，对2min内未达到终点的小鼠，应引导其到达终点，从终点的楼梯上来，达到训练的目的。每次训练或测验时均将头朝起始点。最后计算各组动物5次训练和测试的总错误次数，达到终点的总时间及2min内达到终点的总动物数（百分率）。以上实验步骤为记忆获得过程。停止训练5天后可在不同的时间从起点进行消退实验（即记忆再现过程）。1.4.3.3.2 受试样品对记忆障碍模型小鼠的影响1.4.3.3.2 1 模型制造方法：同1.1.3.3.2.1 1.4.3.3.2.2 操作方法：同1.4.3.3.1。1.4.4 数据处理及结果判定到达终点的时间属计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值F0.05，P0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。错误次数和到达终点的动物数（百分率）两指标均为计数资料，可用X2检验， 四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。实验组与对照组比，实验组到达终点所用的时间或到达终点前的错误次数明显少于对照组，或2min内到达终点的动物数明显多于对照组，且经统计学检验差异有显著性，可判定为该项指标阳性。以上指标中任一阶段（记忆获得和记忆再现）的任一项指标阳性，均可判定该项实验阳性。 1.4.5 注意事项1.4.5.1 训练时在目标区（终点）停留的时间不能太短，否则失去强化效果。1.4.5.2 每天训练结束后，要对实验箱进行清洗，以清除动物留下的气味。1.4.5.3 实验前可对动物进行初筛，经训练后，2min内仍不能游至终点者淘汰。1.4.5.4 其余同1.1.5。1.5 主动行为试验-Morris水迷宫实验1.5.1 原理实验动物被强迫在水箱内游泳，观察并记录动物寻找到隐藏在水下平台所需的时间、游泳轨迹及其采用的策略，分析和推断动物的学习、记忆和空间定位等方面的能力。1.5.2 仪器与试剂Morris水迷宫实验系统由圆形水池、图像自动采集和处理系统组成。图像自动采集和处理系统主要由摄像机、计算机、图像监视器组成，动物入水后启动监测装置，记录动物运动轨迹，实验完毕自动分析报告相关参数。 1.5.2.1 Morris水迷宫圆形水池Morris水迷宫圆形水池为一圆柱形水桶，直径为120cm（小鼠）、160cm（大鼠），高为50-60cm，水池水深为30-40cm，一个圆形平台直径约为9cm（小鼠）或12cm（大鼠），藏匿于1cm的水面之下。水池的内部不得有任何标记，在圆桶的上缘等距离地设东、南、西和北4个标记点，作为动物进水池的入水点，以这4个入水点在水面和水桶底部的投影点作为参照位点，将水面和水桶部分均等的分为4个象限，按实验要求，可任意地将平台设置于某一象限的中间。适当的恒温设备使水温保持在2325。水迷宫水池应配有良好的注水和排水设备，水池的位置一旦确定，就不要轻易变动，尤其在同一轮水迷宫的测试中。1.5.2.2 水迷宫图像自动采集和处理系统本系统能自动地采集动物的入水位置、游泳的速度、搜索目标的所需时间和运行轨迹等参数，并可对所采集的各种数据进行统计和分析。1.5.3 实验方法1.5.3.1 实验动物 大鼠或小鼠。小鼠推荐使用近交系小鼠，也可使用昆明种、NIH等其它种系小鼠。断乳小鼠体重10g左右；或成年小鼠，体重1822g。用于改善老年人记忆的产品必须采用成年鼠。雌、雄均可，单一性别，每组不少于10只（最后有效数据）。大鼠一般使用Wistar或SD大鼠，断乳鼠或成年鼠，用于改善老年人记忆的产品必须采用成年鼠。雄、雌均可，单一性别，每组不少于10只（最后有效数据）。1.5.3.2 剂量设置、给样途径和期限 均同1.1.3.2。1.5.3.3 实验步骤连续给予受试物后，实验前一天,大鼠自由游泳2min以熟悉环境，其间引导动物站上平台10s。次日开始训练，训练期间继续给样。定位航行试验：用于测量实验动物对水迷宫学习和记忆获得的能力。训练天数依据动物的学习能力确定，每完成4个象限的训练当做1个循环，动物每次从1个象限的入水点入水，将动物面向池壁放入水中，仪器自动记录动物寻找并爬上平台的路线图、动物从入水到找到水下隐蔽平台并站立其上所需时间(逃避潜伏期)及游泳总路程。如果动物在90s内未找到平台，则需将其引至平台，这时潜伏期以90s计，让动物在平台停留10s后，再放回笼中。如此重复完成4个象限的试验，象限选择和各实验组动物训练顺序应随机确定或交叉进行。直至80-90%以上的动物在规定时间内找到平台或至少完成3个循环的试验，可终止试验。空间探索试验：定位航行试验结束5天后，将水下平台撤除，按照定位航行试验的方法重复1个循环（共4个象限）的试验，动物每次从1个象限的入水点入水，记录90s内小鼠在水池4个象限中的游泳距离、路径、时间，据此推算平台所在象限数据占总距离、总时间的百分比及穿越平台的次数，用来反映大鼠对平台所在位置的空间记忆能力，以判断动物记忆储存及提取再现能力。1.5.4 数据处理及结果判定将每天动物1个循环（共4个象限）的实验数据合并统计，对每1个循环各剂量组和对照组的结果进行比较分析。逃避潜伏期、上台前游泳路程、平台象限活动时间占总时间百分比、平台象限活动路程占总距离百分比、站台穿越次数属计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值50）的资料应用秩和检验。结果判定：在试验前两组记忆商均衡的前提下，试食后试食组的记忆商高于对照组，且差异有显著性，同时试食组试验后的记忆商高于其试验前的记忆商，且差异有显著性，可以判定该受试样品具有辅助改善记忆功能的作用。2.8 注意事项2.8.1 心理测验必须由受过训练的人员进行，否则影响试验结果。2.8.2 测试应当在一个安静的房间内进行。除受试者和主试者外，尽量避免有其它人在场。2.8.3 本量表内有三项和视觉有关的分测验，室内光线必须保证能看得清楚刺激图片。尽量排除因听力或视力不佳而影响记忆成绩。2.8.4 必须注意受试者受测时的精神状态，测验需在受试者情绪正常、不反对接受测试、注意力比较集中的情况下进行。受试者是否疲倦，注意力是否集中，是否配合、对测试是否紧张，是否有信心等均需记录在记录纸的首页上。2.8.5 同一受试者的测试要求一次做完。在用年龄量表分比较分测验成绩时，必须注意不同分测验是否在相同的精神状态下进行的。2.8.6 填写记录必须认真，字迹清楚。填写时注意以下几点：2.8.6.1 首页必须逐项填写，即受试者的姓名、性别和年龄，以及检查日期和时间。2.8.6.2 填写文化程度和职业作为了解受试者接受测验的背景材料。2.8.6.3 填写健康状况或诊断，前一夜睡眠情况或当时疲倦与否。2.8.6.4 对表明当时精神状况的各项，如配合程度、注意力、紧张状态、信心等也要填写清楚。2.8.6.5 除记录受试者记忆回答的正误外，应当记下错误回答的具体内容，以备分析研究用。2.8.6.6 是否应用记忆方法以及使用什么方法对记忆研究是有益的。在用此量表进行研究时应当记录此项。2.8.6.7 各项分测验成绩的原始分记入首页总结表中，要先经复查，复查无误方可填入原始分项内。辅助改善记忆功能评价方法修订说明一、承担单位广东省疾病预防控制中心为主要承担单位，本次任务来源于国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司的委托，对保健食品检验与评价技术规范（2003年版）中“辅助改善记忆功能评价程序和检验方法”进行修订。二、主要工作过程国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司于2009年4月召开了“保健食品功能评方法及有关程序修订”课题协作组工作会议，参会的有中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、广东省疾病预防控制中心、上海市疾病预防与控制中心、北京市疾病预防控制中心、四川大学华西公共卫生学院、中国中医研究院东直门医院和国家食品药品监督管理局保健食品审评中心的专家近15人，会上对“保健食品功能评价方法及有关程序修订”修订的原则和框架作了充分的讨论，又分别征求了相关专家对修订内容的意见。为了做好本次检验方法的修订工作，广东省疾病预防控制中心成立了“辅助改善记忆功能评价程序和检验方法”修订的起草工作小组，经查阅国内外相关资料，参考国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司召开的工作会议的精神，咨询有关专家和实验室同行的意见和建议，形成了本次任务的工作方案。总体路是：要提高检验方法的科学性、准确性、客观性和有效性，提高保健食品功能的技术标准；修订的方法要与当前国内外研究的理论基础相一致。本次修订将动物实验分为被动行为试验和主动行为试验两类，主动行为试验中新增Morris水迷宫试验项目；强调被动和主动行为试验的组合，在此基础上提出相应的判定标准。经过起草工作小组开展的大量条件探索和实验方法研究，对各种实验结果进行了比较和取舍，形成了修订初稿后，起草工作小组召开了多次专家研讨会，征求专家意见，对初稿进行了反复修改，形成征求意见稿。方法验证工作由广东省疾病预防控制中心、湖南省疾病预防控制中心、湖北省疾病预防控制中心、福建省疾病预防控制中心分别进行验证试验。在此基础上，征集、整理和归纳相关意见和建议。国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司于2010年8月再次召开了“保健食品功能评价方法及有关程序修订”课题协作组工作会议，参会的有中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、广东省疾病预防控制中心、上海市疾病预防与控制中心、北京市疾病预防控制中心、四川大学华西公共卫生学院、中国中医研究院西苑医院的专家近10人，会上针对验证过程中存在的技术问题及可操作性作了充分讨论并提出修改意见，起草工作小组根据会议精神对修订方案做了进一步完善，并邀请北京市疾病预防控制中心进行部分项目的验证，综合了方法验证单位的意见后形成了征求意见稿。2011年7月22日国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司在北京宣武门商务酒店召开了“保健食品功能评价方法及有关程序修订”定稿专家研讨会，参会的有中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、北京大学、广东省疾病预防控制中心、北京市疾病预防控制中心、上海市疾病预防控制中心、中国中药研究院、中国中医研究院西苑医院、北京医院、国家食品药品监督管理局保健食品审评中心的专家14人，会上对修订后的“辅助改善记忆功能评价程序和检验方法”的科学性、客观性和可操作性给予肯定，并提出修改意见，对征求意见稿做了进一步完善。三、编制原则1、总原则，提高保健食品“辅助改善记忆功能评价程序和检验方法”的科学性、准确性和规范性，适应当前法规对加强保健食品监管的要求。2、修订内容要符合当前“辅助改善记忆功能评价检验方法”的基础理论，既考虑原规范合理的方法，又要提高保健食品功能检验的技术标准，选择保留、改良或新增加的指标要在国内外已经广泛应用并得到普遍的认可，可以反映保健食品的辅助改善记忆的功能作用。3、在撰写过程中，注意科学性、合理性、和适用性。四、确定相关技术内容及新旧方法的对比编号原方法现方法修订理由序号内容序号内容1五辅助改善记忆功能检验方法 有助于改善记忆功能检验方法修改标题使方法的适用性更加明确21.1跳台实验1.1被动行为试验-跳台实验将跳台实验归类为被动行为试验31.1.2 仪器与试剂1.1.2增加“最好采用附带隔音箱和视频分析系统的仪器”带隔音箱和视频分析系统的仪器相对独立，不易受外环境影响，视频分析系统的实验结果也更客观准确。41.1.3.3.1受试样品对正常小鼠记忆的影响1.1.3.3.1要求电流控制在0.3-0.4mA，明确记忆获得和记忆再现的过程。电流对实验动物的反应有较大影响，需加以要求。明确记忆获得和记忆再现的过程以便实验结果的判定。51.1.4数据处理及结果判定1.1.4错误次数为计量资料，用方差分析进行统计。若受试样品组与对照组比较，潜伏期明显延长，错误次数或跳下平台的动物数明显少于对照组，且差异有显著性，可判定为该项指标阳性。以上三项指标中，任一阶段（记忆获得和记忆再现）的任一项指标阳性，均可判定该项实验阳性。将错误次数划分为计量资料，对结果判定内容进行细化，明确阳性判定的标准61.1.5.7 增加实验中应及时清除铜栅上的粪便等杂物，以免影响刺激鼠的电流强度。增加实验注意事项71.2 避暗法1.2被动行为试验-避暗实验将避暗实验归类为被动行为试验81.2.2 仪器和试剂1.2.2要求避暗仪电流控制在0.3-0.4mA，增加“最好采用附带隔音箱和视频分析系统的仪器” 电流对实验动物的反应有较大影响，需加以要求。带隔音箱和视频分析系统的仪器相对独立，不易受外环境影响，视频分析系统的实验结果也更客观准确。91.2.3.3.1 受试样品对正常小鼠记忆的影响1.2.3.3.1 明确记忆获得和记忆再现的过程。以便实验结果的判定101.2.4 数据处理及结果判定1.2.45min内进入暗室的次数为计量资料，用方差分析进行统计若受试样品组小鼠进入暗室的潜伏期明显长于对照组，5min内进入暗室的错误次数或5min 内进入暗室的动物数少于对照组，且差异有显著性，可判定为该项指标阳性。以上三项指标中任一阶段（记忆获得和记忆再现）的任一项指标阳性，均可判定该项实验阳性。将5min内进入暗室的次数划分为计量资料，对结果判定内容进行细化，明确阳性判定的标准111.3 穿梭箱实验1.3 主动行为试验-穿梭箱实验将穿梭箱实验归类为主动行为试验121.3.1原理1.3.1 原理：以光(或声)、电击为联合刺激，使实验动物由被动回避建立主动的条件反射。记录此条件反射建立过程中的主