2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件冯惠坚

尿素分子的立体结构水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus )耐高温的Taq DNA聚合酶美国微生物学科布鲁克（T.Brock)1966年发现耐热细菌在微生物学中，将允许特定种类的微生在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。物生长的培养基。 在本课题提供的在本课题提供的选择培养基选择培养基的配方中，尿的配方中，尿素是培养基中的素是培养基中的唯一氮源唯一氮源，因此，原则上只有，因此，原则上只有能够利用尿素能够利用尿素的微生物才能够生长。的微生物才能够生长。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落培养后再选择菌落数在数在3030300300的平板进行计数的平板进行计数。常用方法常用方法:稀释涂布平板法稀释涂布平板法第一位同学第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。组，因此结果不具有说服力。第二位同学第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布考虑到设置重复组的问题，涂布了了3 3个平板，但是，其中个平板，但是，其中1 1个平板的计数结果与另个平板的计数结果与另2 2个相差太远，说明在操个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3 3个平板的计数值用来求个平板的计数值用来求平均值。这个实例启示学生，平均值。这个实例启示学生，在设计实验时，一定要涂布至少在设计实验时，一定要涂布至少3 3个平板，个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。需要重新实验。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。是可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。前都要灭菌。实验名称实验名称：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为培养基可以作为对照对照，用来判断选择培养基是否，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。起到了选择作用。（二）、制备培养基：（二）、制备培养基：准备准备牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基和和制备以尿素为制备以尿素为唯一氮源的唯一氮源的选择培养基选择培养基。 资料资料 二二. .样品的稀释样品的稀释 稀释倍数稀释倍数目的目的细菌细菌10104 4、10105 5、10106 6放线菌放线菌10103 3、10104 4、10105 5真菌真菌10102 2、10103 3、10104 4 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。 只要能够在选择培养基上生长的微生物是否就是只要能够在选择培养基上生长的微生物是否就是所需要的微生物？所需要的微生物？答：答：不一定，不一定，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在选择培养基上生长的微生物不一物生长繁殖，因此能够在选择培养基上生长的微生物不一定是所需要的微生物，定是所需要的微生物，还需要进一步的验证还需要进一步的验证(鉴定鉴定)。（0909，安徽）下列是关于，安徽）下列是关于“检测土壤中细菌总数检测土壤中细菌总数”实验操作实验操作的叙述，其中错误的是的叙述，其中错误的是A.A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板倒平板B.B.取取10104 4、10105 5 、10106 6倍的土壤稀释液和无菌水各倍的土壤稀释液和无菌水各0.1ml0.1ml，分别，分别涂布于各组平板上涂布于各组平板上C C将实验组和对照组平板倒置，将实验组和对照组平板倒置，37370 0C C恒温培养恒温培养24-4824-48小时小时D D确定对照组无菌后，选择菌落数在确定对照组无菌后，选择菌落数在300300以上的实验组平板以上的实验组平板进行计数进行计数D