【doc】金线莲体外抗HBV表达的初步研究

金线莲体外抗HBV表达的初步研究StraitPharmaceuticalJournalVol15No.52003柏酮有平喘止咳作用;桉叶油素,香荆芥酚,百里香酚,a一蒎烯等有抑菌,抗病毒作用;其它成分可作为食用香料和增香剂.因此,具有重要的开发价值.参考文献(13姚新生.天然药物化学M,北京:人民卫生出版社,2002,246.(23国家药典委员会编.中国药典S,北京:人民卫生出版社,1990,(附录)48.33周世良.石荠苎属的遗传分化与种问关系分析J,植物分类学报,I999,37(1):1O19.(47张少艾,徐炳声.长江三角洲石荠苎属植物的精油成分及其与系统发育的关系J,云南植物研究,1989,11(2)tl87192.C53林文群,张清其,陈祖棋.石荠苎挥发油的含量及其化学成分研究J,福建师范大学,1998,14(2):7074.63常杰,葛滢,陆大根.杭州石荠苎的种群动态和生存分析J.生物多样性研究进展,1995,2O8214.C73林正奎,华映芳.石荠苎精油化学成分研究J,植物,1989,3l(4):32O322.83福建植物志编辑委员会编.福建植物志(四)M.福州:科学技术出版社,1989,558559.金线莲体外抗HBV表达的初步研究郑玲,张荔荔,孙墉(福州市传染病医院福州350025)摘要:目的观察金线莲体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用.方法以舍有HBV基因的2.2.15细胞株为研究对象,观察金线莲不同浓度,作用不同时间对细胞培养上清中HBsAg和HBeAg水平的影响及其细胞毒性,并同无环鸟苷相比较,综合评价金线莲体外抗HBV效果.结果当金线莲浓度150mg-mL时,对2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg无影响,当浓度200rng?mL时,HBsAg和HBeAg的表达均受抑制.在同一浓度和同一作用的时阁下,都表现为对HBsAg的抑制高于对HBeAg的抑制无环鸟苷浓度为lmg?mL时,对HBsAg和HBeAg的分泌也有抑制作用,在同一浓度同一作用时间下,也表现为对HBsAg的抑制高于对HBeAg的抑制.结论金线莲可抑制2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg,其抗HBV活性的有效成分和作用机理尚不明确.关键词:金线莲;药理作用乙型肝类;HBV中国分类号:R931.71;R967文献标识码:A文章编号:10063765(2003)05006503PreIiminaryStudyoftheInhibitionHBVbyAnOectOchiIusFormosanus.invitroZHENGLingZHANLiliSUNYuan(FuzhouInfectiousDiseasesHospital,Fuzhou350025China)ABSTRACT:OBJECTIVETOobservetheaffectionofinhibitionofAnoectochilusformosanus.onHBVinvitro.METHODSUsing2.2.15ceilswhichcontainHBVgenome,toobservetheaffectionanditstoxicityofAnoectochilusformosanusonHBsAgandHBeAgleversinthesupercultivationalfluid,atdifferentconcentrationsandtimesandcomparedwithAciclovir.RESULTSAnoectochilusformosanusdosenotinhibitetheleversofHBsAgandHBeAgsecrededby2.2.15cellsatconcentration150mg?mIbutexpressionofHBsAgandHBeAgwasinhibitedwhenAnoectochilusformosanus200mg?mL_.TheaffectionofAnoectochilusformosanustoinhibiteHBsAgwasmorethantoHBeAgatthesameconcentrationandtime.AcicloviralsomayinhibitesexpressionofHBsAgandHBeAgatconcentrationlmg?mI_.,andalsotheinhibitionofHBsAgwasmorethanHBeAg.CONCLUSIONAnoectochilusformosanusmayinhibiteexpressionofHBsAgandHBeAgin2.2.15cells,anditsantiHBVactivecompositionandmechanismswasunclear.KEYWORDS:Anoectochilusormosanus/pharmacologicalaction.HBV.金线莲又名金线兰,乌人参,我省民间常用于治疗慢性乙型肝炎,而文献上罕见报道.本研究以2.2.15细胞为模型.对金线莲的体外抗HBV活性作者简介:郑玲,士,1991年毕业于福建医学院.主治医师从事传染病临床工作l2年联系电话:O59l一37l3355进行了观察.1材料与方法1.1金线莲由我院药厂制备,系榨取金线莲鲜汁,经过滤除菌消毒后备用,生药浓度为2g/ml.无环鸟苷由汕头市八达制药有限公司提供.?65?海峡药学2003年第15卷第5期1.2乙肝诊断试剂盒(EIISA法)物药业有限公司提供.由北京万泰生裹1金线莲对2?2?15细胞分泌HBsAg,HBeAg的抑制1.32.2.15细胞由北京斯崇文教授赠送,能向上清中稳定地排泌HBsAg,HBeAg和HBVDNA,培养液为含15胎牛血清的RPMI1640培养基.1.42.L2.15细胞分泌HBsAg,HBeAg和HBVDNA功能测定将细胞接种于25mL培养瓶,浓度为110个/mI,加入含15胎牛血清的1640培养液,置37V,5C0.孵箱中培养,每2天更换1次培养液并收集上清,连续2周,冷藏待检.1.5药物的细胞毒性试验将细胞接种于96孔板,浓度为110.个?mI,zoo.1/L,培养24h待生成单层细胞后弃去上清,换含有不同药物浓度的培养基,并设空白药孔对照,继续培养,每3d换1次培养液,9d后采用Mosmnn等建立的MTT比色分析法检测细胞存活率,细胞存活率:(上药孔细胞吸光度值对照孔细胞吸光度值)100.1.6药物的抗HBV活性试验2.2.15细胞消化稀释成110个?mL-1悬液,接种于24孔板,每孔lmI,培养24h使生成单层细胞后弃去上清,观察细胞生长良好,换含不同浓度金线莲及无环鸟苷的培养液,每个浓度设3个复孔,同时设不含药物的对照孔,每3d更换1次培养液并留取上清冷藏待检.金线莲的药物浓度低于对细胞无毒性作用的最大药物浓度,取4个浓度梯度,分别为100mg?mI_.,150mg?mI一,200mg?mI一,250mg?mI一,无环鸟苷的药物浓度参考文献n分500g及1,000g.1.7HBsAg,HBeAg和HBVDNA检测HBsAg和HBeAg用EIISA法检测,HBVDNA以荧光定量PCR法检则,均按说明书要求操作.2结果2.12.2.15细胞分泌HBsAg,HBeAg和HBVDNA的功能经EIISA法及荧光定量PCR法检测,2.2.15细胞传代后第四天可同时检测到HBsAg,HBeAg和HBVDNA,第八天时达高峰水平,HBVDNA定量3.214.810.copy/mI,并持续到2周以后,重复进行3次,结果一致.2.2金线莲对2.2.15细胞的毒性作用和抗HBV活性金线莲对2.2.15细胞无明显毒性作用的最高药物浓度和使50细胞死亡的药物浓度分别为300mg?mI和400mg?mL_.,不同药物浓度的抗HBV活性(见表1).?66.表1显示,金线莲浓度150mg?mI,2.2.15细胞仍分泌两种乙肝病毒抗原.当浓度200mg?mI时,HBsAg和HBeAg的表达均受抑制.在同一浓度和同一作用时间下,都表现为对HBsAg的抑制高于对HBeAg的抑制.2.3无环鸟苷对2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制无环鸟苷用药剂量参考文献分500g?mI-1和1,000g?mI叫两个剂量组,不同药物浓度的抗HBV活性(见表2)n裹2无环鸟苷对2.2.15细胞分泌HBsAg,HBeAg的抑制表2显示:无环鸟苷浓度为lmg?mI时,HBsAg和HBeAg的分泌均有抑制作用,在同一浓度同一作用时间下,也表现为对HBsAg的抑制高于对HBeAg的抑制.可见,金线莲及无环鸟苷对2.2.15细胞分泌HBsAg及HBeAg均有抑制作用,在各自同一浓度及同一时间下都表现出对HBsAg相对较强的抑制作用.3讨论2.2.15细胞株系转染HBV(adw型)基因的人肝肿瘤细胞株(HepG:),体外培养能持续表达HBsAg,HBeAg及病毒颗粒,是常用筛选抗HBV药物的细胞模型.细胞接种后414d间HBsAg及HBeAg的分泌较为稳定,我们观察了药物作用第三九天的抗HBV效果.结果表明,金线莲对2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg有显着抑制作用,随着作用时间的延长和药物浓度的升高,抑制作用逐渐增强,证实金线莲在体外有对抗HBV活性,但其作用机理和抗HBV的有效成分尚未明确.金线莲富含牛磺酸等1O多种氨基酸,还含有无机元素及糖类.具有渖热解毒凉血保肝等作用,在民间素有神药药王之美称.由于其化学成StraitPharmaceuticalJournalVol15No.52003份较为复杂,提纯和探讨其抗HBV活性的有效成份和作用机理将有重要意义.参考文tC13彭齐荣,等.肝毒清对HBV转染细胞表达功能的抑制J,中西医结合肝病杂志,1995,5(2):2122.C23赖应辉.等.金线莲中无机元素及糖类分析CJ,中药材,1997,2O(2):84.C33吴坤林,等.金线莲快繁工厂化生产中间试验CJ.中药材.i997,20(12):595.(43丁雪梅,等.金线莲与内生真菌共生培养体系建立(J,中国药学杂志.2000.25(2):81.福建牡蛎软体的化学成份研究.楼永明,朱洪(1.福建省药品检验所福州350001;2.江苏省无锡药品检验所无锡214021)摘要:目的对福建牡蛎(ostresrivularisGould)所舍之无机元素,有毒物质及氨基酸等,进行研究捡测.方法用原子吸收分光光度法,等离子竞谱法及氨基酸分析仪进行分析.结果本品分别含有17种游离氨基酸与复合氨基酸;并含有铁,镁等宏量元素与辞,锰及铜等微量元素,砷,锯含量,1,于2ppm而汞则?1,于lppb.结论本品含有丰富的氨基酸及有益于人体健康的微量元素与宏量元素.关键词:福建牡蛎;软体部分;微量无素;氨基酸;有毒物质中圈分类号:R282.76文献标识码:A文章编号:10063765(2003)05-0067-02StudiesofChemicalComponentsonSoftPartofFuJianOstresLOUYongming,ZHUHong.(1.FujianprovincialDruginstituteforcontrol,Fzhou350001;2?JiangsuprovincialWuXiInstituteDrugcontrol214021,China).ABSTRACT:OBJECTIVEToreseachtheetementsandaminoacidsonsoftpartinFujianOstres.METHODSA.A.Smethod:ICPmethodandaminoacidsanalysismethosdRESULTS12elements,3toxicesand17aminoasidswredetected.CONCLUSIONThesubstanceswhichweredetectedarerichinnutritions,containsmorethanthreemicroelementsandsevevaminnoalidstheywereessentialofhumanbody.KEYWORDS:OstresrivualarisGouldSoftpart;Microelement;Aminnoalids牡蛎收载于本草纲目,并谓其贝壳及其贝壳内之软件,皆供药用.,历版中国药典对牡蛎皆有收载,本品为牡蛎科动物长牡蛎,近江牡蛎及大连湾牡蛎.福建地处东南沿南,滩涂甚多盛产牡蛎,但就其品种而言,则大连湾牡蛎产于北方,而福建所产的牡蛎几乎皆为近江牡蛎(0stresrivualarisGould),分布于福鼎至厦门及其以南沿海地区,但盛产于闽江三角洲,福清,长乐及连江一带,尤以连江马鼻镇,最为着名,但未见研究报道.至于鲜活长牡蛎在福建甚为少见.Kumapawa.曾对日本牡蛎JapaneseOyster(CrassosTreagigas)即长牡蛎的软件部份进行纯化作者筒介;楼永明,男,32岁,1993年毕业于沈阳药科大学药荆分析专业.职称:主管药师.从事药品检验.联系电话;0591-7622201与提取.近江牡蛎(OstresrivulalrisGould)的软件部分经药理试验表明,具有增强机体免疫功能的作用,对抗辐射,抗衰老,抗肿瘤具有一定的疗效.本草纲目则认为其(牡蛎)肉味甚美,食之,令人细肌肤,美颜色,为海族之最可贵者也.日本有其制剂20余种上市,而我国海王生物公司的金牡蛎曾风行一时,使该公司发财致富,但自工艺曝光后,已逐渐无服用者.1仪器与试药1.1仪器P,E公司3030型原子吸收分光光度计;AABG;室温25,湿度RH=60.根据待测元素选择适合波长及狭缝,用标准曲线法,参照中国药典2000年版附录24页(IVD)原子吸收分光光法测试.日本国岛津公司100型感应耦合等离子体发射光谱仪:扫描波长:120820mm,分辨率:?67?