实验室常用试剂配制

爛电常规试剂配制方法TabaRa1 M TrisHCI(pH了4 了.6, 8.0组配制重-i配制方法实验室常用试剂、缓冲液的配制方法1 MTfis-HCI1 L1称121.1 gTri遷于1號林中*2加入帥孙Q ml时去离子加充佥攪拌洱解*3按下春量加入浓盐酸调节所需要的pHl*州值5SHC*7 4妁70 ml7680约42 ml4将沼液定容至1 L.5髙温高压灭国后，室启保砰*注怠：应槻腳冷却至室温后再调定屮直因为“3液的pH備阴温度的变化差异很丸温 虞每升高Ft,浴液的pHS丸约隆低0耐亍单位。1.5MTris-HCI组碗度1.5 MTfis-HCI(pHS.8)|配制壷1 L-配制方法1.称131 7 gTrisf 1 赫中2 iaASDO mlM去韶于水，充佥橙拌洱解.3用潘盐愛调节时嵋至8 &4弭潜版定容至1 L。6髙盘高压灭国厉，塞温保春*注窝：应粳洛液冷却至窒温后再调定PHH，因为I潴液肘屮值碗温度肘变化差异很大，& 虞每升高inc,洛掖的pH值丸均降低D旳亍单便。10XTE Buffer组输虑(pH7A 76 8.0)配制童11配制肓法100 mM Tris HCI 10 mM EDTA1 Lt量取下列沼顺.置于1席杯中。1 MTriaHCl Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0100 ml500 mMEDTA (pH6 0)20 ml2向烧杯中如入妁肥。ml的去离子水 均匀泡音。 3將落液定容呈1尿，高温高压灭茵。4.室温保存*3 M醋酸钠（PH5.2）1组份浓度3 M歸酸钠厂|配制童100 ml|配制方法1.球圖建用g NaOAc * 3H2Ofl于1皿-200 ml烧杯中.加入妁4Q ml的击离子水搅拌溶解2加入冰醋賀调节pH值至5.23. 加去离于水将溶酒足容至100 mln4. 高遷高压灭葡后室溫懈存*PBS Buffer组份浓度137 mM NaCI, 2.7 mM KCI, 10 mM NaiHPCU, 2 mM KHiPOUU* 1O.UUO12%400-7.0001 5o200-3,0002 0o50 - 2.000Agarose 凝胶配制方法Agarose 凝胶配制方法2向篙心管中加入约4 ml的DEPMh理水后，充分搅拌溶解。3加入5別的甘油（Glycerol）后，充分混匀。4用DEPC处理水定容至10 ml后，室温保存。20 x SSC核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法口组信浓度T配制重_配制血3 0 M NaCI. 0 3 M1 Li ear列財h盍于l蟻杯中*NaCl175.3 g柠牌醐内2H=O80 S g2向疑杯中加7800 mlW去离手水，充井搅拌沼解。3簡加14 M HCI,调节pH值至7 0JS，加去离干水将落液定容至1 L* 咼思咼主氏菌陌畫温保许*20 XSSPE Buffer组份浓度3.0 M NaCI. C.2 M NaHtPO*. 0.C2 M EDTAj配制室1L配制启法1 一称量下列试利 置于1備杯中“MaCII7&3gNaHiPCM HiO276gNajEDTA 2HiO74g2向烧杯中iHASOOml的去离于木，充井攬拌涪解。 3加NaOHifl节叩鶴至M 1约盯m啲和口 NmOHh 4加去韶于朮將帶液定容至1 L。5鬲层高压衣茵后.宜温棵存50x Denhardtsig液1% (WA/) Ficoll4OO1% (WA/) Polyvi nylpy nol idone1% (WV BSA配制量口配制知i500 ml1.称量下列试剂，蚩于別0 m删中。Ficoll 4005SPolyvinyJpyfnolidone5 gBSA5g2加去离子术的4DD ml,充分憧拌落解3加去詔子术韩洱液定容至MO mL4用0胡prr诞腰过躺后.曲装咸曲檢25 eL5 -20C保殍0.5 M磷酸盐Buffer匚胡佶侬度0 5 M Na：HPOi配制量配制片法1称量134 g NaiHPO 7H：O置千1虎杯中。2加入妁创0 E的去离子水充分攪挥溶解。3加A85%的WPCu （浓璘酸）iO落液pH值至T聂A加去离子木定容至1 Lt&高泡高压灭茴后室禺保存Salmon DNA （鮭鱼精DNA）学份浓度:配制壘配制方法10 mg/ml Salmon DNA约 100 ml1称取蛙鱼精DNA 2產干500 ml烧杯中.加入纯200 ml的TE Buffer。2用磁力搅拌器室溫搅拌24、时，涪解厉加入4 m啲5 M NaCI,便其终液度为0M。 3用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。4回牧水相溶液后，便用17号皮下注射針头快遼吸打洛液约20次，以切断DNA.5加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。6离心回收DNA后，溶解干100 ml的去离千水中，测定裕液的ODzfl。7计算溶液的DNA浓度后，稀释DNAiS液至10 mg/ml。8煮沸1吩钟后，分装成小份（1 ml伤）。20C保存。9便用前在沸水浴中加热5分种后，迅速冰浴冷刼。DNA变性缓冲液组份浓度配腿配制厉法1.5MNaCI, 0.5 M NaOH1 L1 NaCI87.7 gNaOH20 g2-向烧杯中加入约800 ml的去离子水.充分搅拌溶解。 3加去离子水将溶液定容至1 L后.交温保存。预杂交液/杂交液组份浓度（DNA杂交用）6xSSC （或SSPE）5XDenhardts0 5% （W/V）SDS100 *g mlSalmon DNA口配制方法配制壘100 ml口配砺法1称量下列试齐J,置于200 m凝杯中。20xSSC （或SSPE）30 ml50 x Denhardts10 ml10% SDS5 ml10 mg ml Salmon DNA1 mldHaO54 ml2充分混匀后.使用0.45 -e滤膜滤去杂质后使用预杂交液/杂交液组份浓度6XSSC （或SSPE）（RNA杂交用）5X0.5% （W/V）Denhardts SDS100 g mlSalmon DNA50% （V/V）Formamide配制蛊 100 ml1称重下列试剂，置千200 m除杯中。20xSSC （或SSPE）30 ml50 x Denhardts10 ml10o SDS5 ml10 mg ml Salmon DNA1 mlFormamide50 mldHzO4 ml2充分混匀后，使用0 45二叩诞原虑去杂质后使用。膜转移缓冲液 (Western杂交用)组份浓度配制重:配制方法39 mM Glycine. 48 mM Tris. 0 037% (W/V) SDS. 20% (V/V)甲醇1 L1称量下列试剂，置千1 L烧杯中。Glycine2.9 gTris5 8gSDS0 37g2向烧杯中力D入约600 ml的去离千水，充分損拌裕解。3加去离手水将溶液定容至800 ml府，加入200 ml的甲醇。4室温保存。TBST Buffer(Western杂交膜清洗液)组份浓度20 mM Tns-HCI 150 mM NaCI 0 05% (V/V) Tween 20门配制壘1 L配制厉法1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中。NaCI8.8 g1 M Tris-HCI (pH8 O)20 ml2一向烧杯中力认约800 m啲去离千水，充分搅拌溶解。3加入0.5 ml Tween 20后充分混匀。4加去韶干水将溶液定容至1 L后.JC保存。封闭缓冲液 (Western杂交用)组份浓度5% (W/V)脱脂奶粉/TBST Buffer配制量100 ml配制方法1称量5 g胶脂奶粉加入到100 ml的TBT Buffer中，充分搅拌溶解。2 4C保存待用(本封用液应该观配观用)。1% (W/V)Tryptone0.5% (W/V)feast Extract1% (W/V)NaCI0.1 mg/mlAmpicillinLB/Amp培养基配制量配制方法实验室常用培养基的配制方法Ampicillin (100 mg/ml)份浓度 卡制量 卡制方法100 mg/ml Ampicillin50 ml1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中c2加入40 m灰茴水，充分混合溶解后，定容至50 ml.3用0 22呵过滤膜过滤除菌。4小份分装（1 m份）后，2（TC保存。IPTG份浓度24 mg/ml IPTG(24 mg/ml)nK制重50 ml书已制方法1称&12 g IPTG畫干50 ml离心管中。2加入40 m灰SI水，充分混合溶解后，定容至50 mb 3用0 22 pmiti膜过滤除茵。4小份分装（1mm）后，2（rc保存。X-Gal闘份浓度20 mg/ml X-Gal(20 mg/ml)r -配制墾50 ml配制方法1称fl 1 g X-Galffl于50 ml离心管中.2加入40mlDMF （二甲*甲滩胺）.充分混合溶解后.定容至50叽 3小份分装（1 ml/份）后20C避光保存。LB培养基组份浓度1o (W/V) Tryptone. 0.5o (W/V) Yeast Extract. 1% (W/V) NaC|配艇1 L:配制方法1 称取下列试剂.去于1 L烧杯中.Tryptone10gYeast Extract5 gNaCI10g2加入约800 ml的去癘子水.充分搅拌溶解. 3滴加5 N NaOH （约0 2 ml）.调节pH值至7.0。 4加去离子水将培界基定容至1 L.5.鳶温庚压灭苗后.4C保存I组份浓度1称取下列试齐b養干1 L烧杯中。10 g5g10 gTry pt oneYeast ExtractNaCI2力认约800 ml的去离干水，充分搅拌溶解。3滴加5 N NaOH （约0.2 ml）,训节p卜值至7.0。4加去离子水将培养基定容至1 L。5-高爲高压灭茵后，冷却至室温。6 加入 1 ml Ampicillin （100 mg/ml）后均匀混合。7. 4C保存。TB培养基:1绢份浓度1.2% (W.V)Tryptone2 4% (WV)Yeast Extract0.4% (V/V)Glycerol17 mMKH2PO472 mMK2HPO41 配帯麟酸盐缓冲液(0 17MKH：PO“ 0 72 M KxHPO*) 100 mb溶解2 31 g KH：PO4D12 54 g KxHPO.干90 nM的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100 ml,咼很咼压灭茵2称取下列试剂，蓋干1 L烧杯中。Tryptone12gYeast Extract24 gGlycerol4 ml3加入约800 ml的去离千水，充分搅拌得解。4加去离手水将垢养基定容至1 L后，高品高匝灭茵。5待溶液冷却至60C以下时，加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。6 4C保存。TB/Amp培养基碍份浓度1.2% (WV)Tryptone2.4% (WV)Yeast Extract0.4% (VV)Glycerol17 mMKH2PO472 mMK2HPO40.1 mg mlAmpidllln配制壘配制方法1 配制琐酸盐缓冲液(0.17MKH2P6 0.72 M K2HPO4) 100 ml。溶解2.31 gKH2PO4和12.54gK2HPO4于90ml的去癘子水中.搅拌溶解后，加去藹子水定容至 100 ml.高温高压灭茵.2称取下列试剂.51 L烧杯中，Try pt one Yeast Extract Glyceroli2g24 g4 ml3.加入约800 ml的去离子水.充分攪拌溶解4切古离子水将培养甜定客至1 L后，离迟高压灭苗5.待溶液冷却至&TC以下时.加入100ml的上述灭菌阀谡盐缓冲液和1 ml的Ampicilin (1O0mgArl)J 6均匀混合后4 C保存SOC培养基组份浓度2% (WAX)Tryptone0 5% (W/V)Yeast Extract0.05o (W/V)Nad2 5mMKCI10 mMMgCh20 mMn配制益匸配制方法100 ml1.配制1 M葡萄櫃溶液。将18 g葡萄塘溶干90 ml去离干水中，充分潘解后定容至100 ml,用0 22呵滤膜过淹除茵。2向100 ml SOB培养基中加入除菌的1忖葡萄糖2 ml,均匀混合。3 4C保存。SOB培养基匚组份浓度2XYT培养基6b x brothNZM培养基配制重二配制方法2% (WV)Tryptone0 5% (WV)Yeast Extract0 05% (WV)NaCl2.5 mMKCI10mMMgCh1 L1配制250 mMKC榕液。在90 m啲去离手水中溶解1.86 g KCI后，定容至100 ml。2配制2 M MgCI：裕液。在90 ml去离千水中溶解19gMgCIJn，定容至100 ml,高温高圧灭茵。3称取下列试剂，置干1 L烧杯中。Tryptone20gYeast Extract5gNaCl0.5g4加入约800 m啲去离千水，充分搅拌溶解。5鱼取10 nil 250rnM KCI 加入到烧杯中。6滴加5NNaOHS液（约0 2 ml）,调节pH值至7 0。7.加入去离手水将培养基定容至1 L。3咼温咼压灭茵后，4 C保存。9便用前加入5 m灰茴的2 M MgCI活液。组份浓度1.6% (W/V) Tryptone. 1o (W/V) Yeast Extract. 0.5% (W/V) NaCl配制量T配制方法1 Tryptone16gYeast Extract10gNaCl5g2加入约800 m啲去JR子水.充分搅枠溶解3. 滴加5 N NaOH.调节pH值至7.0.4. 加去离子水将培界星定容至1 L.5高温高压灭菌后.4C保存.组份浓度2-i(w/v)Tryptone. 0.5vo (W/V) Yeast Extract, 0.5% (W/V) MgS6 7HQ一配制壘1 称取下列试剂.应于1 L烧杯中。Tryptone20 gYeast Extract5 gMgSOu 7H2O5g2加入约800 ml的去JR子水.充分搅拌溶解.3.滴如N KOH.调节pH值至7.5.4加去离子水将培界星定容至1 L.5高温高压灭酉后，4 C保存.1% (WV)NZK0.5o (WV)NaCl02% (WV)MgSOa 7H2Oi配制方法NZM培养基除不含丫的st Extract （酵母提取物）外.其他成份与NZYM培养基相同。配制重配制方法称取下列试剂，置于1 L烧杯中。Yeast Extract5gCasamino Acid1 gNZ肢10gNaCI5gMgSOa 7H2O2g0.5% (W/V)Yeast Extract01% (W/V)Casamino Add1% (W.V)NZ胺0 5% (W/V)NaCI0 2o (W/V)MgSOa 7HQNZYM培养基除不含Casamino Acid （酪蛋白虱基酸）外，其他成份与NZCYM培养務相同。一般固体培养基的配制方法1按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭茴前，加入下列试剂中的一种。2加入约800 ml的去离干水，充分搅拌溶解。3 滴加5NNaOH （纯0 2 ml）,询节pHlS至7 0。4加去离干水将培养基定容至1 L。5高温高压灭茵后.4C保存。NZYM培养基绢份浓度0.5% (W/V)Yeast Extract1% (W/V)NZ胺0 5% (W/V)NaCI0.2% (W/V)MgSOa 7H2O配制方法配制Agar （琼脂；镉制平板用）15 gtAgar （琼脂：配制顶层琼脂用）7gLAgarose （琼脂糖；铺制平板用）i5gLAgarose （琼脂检 配制顶层琼脂用） 7gL2高温高压灭菌后，戴上手套取岀墙养基，摇动容器便琼脂或琼脂糖充分艮匀（此时培养基温 度很高，加C烫伤）。3徇壇养基冷却至50-60-C时，加入苑不稳定物质（如抗生素等），捲动容器充分混匀。4侧制平板（30-35 ml培养基/90 mm塔养皿人LB/Amp/X-Gal/IPTG 平板培养基组份浓度1% (WV) 0 5% (W V)1% (W V)0 1 mg ml 0 024 mg rnl0 04 mg ml 1 5% (W V)Trypto neYeast Extract NaCIAmpidlli n IPTGX-GalAgar配制星1L；配制方法1 Tryptone10gYeast Extract5gNaCI10g2加入约800 ml的去离干水，充分搅拌溶解。3滴加5 N NaOH （约0 2 ml）,调节pH值至7 0。4加去离千水将培养基定容至1L后，力叭15 g Agar。5高溫高压灭茵后，冷却至60C左右。6 JQA1 ml Ampicillin （100 mg/ml） 1 ml IPTG （24 mg/ml）s 2 ml X-Gal （20 mg/ml）盾均 匀混合。8. 49避光保存。TB/Amp/X-Gal/IPTG 组份浓度 平板培养基12% (W V) 2 4?o (W V) 0 4% (VV)17 mM72 mM0.1 mgml0.024 mg ml0.04 mg ml1.5% (WV)T ryptone Yeast Extract Glycerol KH2PO4 K2HPO4 Ampicilli n IPTG X-Gal Agar配制靈配制方法1 配制磷酸盐缓沖液(0 17MKH：P0“ 0 72 M K2HPOJ 100 mk落解23 g KKPO4012.54 g KxHPCh干90 ml的去离子水中，搅拌浴解乐 加去离千水定容至100 mb高温高压灭茴。2 TryptoneYeast ExtractGlycerol12g24 g4 ml3加入约800 m啲去离千水，充分搅拌涪解。4加去离千水将培养基定容至1 US，加人15 g Agar。5高温高压灭茴后，冷却至60C左右。6 加入 100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液.1 ml Ampicillin (100 mg/ml)s 1 ml IPTG (24 mg/ml)s2 ml X-Gal (20 mg/ml)后均匀混合。8 4C避光保存。抗生素的贮存溶液及其工作浓度抗生素工作浓度卡那霍素链素四环素耗浓度50 mg. ml （溶于水）50 mg ml （溶于水）34 mg ml （溶于乙ft?）10 mg, ml （溶于水）10 mg ml （溶于水）5 mg ml （溶于乙醉）保存条件20 C2crc20C严紧型质粒20 ngzml20 町 ml25 pg ml10 ng ml10 pg ml10 ml松弛型质粒60 Lig m：60 pg ml170 pg ml50 pg ml50 ng ml50 pg mlh以水为浴兀的统生麦贮尋注S灣过0.22曲釜过谑庫着以乙諄为泻穴的上主寿石孩无级倉苕贮理生京洱注均2说冬于不透比的冲菱宅. 匚豪赛孑卷卫薛走巧拮扶茫口苏棗敦性苦的泾艺岂悄号不台豪左刃W浮荃7CLBg?S5SDS-PAGE浓缩胶（5% Acrylamide）配方表各种组份名称HX30% Acrylamide1.0MTris-HCI （pH6.8） 10% SDS10%过磴酸钱TEMED1 ml7 3 110 1 1 o o o a a a a a各种凝胶体积所对应的各种组份的取样2 ml3 ml4 ml5 ml6 ml140.330.250.020.020.0028 ml10 ml2127344.15 5680.50.670.831.01.31.70.380.50.630.751.01.250 030 040050.060 08010.030.040050.060.080.10.0030.0040.0050.0060.0080.01抗生素的贮存溶液及其工作浓度抗生素上存液和工作浓度浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒aww 素50 mg. ml （溶于水）-20*020 pg. ml60 pg ml50 mg, ml （溶于水）-204C20 yginl60 pg ml氯越素34 mg ml （溶于乙ft?）-20*025 pg ml170 pg ml卡那雷索10 mg ml （溶于水）2CTC10 pg ml50 pg ml10 mg ml （溶于水）-20*C10pg/ml50 jig ml四环素归5 mg ml （涪于乙醉）20*C10 pg ml50 pg mli次水为浴列的抵生聂上包色這过0.22 um及巻经戈篡兰以乙8?为浴込的址主JS溶復无狙魁M竺理听有扰主聂溥浪均2!艮辛于不遏尢容卷= *1点冬手楚产泰佛捋扌巴E亦JS龙性若的遵乞宣使=?不含匡萤的熔戸羡SDS-PAGE浓缩胶（5% Acrylamide）配方表各种组份名称各种凝胶体积所对应的各种组份的取样1 ml2 ml3 ml4 ml5 ml6 ml8 ml10 mlH?O30% Acrylamide1.0MTris-HCI （pH6.8） 10% SDS10%过硫酸铁TEMED0 681.4210.170.330513658a a a a2 2502028 a a a a0 38050630.751.01 250 030 040050060.08010030.040050.060.08010 0030 00400050 0060.0080012734415.5680 670831.01.31.7PAGE凝胶配方表（核酸电泳用）苦种融肢体积所对应的昔种组悅的申样5 ml10 ml15 ml20 ml25 mi30 ml40 ml50 ml6% GtHzO265.37.910.6也215.921.226 530 Acrylamidet 0203.04050SO8010 01 5MTris-HCl (pH8 S)1 3253.8506 375WO12 51 0% SDS0 050101S0.2Q2503040.51 Oo过硫酪链0 05010.15020 25030405TEMED0.0040 0080 0l0.0160020 0240 0300 048% Ol1-kO234SS.99.311.513&18.523230*0 Acrylamfde1 3274 053678 0W71331 B M TrHCl (pH8 8)22.53.85.06.37510012.510% SDS0 050.10.150202S0 30.4051职口过硫醮ts0 05010150202503040.5TEMED0.0030.0060.0090.01200150.0180.0240 0310% GelH2O1 94 059799911 9159198Acrylarnkfe1 7335.067& 310 01331671.5MTris-HCl (pH8.8)132.53850637.510 01251 0o SDS0 05010.150.20.2503040.510 口过硫酸锤0 050.1015020250.30 405TEMED0 0020.0040.0060 00&0010 01200160.02