微生物实验操作基本要求课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,微生物学基础,-,微生物实验操作的基本要求,微生物实验操作的基本要求,无菌操作,无菌,指在环境中一切有生命活动的微生物的,营养细胞,及其芽孢或,孢子,都不存在的状态。,无菌操作,在微生物的分离、接种、培养操作过程中,防止,培养物被其他微生物,污染,的操作技术称为无菌操作技术。,无菌操作,创造无菌的培养环境,防止在操作过程中其他微生物的侵入,无菌的环境,一,无菌的器具、培养基,二,无菌操作技术,三,基本规则,四,一、无菌操作技术,无菌的环境,一,1,、无菌室,2,、超净工作台,3,、生物安全柜,4,、火焰周围,1,、无菌室,无菌的环境,一,标准无菌室的要求：,房间设置（外面有缓冲室）、空气过滤、墙面、墙角、微生物操作相关设备、紫外灯等。,无菌的环境,一,如条件有限，可在微生物实验室内专辟一个小房间作为无菌室。可以用板材和玻璃建造，面积,4-5,平方米即可。,板材和玻璃隔出的无菌室,无菌的环境,一,2,、超净工作台,超净工作台是一种提供,局部无尘无菌,工作环境的垂直,单向流,型空气净化设备。,超净工作台,3,、生物安全柜,无菌的环境,一,生物安全柜外形与超净台类似，也提供,局部无尘无菌,工作环境。但它设置了风槽，气流不会吹向使用者，可以有效,保护使用者,。,一,无菌的环境,4,、火焰周围,通常使用酒精灯、煤气灯，其,火焰周围,是无菌区域（直径,10cm,左右）。,首先，利用高温杀死细菌，而后利用酒精燃烧时,向上形成的单向气流,形成一个无菌区域。,火焰周围是无菌区域,无菌的器具、培养基,二,1,、玻璃、金属等器具,干热灭菌法,2,、玻璃、金属、含水物品,高压蒸汽灭菌法,3,、金属、玻璃器具,火焰灭菌法,4,、液体或水溶性物质,过滤除菌法,1,、玻璃、金属等器具,-,干热灭菌法,设备：,电烘箱,用途：用于玻璃器皿、金属器具等耐热物品的烤干和灭菌。,条件：,160-165,，灭菌,1-2,小时,。,2,、玻璃、金属、含水物品等,-,高压蒸汽灭菌法,设备：,高压蒸汽灭菌锅,用途：培养基、生理盐水、废弃物、采样器、纱布、衣物的灭菌。,条件：,121,水蒸气,2030,分钟,培养基一般使用高压蒸汽灭菌法,3,、一些金属、玻璃器具,-,火焰灭菌法,即在,火焰,外焰上灼烧进行灭菌。,用途：接种环、接种针；涂布器；试管管口、锥形瓶瓶口等的灭菌。,4,、液体或水溶性物质,-,过滤除菌法,器具：,细菌过滤器,用途：不耐高温的液体、水溶性物质的除菌。,细菌过滤器,无菌操作技术,三,我们通过一定的技术来保证目的微生物、培养基不被环境微生物污染，这些技术就是,无菌操作技术,。,包括手部清洁消毒，用接种针、接种环、吸量管、涂布棒等工具进行各种操作等等。,1,、手部清洁消毒,洗手,：手部有可见灰尘时、饭前、便后，用,水和肥皂,洗手；,Handrub,（揉手）：手部较清洁时，,75%,乙醇或者醇基消毒剂,揉手。,动作：手掌,-,手背,-,指缝,-,手指,-,拇指,-,指尖,-,手腕,2,、培养皿操作,培养皿开合：,单手打开和盖上皿盖，包括,持皿法,和,皿加法,两种。,此操作用于制作培养基平板、接种等。,持皿法,皿加法,3,、接种环操作,包括灼烧接种环、接种、划线等。,灼烧接种环,先斜放外焰灼烧接种环，然后垂直放置后继续灼烧，再斜烧金属杆。,现在红外接种环灭菌器使用也比较广泛。,用接种环进行接种,用接种环进行划线,4,、涂布棒操作,灼烧灭菌,：,可以沾酒精然后灼烧，灼烧范围要包括其杆部。,涂布,：,将菌液滴在培养基表面中央。右手拿涂布棒将菌液沿一条直线来回推动，然后沿一垂直线来回推动，平板边缘处可改变方向再涂几次。,5,、试管操作,单试管操作,（注意左右手的使用）,双试管操作,5,、试管操作,无菌操作视频,操作前,准备,1,必须明确物品的无菌区和非无菌区。,工作人员需先戴帽子、口罩及洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。,操作中,2,夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。,进行无菌操作时，凡未经消毒的手、臂，均不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。,无菌物品管理,3,无菌物品必须保存在无菌包或灭菌容器内，不可暴露在空气中过久。,无菌物品和非无菌物应分开放置。,无菌包一经打开即不能视为绝对无菌，应尽早使用。,凡已取出的无菌物品虽未使用也不可再放回无菌容器内。,无菌操作原则,二、微生物实验室要求,（,1,）实验室内要经常保持清洁卫生。,（,2,）实验室应井然有序，不得存放实验室外,及个人物品、仪器等。,（,3,）测试用过的废弃物要倒在固定的箱筒内，,并及时处理。,（,4,）实验室应具有优良的采光条件和照明设备。,（,5,）实验室工作台面应保持水平和无渗漏，墙,壁和地面应当光滑和容易清洗。,（,6,）实验室布局要合理，一般应有准备间和无菌室。,三、微生物实验的安全要求,（一）一般要求,（,1,）进入实验室工作时，衣、帽、鞋必须穿戴整齐。,（,2,）在进行高压、干燥、消毒等工作时，不得擅自离开现场，认真观察温度、,时间。蒸馏易挥发、易燃液体时，不准直接加热，应置水浴锅上进行。,（,3,）严禁用口直接吸取药品和菌液，按无菌操作进行，如发生菌液溅出容器外,时，应立即用有效消毒剂进行彻底消毒，安全处理后方可离开现场。,（,4,）工作完毕，两手用肥皂洗净，必要时可用新洁尔灭、过氧乙酸泡手，然后,用水冲洗。工作服要经常清洗，保持整洁，必要时高压消毒。,（,5,）实验完毕及时清理现场和实验用具，对染菌物品进行消毒灭菌处理。,（,6,）实验结束后认真检查水、电和正在使用得仪器设备，关好门窗，方可离去。,三、微生物实验的安全要求,（二）消防安全要求,（,1,）注意预防供电线路老化造成的漏电着火。,（,2,）注意设备原因导致的失火。,设备超出正常使用寿命；,设备出现故障未及时发现和维修。,需过夜而无人看守的恒温培养箱和干,燥鼓风箱等。,仪器操作不当，温度设置过高，引起失火。,恒温干燥鼓风箱,（,3,）防止未关电源引起失火。,（,4,）防止操作不慎，使火源接触易燃物质，引起着火。,（,5,）避免出现爆炸事故。,灭菌锅,三、微生物实验的安全要求,（三）药品使用安全,擦拭显微镜镜头的二甲苯,易挥发,吸入过多影响健康；,芽孢染色的孔雀石绿,致癌；,常用于显微镜镜头的香柏油,剧毒；,浓硫酸、苯酚等,腐蚀实验仪器，伤害皮肤，眼睛等。,三、微生物实验的安全要求,（四）细菌感染和污染,细菌易发生变异，在某些特定条件下由非致病菌转变为致病菌。因此应注意防范，不可麻痹大意。,（五）辐射损伤,无菌操作前用紫外灯照射消毒，,强紫外线对人体有害，应避免接触。,四、实验室意外事故的处理,见课本第,20,页。,课后作业,1.,如何实现无菌操作？,2.,请自拟一套微生物实验室仪器设备采购计划。,