紫外可见分光光度法实验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,紫,外,可,见,分,光,光度法实验,指导老师：马少妹,实验1,紫外吸收光谱的测绘,实验2,鉴定和识别有机化合,物中的电子跃迁类型,实验,3,紫外分光光度法同时测,定维生素,C,和维生素,E,实验4,三氯苯酚存在时苯,酚含量的紫外分光,光度法测定,实验,5,紫外可见吸收光谱法,测定双组分混合物,2024/11/27,1.,每,个实验于,下,个实验,之前交，每,人,交一份。,报,告要,书写整齐,清楚。,2.报,告不可剽,窃,或,抄袭,他人之作，更不可造假,数据。,3.报,告以,A4,大小,纸张,撰,写,，格式如下,:,封面,:记载实验序号,、,实验项,目、,实验,日期及,报,告人姓名。,內容,:按“,前言,实验,方法及步,骤实验,結果,讨论结语参考文献,附,录”,等。,(,I),在,“,前言,”(,或,“绪论”),部份，扼要敘述,实验,目的，所使用之,仪器,的特性，分析的基本原理，,理论,背景等，,并,用,几,句,话归纳,所作的,实验项目,及所,获,得的,结,果。,仪器,分析实验报告写法,2024/11/27,(,II),在,”实验,方法及步,骤”,部份,则,列述使用之,仪器设备,，,试剂与,材料以及,实验,步,骤,。,(,III),在,“实验结,果,”,部分，,报,告你,们,所,获,得的,结,果，,这些结果,可能是,经过计算,或,换,算之,后,的,数据,，以,图,、表等方式呈,现,，不,用,把原始,数据,原封不,动,的搬出來，原始,数据,最好放在,“,附,录”,。,数据,的整理及,计算过程,要敘述清楚，同時要注意,单,位,，别遗,落了。,(,IV),接下來在,“讨论”,部分，就是解,释,所,获,得,实验结,果。要把,结,果融入理,理论,面，,讨论,所得到的,结,果是不是如所,预期,的，,还,有,这,些,结,果是否符合理,论,推,断,。,讨论,一下所得,实验,結果有何功用，能夠回答,什么样,的,问题,，或者另外又,产生,了,什么问题,值得,继续,探,讨,。,还,有探,讨实验时,有,无,瑕疵,2024/11/27,是否影,响,到,实验结果,的,准确,性,?数据,的精,确,性、,准确,性、再,现,性如何,?,以上等等都可以,写,。在,“讨论”这,部分你,会,指到整理,于,“,实验结果,”中的,图,表，,请,注意每,张图,表都要,编号,，,并,且有,标题,，如“,图,一,K,2,Cr,2,O,7,的,UV,吸收光,谱图,”。,图,的,标题,放在,图,下方，表的,标题则统一,放在表的上方。若有需要，,图,表之,标题,底下可以,补,充說明,获,得,该结,果的一些,实验条,件。,(,V),在,”结语”,部分,简,短回,顾实验,的,结,果及心得，不要太,长,。,(,VI),在,报,告中，若有引用,束,籍文,献,的話，除了在引用的地方依,次按顺,序,注,明文,献编号,，如,1,、,2,之外，,该,文,献,之出,处,，,请,在,“参,考文,献”这里详细,說明。,(,VII)“,附,录”,部分，把原始,数据,或其他,参,考,资,料整理在,这里,。,(,原始,数据,有教,师,的,见签,名,),。,(,2024/11/27,实验,1,紫外吸收光谱的测绘,1,目的,掌握紫外吸收光谱的绘制方法。利用吸收光谱进行化合物的鉴定，并了解溶剂性质对吸收光谱的影响。,2,原理,紫外吸收光谱为有机化合物的定性分析提供了有用的信息，其方法是将未知化合物的光谱与纯的已知化合物的光谱图进行比较，两者一致就可认为它们在化学上大致是相同的。,比较光谱图的方法是将未知试样和标准样品以相同浓度配制在相同的溶剂中，再分别测绘吸收光诸，比较两者是否一致。,2024/11/27,也可将未知试样的吸收光谱图与标准图谱（如,Sadtler,紫外光诣图相比较。有时，相同的紫外吸收光谱，并不是两种化合物完全相同的充分证据。虽然分子结构不同，只要具有相同的发色团，它们的最大吸收波长,max,相同。然而，其摩尔吸光系数,max,值是有差别的。因此，必须比较两吸收光谱的,max,和,max,数值是否一致。对于有许多吸收峰的光谱图，还可规定几个吸收峰的,max,之间的比值进行比较。通过未知试样与标准样品的光谱图上这些吸收特征的比较，若它们完全相同，那么被鉴定物质与标准样品可能是同一种物质，再根据其它资料进行确证。在没有紫外吸收峰的物质中检查有高吸光系数的杂质是紫外吸收光谱的重要用途之一。如乙醇中,2024/11/27,杂质苯的检查，只需测定256,nm,处有无苯吸收峰即可。因为在这一波段，主成份乙醇无吸收。在绘制比较用的紫外吸收光谱图时，必须采用相同溶剂，以排除溶剂的极性对吸收光谱的影响。同时还应注意,pH、,温度等因素的影响。在实际使用时，应注意溶剂的纯度，最好使用光谱纯等级的溶剂，否则应事先除去溶剂中含有的杂质。,3仪器与试剂,916型紫外-可见分光光度计,容量瓶若干。,乙醇、异丙叉丙酮,（,（,(,),、正已烷、氯仿、甲醇、,邻甲苯酚、盐酸0.1,mol/L、,2024/11/27,氢氧化钠0.1,mol/L(,以上试剂均使用光谱纯，或经提纯处理),4,实验步骤,未知芳香族化合物的鉴定,A,取未知试样的水溶液,(,用去离子水配制,),；,B,用1,cm,石英液槽，以去离子水作参比溶液，在200360,nm,范围内测定吸收光谱。,乙醇中杂质苯的检出,用1厘米石英液槽，以纯乙醇作参比液，在220280,nm,波长范围内测绘乙醇试样的吸收光谱。,溶剂性质对吸收光谱的影响,A,配制浓度为0.142,gL,的邻甲苯酚溶液，其溶剂是：(,I),在,2024/11/27,0.1,mol/L,盐酸水溶液中；(,II),在中性乙醇中；(,III),在0.1,mol/L,氢氧化钠水溶液中。,B,配制浓度为5.2,mgL,异丙叉丙酮溶液，其溶剂分别为正己烷、氯仿、甲醇、去离子水。,C,用,lcm,有盖石英液槽，以相应的溶剂作参比液，测绘各溶液在210350,nm,的吸收光谱。,5数据及处理,（1）记录未知化合物的吸收光谱及实验条件。确定峰值波长，计算峰值波长处,max,值，与标准光谱图进行比较，指出它可能是什么化合物，并计算其摩尔吸光系数。,（2）记录乙醇试样的吸收光谱以及实验条件。从吸收光谱鉴,2024/11/27,别乙醇试样中是否有苯存在。,（3）记录各个邻甲苯酚溶液的吸收光谱及实验条件。比较吸收光谱有何变化，结论如何？,（4）记录各个异丙叉丙酮溶液的吸收光谱及实验条件，比较吸收峰的波长随溶剂极性的变化，结论如何？,6思考题,1、试样溶液浓度过大或过小，对测量有何影响？应如何调整？,2、狭缝宽度大小对吸收光谱的轮廓、峰值波长的位置及吸光系数有何影响?如何选择狭缝宽度？,（复旦大学化学系仪器分析实验编写组编，仪器分析实验,P40）,2024/11/27,实验2 鉴定和识别有机化合物中的电子跃迁类型,1,实验目的,（,1,）熟悉有机化合物中几种主要的电子跃迁类型。,（,2,）了解环境对体系的影响。,2,方法原理,当分了中含有两个或两个以上的生色团时，它们之间的相对位置将会影响分子的吸收带，其一般规律如下：,1）当分子中两个生色团被一个以上的碳原子分开时，产生的吸收等于两个生色团单独存在时的和；,2）当分子中两个生色团相邻接时，其吸收波长比只有一个生色团时出现在较长波长处，且吸收强度增强；,2024/11/27,3）当分子中两个生色团同时与一个碳原子相连时，其吸收情况是上述1、(2)两种极端条件的中间状态。,吸收峰的位置及强度随使用的溶剂不同而异。这些影响与溶剂的性质、吸收带的特征以及溶质的性质有关。一般说来，随着溶剂极性的增加，,n,*,跃迁吸收带向短波移动，而,*,跃迁吸收带向长波移动。,3仪器和试剂,916型紫外-可见分光光度计；石英比色皿2个。,（1）2.010,-3,mol/L,碘甲烷，溶剂：己烷。,（2）2.010,-3,mol/L,碘甲烷，溶剂：甲醇。,（3）1.010,-2,mol/L,丙酮，溶剂：水。,2024/11/27,（4）1.010,-2,mol/L 2，5-,己二酮，溶剂：水。,（5）2.510,-2,mol/L,亚异丙基丙酮，溶剂：己烷。,（6）2.510,-2,mol/L,甲基酮，溶剂：水。,（7）6.610,-5,mol/L,亚异丙基丙酮，溶剂：己烷。,（8）6.610,-5,mol/L,亚异丙基丙酮，溶剂：水。,（9）4.010,-3,mol/L,苯，溶剂：甲醇。,（10）3.110,-4,mol/L,苯酚，溶剂：甲醇。,（11）3.110,-4,mol/L,苯酚钠，溶剂：甲醇。,2024/11/27,4实验步骤,（,1,）仔细阅读仪器操作说明书，开启仪器。,（,2,）用与该溶液对应的溶剂为参照，分别测定上述,11,种溶液在,200-650,nm,范围内的吸收光谱曲线。记录其最大吸收波长,max,和吸光波,A(,注意：手拿比色皿时，只接触毛玻璃一侧,),。,（,3,）一滴纯苯在比色皿的底部，并且盖上盖子，让其自然挥发，以空气为参照，测定气态苯的吸收光谱曲线，记录,max,和吸光波,A,。,5数据处理,（1）计算11种溶液的摩尔吸收系数,max,；,（2）,用列表形式总结所测试样的,max,、,max,及吸收带的跃迁类型。,2024/11/27,6问题讨论,（,1,）指出碘甲烷在水和己烷中测定时，最大吸收波长相差多少？,（,2,）为什么在紫外,-,可见光区常用水、甲醇和已烷为溶剂测定吸收光谱曲线？,（,3,）分别指出亚异基丙酮中，,n,*,和,*,跃迁吸收带，并说明理由。,（,4,）试推测,0.1,mol/L 2,5,8-,三壬酮和,2-,烯,5,8-,壬二酮的紫外吸收光谱曲线。,（,5,）共轭作用如何影响亚异丙酮的光谱？推测,l-,戊烯,-1,5,二烯和,1,3,5-,己三烯的光谱曲线。,2024/11/27,（,6,）气态苯和溶液中苯的吸收曲线有何个同？为什么？,（,7,）助色团,NH,2,将如何影响苯胺？质子化作用后，产生的苯胺阳离子将如何改变这种影响？,（高等教育出版社 赵文宽等编，仪器分析实验）,2024/11/27,实验,3,同时测定维生素,C,和维生素,E,2,实验目的,掌握在紫外区中同时测定个双组分体系,抗坏血酸,(,维生素,C),和,-,生育酚,(,维生索,E),的实验方法。,2,仪器和试剂,916型紫外-可见分光光度计；，石英比色皿,2,只，容量瓶移和液管若干。抗坏血酸（,AR）：0.0132gL,在无水乙醇中(7.50,l0,-5,mol/L)；-,生育酚(维生素,E)：0.0488g/L,在无水乙醇中；无水乙醇；未知溶液：在无水乙醇中含有抗杯血酸和,-,生育酚溶液。,2024/11/27,3,实验原理,在同一溶液中同的测定双组分的原理已在第五章中介绍过。抗坏血酸称为“水溶性”维生素，,-,生育酚称为“脂溶性”维生素。但是，它们二者都溶解于无水乙醇从而能够在紫外区测定，因为抗坏血酸缓慢地氧化成为脱氢抗坏血酸，所以必须每天制备新鲜的溶液。,-,生育酚比较稳定。抗坏血酸和,-,生育酚起抗氧剂作用，即它们在一定时间内能防止油脂酸败。两者结合一起的效果超过单独添加使用时的效果，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。由于这个原因，它们对于防护各种食品油脂氧化是一种有效的组合试剂。,2024/11/27,4,操作步骤,制备抗坏血酸标准溶液：分别取抗坏血酸贮备液2，3，4和5,ml,于25,mL,容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，以同样的方法制备,-,生育酚的标准溶液，将2，3，4和5,mL-,生育酚贮备溶液稀释到25,mI。,以无水乙醇作为参比调得320-220,nm,的吸收光谱。将四个抗坏血酸的光谱绘在同一个图上。同样，将四个,-,生育酚的光谱绘在同一个图上。按同样方法测定未知溶液的吸收光谱。,5数据处理,（1）绘制抗坏血酸和,-,生育酚的标准曲线：选择每种物质的最大吸收