液相色谱仪的维护与常见故障课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,液相色谱仪的日常维护与常见故障排除,液相色谱仪的日常维护与常见故障排除,一 液相色谱仪的 日常维护,一 液相色谱仪的 日常维护,储液器和流动相,使用,HPLC,试剂做流动相，用前最好过,0.45m,膜,除去微粒物质,;,更换流动相时,应彻底清洗储液器，防止交叉污染，更换不互溶流动相时，选择好中间试剂。,流动相务必要脱气，否则出现气泡，引起输液不畅，使噪声漂移增大，影响检测限。,储液器和流动相 使用HPLC试剂做流动相，用前最好过,储液器和流动相,流动相的温度不要与室温相差太大，否,则会产生气泡，导致基线漂移不稳。,使用缓冲盐溶液做流动相时，最好现用,现配，用前过滤，避免在阳光下暴晒。,定期清洁储液器及附件，防止长微生物,堵塞吸滤器。,储液器和流动相 流动相的温度不要与室温相差太大，否,输液泵,泵压力不要太高,要适当调整压力,一般压力上限在,10-20MPa,，下限为,0.5MPa,，注意防止因泵堵塞造成压力过高损坏柱塞杆或烧坏电机。,密封垫易损坏引起故障，每天实验结束一定要认真冲洗泵,注意防止堵塞,使用缓冲盐流动相时,更要小心。,输液泵 泵压力不要太高,要适当调整压力,一般压力上,进样器,样品溶液进样前应该用,0.45m,膜过,滤，减少颗粒对进样阀的磨损；,转动阀芯时不能太慢，更不能停留,在中间位置，否则流动相受阻，会使泵,压剧增，再转到进样位置时，过高的压,力会使柱头受损；,进样器 样品溶液进样前应该用0.45m膜过,进样器,停机前一定冲洗干净进样器内,残留的样品或缓冲盐，防止样品和,无机盐沉积造成进样阀转子面磨损,或堵塞。,注射器最好使用仪器自配尖头、,平头针，不要用其它仪器的。,进样器 停机前一定冲洗干净进样器内,进样器,自动进样器的清洗液，最好使用,与流动相相同的溶液，若含盐分，要,出去盐分,；,清洗液最好也脱气使用，清洗液,也要经常更换，避免出现气泡和沉,淀。,进样器 自动进样器的清洗液，最好使用,柱,防止柱性能下降,1,溶剂的化学腐蚀性不能太强；,2,避免颗粒物在柱头沉降；,3,柱压不能太高，防止冲击太,大；,4,流动相,pH,值小于,7,时，最好用,大粒度同种填料的予柱；,柱防止柱性能下降 1 溶剂的化学腐蚀性不能太强；,柱,防止柱性能下降,5,柱头加滤片（烧结不锈钢,),需 要时加保护柱；,6,经常用不同的溶剂清洗柱；,7,长时间不用时要保存好,一定要洗去缓冲盐,加入大于,10%,有机溶剂，将柱两端拧紧,保持柱填料湿润。,柱防止柱性能下降 5 柱头加滤片（烧结不锈钢),需,检测器,保持检测器清洁非常重要，每天用后与色谱柱一起反复清洗；,不定期用强溶剂反向冲洗检测器；,冲洗时使用脱过气的流动相，防止气泡滞留在池内；,检测器光源（灯）有一定寿命，不用时可以不开灯。,检测器 保持检测器清洁非常重要，每天用后与色谱柱一起反,记录器数据处理系统,记录仪,:,热敏式打印头要注意记录纸的质量,开机前注意检查走纸部件,不要卡纸,.,色谱工作站,:,防止网上病毒损坏软件,.,记录器数据处理系统 记录仪:,二 常见故障的排除,二 常见故障的排除,1,、储液器和流动相,1,）噪声大，出毛刺,-,脱气不充分,超声,脱气,真空,脱气,用,He,脱气,加热回馏,脱气,(,混合流动相不宜,),1、储液器和流动相1）噪声大，出毛刺-脱气不充分,1,、储液器,2,）流动相供给不畅，泵压力不稳,流动相接近用完,过滤器堵塞（有颗粒，长霉）,流速过高,阻力大,造成空化现象,.,解决的办法是,:,降低流速,;,换大孔过滤器,;,加大管路内径,;,抬高储液器,.,1、储液器2）流动相供给不畅，泵压力不稳,1,、储液器和流动相,3,）产生有规则的噪声；基线上升，梯度洗脱出鬼峰；,原因,:,储液器或流动相被污染；,溶剂质量差（含杂质多）；,配制流动相的玻璃器皿不清洁,有微,生物影响；,配制流动相的操作不当（过滤、脱,气、搅拌,),。,1、储液器和流动相3）产生有规则的噪声；基线上升，梯度洗脱出,2,、输液泵,1,）单向阀,a.,球和阀座粘在一起，堵死，打不出溶,剂，,(,特别是缓冲盐流动相,),用高质量（纯度高、脱过气）的不同,极性的溶剂冲洗,如水、甲醇、异丙醇、,二氯甲烷,；,更换新单向阀。,2、输液泵1）单向阀,2,、输液泵,b.,球和阀座密封不严，压力不稳，气泡进入阀中，紧贴在阀体内，使球难以返回阀座，引起倒流，压力和流速变化大，可能有小晶体颗粒。,清除气泡的办法：打开排液阀，大流量冲洗，用脱过气的甲醇冲洗，一般可解决问题。,2、输液泵 b.球和阀座密封不严，压力不稳，气泡进入阀中，紧,2,、输液泵,2,）泵垫圈磨损或破碎，高压下压力不稳，从泵头往外渗漏流动相，色谱峰的保留时间会改变。,解决办法：更换新垫圈。更换方法按维修说明书上的方法一步步操作。,2、输液泵2）泵垫圈磨损或破碎，高压下压力不稳，从泵头往外渗,2,、输液泵,注意：,输液泵的垫圈要和流动相匹配协调。,多数垫圈和流动相是协调的,但有的垫圈,适用于甲醇、水、乙腈，在四氢呋喃中溶,解、变粘、变软。,需换垫圈时,应向厂商咨询垫圈的规格,型号。,色谱工作者一般应学会换密封垫圈。,2、输液泵注意：,2,、输液泵,3,）柱塞杆故障,长期使用柱塞杆被磨损，漏液；,因使用不当被折断；,柱塞杆被卡住，不能运动。,解决的办法是更换新柱塞杆,请维修工程师帮助解决，或参照专门的操作手册自己动手更换。,2、输液泵3）柱塞杆故障,3,、进样系统,a.,渗漏,转子密封垫圈松紧不合适；,垫圈不配套；,组装不对。,手动进样系统器,3、进样系统 手动进样系统器,3,、进样系统,b.,堵塞,样品打不进去。,样品管堵塞：环管用反冲法或超,声清洗排除（或换新管,).,手动进样系统,3、进样系统 手动进样系统,3,、进样系统,c.,注样孔问题,1),装样时针头周围渗漏：孔道堵塞，或者放空管和样品管太细，阻力太大；针头密封管规格不对，针头太细。,手动进样系统,3、进样系统c.注样孔问题 手动进样系统,3,、进样系统,c.,注样孔问题,2),注射孔渗漏：放空管有虹吸现象，转子密封面上孔之间有磨损。为防止虹吸,放空管末端应在放空,瓶液面以上,更换磨损的转子,.,手动进样系统,3、进样系统c.注样孔问题 手动进样系统,3,、进样系统,c.,注样孔问题,3),样品滞留,阀在进样位置停留时间不够。,要求停留时间至少应让流动相流过的体积是环体积的,10-20,倍。,(,一般是在下一针进样前才将阀扳到装样位置,),手动进样系统,3、进样系统c.注样孔问题 手动进样系统,3,、进样系统,3),样品滞留,残留样品留在样品环中或注射器中，或从放空管中虹吸回来,污染下一个样品,.,此时可用,5-10,倍的流动相或新样品冲洗注射孔和注射器,若是虹吸,应加限制管。,手动进样系统,3、进样系统3)样品滞留手动进样系统,3,、进样系统,3),样品滞留,管路接头有死体积滞留样品，很难冲洗干净,此时应检查装配情况，确定是否需换新配件。,手动进样系统,3、进样系统3)样品滞留手动进样系统,3,、进样系统,a.,样品瓶不配套,瓶小,针弯、折断,瓶大,样品少，抽不上样,瓶破碎,更换合适的样品瓶。,自动进样系统,3、进样系统a.样品瓶不配套 自动进样系统,3,、进样系统,b.,更换样品瓶隔垫，防止污染。,c.,进样器针头堵塞,（样品、缓冲,盐、隔垫碎片、针头本身,),，,可用溶剂清洗，金属丝疏通，,或换新针头。,自动进样系统,3、进样系统b.更换样品瓶隔垫，防止污染。自动进样,3,、进样系统,d.,样品滞留：空白溶剂出色谱峰,.,加倍清洗，或调整样品瓶顺序，（从低浓度开始，高浓度放后,面）或在样品瓶前放清洗液瓶,.,自动进样系统,3、进样系统d.样品滞留：空白溶剂出色谱峰.自动进,4,、色谱柱,1),塔板数下降,a.,样品处理不合适，选择适当的,样品净化方法，选择合适流动相。,b.,柱头塌陷，填装修补。,4、色谱柱 1)塔板数下降,4,、色谱柱,2),峰形变坏，出现拖尾峰，分叉峰，非高斯峰,与塔板数下降有关,;,峰形坏保留时间不变 可,能是柱堵塞,(,筛板堵塞、缓冲盐析出、强保留物,累积,),，或柱头有空穴。,缓冲盐、离子对试剂，可用甲醇,-,水冲洗，,强保留物累积，可用甲醇,-,乙腈冲洗，,筛板堵塞，可用甲醇,-,水反冲，更换筛板。,4、色谱柱2)峰形变坏，出现拖尾峰，分叉峰，非高斯峰,4,、色谱柱,3),柱压突然增大,样品沉积在柱内,用能溶解样品的,溶剂冲洗（将检测器和柱断开）可正,向冲，反向冲。,柱内硬件有问题：,滤片堵塞，换新滤片,;,柱头塌陷,用相同填料填充、修补,。,4、色谱柱 3)柱压突然增大,4,、色谱柱,4),保留时间改变,不同柱保留时间的变化,主要是填料差异造成的,不同牌号柱出峰顺序不变，保留时间有小的变化。,若峰顺序变化，保留时间变化较大，应考虑换柱或优化分离条件。,对专门的分析最好用同一批号的柱子,。,4、色谱柱 4)保留时间改变,由色谱柱引起的故障,故 障,现 象,解决办法,过滤片堵塞,压力增高、,N,下 降、峰形差,倒柱冲洗或换过滤片,柱头塌陷,峰分叉、,N,下降,修补柱头,健合相流失,保留值改变、峰形差、,N,下降,换柱,样品堵塞,压力高,用能溶解样品的溶剂冲洗,强吸收样品,N,下降、保留值小,强溶剂反冲,由色谱柱引起的故障故 障现 象解决办法过滤片堵塞 压力增,5,、检测器,基线噪声大,灵敏度低,灯（光源）的故障；,氘灯寿命,:1000h,汞灯和钨灯寿命,:2000h,一般使用,6,个月以上可能接近寿命期限,可以考虑更换新灯,.,紫外,可见光检测器,5、检测器基线噪声大,灵敏度低,紫外可见光检测,5,、检测器,b.,流动池内有气泡,用脱气甲醇，不同流量冲洗。,c.,池堵塞（入口、出口、池内）,用可溶堵塞物的溶剂冲洗（缓冲盐用水冲洗,),d.,池污染,用异丙醇、二氯甲烷、,6mol/L HNO,3,冲洗,.,紫外,可见光检测器,5、检测器b.流动池内有气泡 紫外可见光检测,5,、检测器,e.,测量池和参比池失配,UV,以空气为参比，一般不扣流动相,本底，若用有紫外吸收的流动相，,参比信号不为零，会出现倒峰和伪,峰,此时，选择合适的流动相。,紫外,可见光检测器,5、检测器e.测量池和参比池失配 紫外可见光检,5,、检测器,f.,时间常数选择,(,过滤噪声）,有的仪器有固定的时间常数，有的需设置,时间常数。时间常数太小,噪声增大,;,时间常数,太大,出现宽峰、拖尾或矮峰。,时间常数的设置一般根据经验估计，小颗粒,柱常数小，可选最窄峰宽的,1/10,作为时间常数,对,4.6(150-250)mm,，,5um,柱，可选,0.5s or1s,紫外,可见光检测器,5、检测器f.时间常数选择(过滤噪声）紫外可,5,检测器,紫外,可见光检测器,g.,非线性响应,样品量太大,超出线性范围；,检测器的衰减超出了其线性动力学范围；,流动相的紫外吸收比较强,。,5 检测器 紫外可见光检测器 g.非线性响应,5,检测器,温度影响,环境温度变化引起基线漂移。,温度变化引起流动相折射率改,变，紫外光传导变化。,柱温变化引起基线漂移。,5 检测器 温度影响 环境温度变化引起基线漂移。,5,检测器,信号线故障,记录仪和数据处理系统信号线插接不紧,接触不良，信号很弱，出现不需要的噪音,此时按说明书检查线路连接。,地线对仪器很重要,仪器外壳和信号线的接地很严格，接地不良会出现较大的基线噪声，接错线会造成短路，烧毁仪器。,5 检测器 信号线故障 记录仪和数据处理系统信号线插接不,5,检测器,波长问题,次级发射效应：用氘灯作可见光范围的光源时会发生次级发射效应，用钨灯没有此影响。,正确选择波长,:,既照顾到灵敏度,有考虑到稳定性。,波长校准：机械转动光栅选择波长,因磨损造成所选波长与刻度盘上的不一