实验项目：黄酮提取

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,实验项目：,木芙蓉花中有效成份提取与性能研究,主讲教师：倪明,一、,目,目的,与,与要,求,求,1,了,了解,植,植物,中,中有,效,效成,份,份的,药,药用,价,价值,。,。,2,掌,掌握,植,植物,中,中有,效,效成,份,份的,提,提取,及,及其,测,测定,方,方法,。,。,3,掌,掌握,抑,抑制,亚,亚硝,化,化反,应,应的,操,操作,与,与方,法,法。,二、实验,原,原理与相,关,关知识,黄酮类化,合,合物泛指,两,两个具有,酚,酚羟基的,苯,苯环（,A-,与,B-,环）通过,中,中央三碳,原,原子相互,连,连结而成,的,的一系列,化,化合物，,其,其基本母,核,核为,2-,苯基色原,酮,酮。是一,大,大类以苯,色,色酮环为,基,基础的酚,类,类化合物,。,。植物中,由,由苯丙氨,酸,酸产生的,肉,肉桂酰辅,酶,酶,A,，经碳链,延,延长环化,生,生成的查,耳,耳酮，再,衍,衍生成的,各,各种,-,苯基衍生,物,物。,二、实验,原,原理与相,关,关知识,黄酮类化,合,合物结构,中,中常连接,有,有酚羟基,、,、甲氧基,、,、甲基、,异,异戊烯基,等,等官能团,。,。此外，,它,它还常与,糖,糖结合成,苷,苷。天然,黄,黄酮类化,合,合物多以,苷,苷类形式,存,存在，并,且,且由于糖,的,的种类、,数,数量、联,接,接位置及,联,联接方式,不,不同可以,组,组成各种,各,各样黄酮,苷,苷类。组,成,成黄酮苷,的,的糖类包,括,括单糖、,双,双糖、三,糖,糖和酰化,糖,糖。黄酮,苷,苷固体为,无,无定形粉,末,末，其余,黄,黄酮类化,合,合物多为,结,结晶性固,体,体。黄酮,类,类化合物,不,不同的颜,色,色为天然,色,色素家族,添,添加了更,多,多色彩。,这,这是由于,其,其母核内,形,形成交叉,共,共轭体系,，,，并通过,电,电子转移,、,、重排，,使,使共轭链,延,延长，因,而,而显现出,颜,颜色。黄,酮,酮苷一般,易,易溶于水,、,、乙醇、,甲,甲醇等极,性,性强的溶,剂,剂中；但,难,难溶于或,不,不溶于苯,、,、氯仿等,有,有机溶剂,中,中。糖链,越,越长则水,溶,溶度越大,。,。黄酮类,化,化合物因,分,分子中多,具,具有酚羟,基,基，故显,酸,酸性。酸,性,性强弱因,酚,酚羟基数,目,目、位置,而,而异。黄,酮,酮类化合,物,物广泛存,在,在于天然,产,产物中，,大,大多具有,明,明显的抗,炎,炎、抗菌,、,、生物抗,氧,氧化性、,抗,抗衰老、,降,降血脂、,治,治疗心血,管,管疾病等,功,功能。其,中,中有些可,用,用于心血,管,管病的治,疗,疗。,二、实验,原,原理与相,关,关知识,植物单宁,(Vegetable tannins),，又称植,物,物多酚,(Plant Polyphenol),为多羟基,苯,苯，如苯,二,二酚、苯,三,三酚等，,是,是一类广,泛,泛存在于,植,植物体内,的,的多元酚,化,化合物。,在,在维管植,物,物中的含,量,量仅次于,纤,纤维素、,半,半纤维素,和,和木质素,，,，广泛存,在,在于植物,的,的皮、根,、,、叶、果,中,中，含量,可,可达,20%,。植物单,宁,宁是植物,的,的次生代,谢,谢产物，,属,属于天然,有,有机化合,物,物。常是,植,植物及微,生,生物中产,生,生的酚类,次,次生代谢,产,产物。具,有,有抗氧化,性,性、抗肿,瘤,瘤、抗动,脉,脉硬化、,防,防冠心病,与,与中风等,心,心脑血管,病,病以及抗,菌,菌等多种,生,生理功能,，,，是自然,界,界和人类,的,的“健康,卫,卫士”。,2l,世纪随着,抗,抗氧化剂,理,理论及研,究,究工作的,深,深入，以,及,及消费者,对,对食品安,全,全性意识,的,的提高，,天,天然抗氧,化,化剂的应,用,用越来越,受,受到人们,的,的重视，,回,回归大自,然,然已是目,前,前一个大,趋,趋势。木,芙,芙蓉（,Hibiscusmutabilis L.,）为锦葵,科,科植物，,又,又名拒霜,花,花、木莲,、,、醉芙蓉,，,，为落叶,灌,灌木或小,乔,乔木。其,花,花大色艳,，,，花色一,日,日三变，,在,在寒凉的,深,深秋傲霜,怒,怒放，观,赏,赏价值极,佳,佳。其花,、,、叶、根,富,富含生化,药,药物成分,，,，是极优,良,良的中药,材,材。中医,认,认为，木,芙,芙蓉性平,味,味辛，有,清,清热、凉,血,血、解毒,、,、消肿、,排,排毒之功,效,效，适用,于,于肺热咳,嗽,嗽、月经,过,过多、白,带,带过多、,痈,痈疽肿毒,、,、疔疮、,水,水火烫伤,等,等疾病。,本草纲目,言其“治,一,一切大小,痈,痈疽，肿,毒,毒恶疮，,消,消肿，排,脓,脓，止痛,”,”。木芙,蓉,蓉花、叶,中,中含有多,酚,酚、黄酮,类,类化合物,。,。,二、实验,原,原理与相,关,关知识,1.,测定总黄,酮,酮的原理,:,在中性或,弱,弱碱性及,亚,亚硝酸钠,存,存在条件,下,下,黄酮类化,合,合物先与,亚,亚硝酸钠,发,发生氧化,还,还原反应,，,，再加,硝,硝酸铝络,合,合，最后,加,加氢氧化,钠,钠溶液使,黄,黄酮类化,合,合物开环,，,，生成,2-,羟基查耳,酮,酮而显红,橙,橙色,在,510nm,波长处有,吸,吸收峰且,符,符合定量,分,分析的比,尔,尔定律,一般与芦,丁,丁标准系,列,列比较定,量,量（它的,显,显色原理,发,发生在黄,酮,酮醇类成,分,分邻位无,取,取代的邻,二,二酚羟基,部,部位,不具有邻,位,位无取代,邻,邻二酚羟,基,基的黄酮,醇,醇类成分,加,加入上述,试,试剂时是,不,不显色的,）,）。,二、实验,原,原理与相,关,关知识,2.,多酚测定,原,原理,:,总多酚的,测,测定采用,Folin-Ciocalteu,法测定总,多,多酚含量,，,，其反应,原,原理为酚,类,类化合物,在,在碱性条,件,件下可以,将,将钨钼酸,还,还原，生,成,成蓝色的,化,化合物，,颜,颜色的深,浅,浅与酚类,化,化合物含,量,量呈正相,关,关，在波,长,长,760nm,左右有最,大,大吸收，,一,一般与没,食,食子酸标,准,准系列比,较,较定量,。,。,二、实验,原,原理与相,关,关知识,3.总黄,酮,酮对亚硝,酸,酸钠清除,率,率的测定,亚硝酸钠,在,在弱酸性,条,条件下，,与,与对氨基,苯,苯磺酸重,氮,氮化，然,后,后再与盐,酸,酸萘乙二,胺,胺偶合生,成,成红色化,合,合物，用,分,分光光度,计,计测出该,化,化合物的,吸,吸光度，,就,就可知道,反,反应液中,亚,亚硝酸钠,含,含量多少,。,。据此可,以,以通过测,定,定相同条,件,件下亚硝,酸,酸钠含量,的,的变化反,映,映总黄酮,清,清除能力,的,的强弱，,亚,亚硝酸钠,含,含量少，,总,总黄酮清,除,除能力就,强,强，反之,则,则弱。,二、实验,原,原理与相,关,关知识,4.,总黄酮对,亚,亚硝胺合,成,成阻断率,的,的测定,二甲胺与,亚,亚硝酸钠,在,在模拟人,体,体胃液的,条,条件下,(pH3.0,，温度,37),，可适宜,地,地生成二,甲,甲基亚硝,胺,胺。当往,样,样品溶液,中,中依次加,入,入二甲胺,与,与亚硝酸,钠,钠时，样,品,品溶液优,先,先同亚硝,酸,酸钠作用,，,，使得二,甲,甲胺不能,与,与亚硝酸,钠,钠反应，,达,达到阻止,亚,亚硝胺生,成,成的目的,。,。据此可,以,以通过比,较,较相同条,件,件下生成,亚,亚硝胺量,的,的多少反,映,映总黄酮,阻,阻断能力,的,的强弱，,生,生成亚硝,胺,胺量少，,总,总黄酮的,阻,阻断能力,就,就强，反,之,之则弱。,在,在紫外灯,照,照射下，,二,二甲基亚,硝,硝胺可分,解,解成二甲,基,基仲胺和,亚,亚硝酸根,，,，亚硝酸,根,根与对氨,基,基苯磺酸,重,重氮化后,，,，再与,1-,萘胺偶,合,合生成,红,红色化,合,合物，,用,用分光,光,光度计,测,测出该,化,化合物,的,的吸光,度,度，就,可,可知道,上,上述反,应,应液中,亚,亚硝胺,含,含量多,少,少。,三、仪,器,器与试,剂,剂,（一）,实,实验室,提,提供下,列,列仪器,和,和试剂,1,、仪器,：,：,电子分,析,析天平,；,；粉碎,机,机；数,显,显恒温,水,水浴锅,；,；三用,紫,紫外仪,；,；真空,泵,泵；分,光,光光度,计,计；电,热,热套；,比,比色管,；,；常用,玻,玻璃仪,器,器。,2,、试剂,：,：,木芙蓉,花,花采自,湖,湖北师,范,范学院,校,校区；,芦,芦丁（,上,上海展,云,云化工,有,有限公,司,司）；,对,对氨基,苯,苯磺酸,（,（分析,纯,纯）；,柠,柠檬酸,（,（分析,纯,纯）；,磷,磷酸氢,二,二钠（,分,分析纯,）,）；盐,酸,酸萘乙,二,二胺（,分,分析纯,）,）；二,甲,甲胺（,分,分析纯,）,）；,1-,萘胺（,分,分析纯,）,）；钨,酸,酸钠（,分,分析纯,）,）；钼,酸,酸钠（,分,分析纯,）,）；没,食,食子酸,（,（分析,纯,纯）；,（,（分析,纯,纯）；,乙,乙醇（,分,分析纯,）,）；,A1(NO,3,),3,（分析,纯,纯）；,盐,盐酸（,分,分析纯,）,）；,NaOH,（分析,纯,纯）；,浓,浓,H,2,SO,4,（分析,纯,纯）；,磷,磷酸（,分,分析纯,）,）。,三、仪,器,器与试,剂,剂,（二）,学,学生自,配,配及标,定,定试剂,1,、乙醇,溶,溶液：,60%,、,80%,乙醇溶,液,液。,2,、,10%A1(NO,3,),3,溶液。,3,、,1%,三氯化,铝,铝溶液,。,。,4,、,2,FeCl,3,溶液。,5,、,5%NaNO,2,溶液。,6,、,4%NaOH,溶液；,1%NaOH,溶液。,7,、,5,的醋,酸,酸铅溶,液,液。,8,、,1,KMnO,4,溶液。,9,、,10%,、,0.5%Na,2,CO,3,溶液。,10,、,pH3.0,的柠檬,酸,酸,-,磷酸氢,二,二钠缓,冲,冲液,:4.11mL0.2mol/L,磷酸氢,二,二钠与,15.89mL0.1mol/L,柠檬酸,混,混合即,可,可。,11,、,1 mmol/L,的二甲,胺,胺溶液,。,。,12,、,1%,、,0.4%,对氨基,苯,苯磺酸,溶,溶液。,13,、,0.1%1-,萘胺溶,液,液。,14,、,0.2%,盐酸萘,乙,乙二胺,溶,溶液。,15,、,0.4%,对氨基,苯,苯磺酸,溶,溶液。,四、,实验步,骤,骤,一、,样品的,处,处理及,提,提取,1.,处理：,新,新鲜木,芙,芙蓉花,水,水洗后,，,，于,60,烘干，,粉,粉碎机,粉,粉碎，,过,过筛备,用,用。,2.,提取：,精,精密称,取,取干燥,、,、粉碎,的,的木芙,蓉,蓉花粉,末,末,1.0000 g,置于锥形瓶,中,中，加入,60%,乙醇溶液,30mL,，于,60,浸提,2 h,，滤去残渣,，,，残渣洗涤,2-3,次，定容至,100 mL,，即得提取,液,液。,四、,实验步骤,二、样品测,定,定,1.,黄酮测定,1.1,黄酮类物质,的,的鉴定方法,(1),盐酸一镁粉,反,反应：取待,测,测液,1.0 mL,放在测试瓶,中,中，加入少,许,许镁粉振摇,，,，滴加几滴,浓,浓盐酸，观,察,察反应现象,。,。,(2),氨水反应：,取,取待测液,1.0 mL,放在测试瓶,中,中，滴加几,滴,滴氨水振摇,，,，观察反应,现,现象。,(3),硝酸铝反应,：,：取待测液,1.0 mL,放在测试瓶,中,中，滴加几,滴,滴硝酸铝振,摇,摇，观察反,应,应现象。,(4),三氯化铝反,应,应：取待测,液,液,1.0 mL,放在测试瓶,中,中，滴加几,滴,滴,1%,三氯化铝振,摇,摇，观察反,应,应现象。,四、,实验步骤,(5),氯化铁反应,：,：在试管中,加,加,