口腔培养细胞的取材与分离课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,培养细胞的取材与分离,取材部位准确,严格无菌操作，避免微生物和化学污染,尽快培养，,24h,以内,减小损伤，使用锐器，避免撕扯,制备标本，以便鉴定,体外细胞的纯化,人工纯化：酶消化法、机械刮除法、反复贴壁法、克隆法、培养基限定法、流式细胞仪分离法 等,自然纯化,细胞冻存要点：,冷冻过程要缓慢,冻存细胞必须处在对数生长期,细胞复苏要点：,快速解冻,解冻后的细胞应离心去除冷冻保护剂后再接种到培养基中,细胞培养的污染、检测与控制,微生物污染：细菌，真菌，支原体等污染,污染的途径：空气、器材、操作、试剂、组织标本,微生物污染的检测,微生物污染的控制：抗生素除菌法；加温处理,细胞培养常用方法：,组织块培养法,酶消化法,第二节口腔医学中相关细胞培养及其特点,一、牙齿相关细胞,牙髓细胞,（,Dental pulp cells,）,培养方法,：组织块法；酶消化法,细胞形态特点,免疫组织化学染色,体外培养细胞的生长增殖特点,功能特点,牙髓细胞,波形丝蛋白染色,(+),未分化间充质细胞,成纤维细胞,牙髓细胞,体外培养细胞的生长增殖（,Cell proliferation,in vitro,）,生长增殖较快,传代期较短，,15-20,代,(2-4 M),可复层生长,牙髓细胞,功能特点,碱性磷酸酶（,alkaline,phosphatase,ALP),活性,矿化现象,(Von,Kossa,),对细胞因子的反应,对盖髓剂的反应,牙髓细胞,培养方法,：组织块培养法；酶消化法,细胞形态特点,：成纤维细胞型（与牙周膜细胞类似）,免疫组织化学染色,：波形丝蛋白（,+,）；角蛋白（,-,）,体外培养细胞的生长增殖特点,功能特点,牙周膜细胞,（,periodontal ligament cells,）,培养方法,：组织块法；酶消化法,细胞形态特点,免疫组织化学染色,体外培养细胞的生长增殖特点,功能特点,牙周膜细胞增殖分化的影响因素,原代 人牙周膜成纤维细胞,传代人牙周膜成纤维细胞,免疫组织化学染色,波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性,牙周膜细胞,成纤维样细胞，培养成功率高,细胞增殖快,体外存活时间长,(4-12 M),功能特点,分泌功能,：胶原、非胶原蛋白、碱性磷酸酶。,矿化功能,收缩功能,再,生功能,根面,吸附等,二、唾液腺细胞,细胞形态特点,腺泡上皮细胞,：,体外培养的腺泡细胞多呈“铺路石”样排列,导管上皮细胞,：,导管上皮细胞呈多边形,肌上皮细胞,：,肌上皮细胞呈梭形或星形,唾液腺细胞,导管上皮细胞,HSG,细胞系,HSG,细胞系,A,小型猪腮腺上皮细胞原代培养（,10,）,B,小型猪腮腺上皮细胞,alpha,淀粉酶免疫组化染色（,10,）,腺泡细胞上皮细胞,免疫组织化学染色,腺泡上皮细胞：角蛋白、淀粉酶、对氨基水杨酸、导管上皮膜、前角蛋白、单克隆角蛋白、分泌成分阳性反应,导管上皮细胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗体染色阳性反应,肌上皮细胞：肌动蛋白、,S-100,蛋白、肌凝蛋白抗体染色阳性反应,三、口腔黏膜细胞,口腔黏膜细胞,培养方法,：,组织块法和酶消化法,形态特点,：,卵圆形、多边形，呈“铺路石”样单层排列,免疫组织化学染色,：,波形丝蛋白阴性，角蛋白阳性,功能,：,分泌大量的胶原蛋白与非胶原蛋白,兔口腔黏膜上皮细胞,A,B,A,无血清培养基培养条件下（,10,）,B,滋养细胞层培养条件下（,4,）,四、颌骨相关的硬组织细胞,破骨细胞,形态学特点,：,多核,巨细胞，,体积,大,组织,化学染色,：,破骨细胞单克隆抗体呈阳性反应,；,降钙素反应呈蓝紫色,；,抗酒石酸磷酸酶反应呈棕褐色,功能,：,骨吸收功能,影响,因素：,促进：,破骨细胞激活因子、甲状旁腺素,抑制：,-,干扰素,、,降钙素,成骨细胞,形态学特点,：,不同培养方法所获得的成骨细胞形态各有差异,免疫组织化学染色特点,：,BGP,、,型胶原,、,碱性磷酸酶活性,功能,：,成骨作用,调节破骨细胞骨吸收作用,五、口腔肿瘤细胞,口腔鳞癌细胞,细胞系来源,：,鳞状细胞癌,标本原代及传代培养,生物学特性,：,多角形上皮样细胞,核,/,浆比例高，,多,核仁,高贴壁率，克隆形成率和软琼脂集落形成率,Cal27 cell,