人类染色体G显带标本的制备

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,原理,常规制备的染色体标本经烤片后，用热碱、各种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等预处理再以Giemsa 染色，在油镜下可看到染色体两臂显示出着色深浅不同的横纹。最常用的是胰蛋白酶法。,可能的机理是：G带区含有较丰富的A-T 对，在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之一。Giemsa染料在G带区是与DNA结合，而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关。,Giemsa染料是噻嗪-曙红染料，染色体的着色有赖于在原位形成噻嗪-曙红21的沉淀物。着色首先取决于二个噻嗪分子同DNA结合，在此根底上再结合一个曙红分子，其次取决于一个疏水环境，以利于染料沉淀而着色。通过胰酶的显带预处理可除去阴性G带区的疏水蛋白，或使它们的构造变成更亲水状态。由此可知，在G显带中抽取的蛋白往往是疏水的，且主要来自阴性G带区。,试剂及器材,试剂：胰蛋白酶、0.4%酚红、5%NaHCO3、Giemsa原液、pH7.4磷酸盐缓冲液，0.85%生理盐水。,器材：37恒温水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴头。,试验步骤,取胰酶25mg，溶解于盛有50 ml0.85%生理盐水的染色缸中，置37恒温水浴箱中，参加0.4%酚红2滴，混匀，以5%NaHCO3调整pH为。,试验步骤,待胰酶液温度升至37后，将染色体标本片37烘箱烤片放入胰酶液中，并轻轻摇摆，数秒视烤片时间而定后取出，马上自来水冲洗。,试验步骤,染色：pH7.4磷酸盐缓冲液 4.5 ml,Giemsa原液 0.5 ml,染色8-10分钟。,自来水冲洗，空气枯燥，镜检。,留意事项,良好的培育效果为，标本片上中期分裂相要多，且染色体分散要好。,染色体长度应能适应显带分析技术的要求。,G显带成败之关键取决于胰酶液的浓度和处理时间之搭配。,试验结果,低倍镜下可看到中期分裂相，进而转至高倍镜及油镜下观看，可见23对染色体较为饱满，分布均匀，着色较好，沿染色体长轴可显出深浅不同的G带横纹。,人类染色体G带歌谣：,一秃二蛇三蝶飘，四像鞭炮五黑腰；六号像个小白脸，七盖八下九苗条，十号长臂近带好，十一低来十二高；十三、四、五一二一；十六长臂缢痕大，十七长臂带脚镣，十八白头肚子饱；十九中间一点腰，二十头重脚飘飘；二十一好象黑葫芦瓢，二十二头上一点黑；X染色一担挑，Y染色长臂带黑脚。,Thank You!,