转基因食品的检测方法课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,0,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,0,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,转基因食品,的检测方法,转基因食品 的检测方法,1,我们身边的转基因食品,普通大米,(,左）与黄金大米,(,右,),的比较。黄金大米是一种转基因稻米品种，由美国先正达种子公司参与研发。,我们身边的转基因食品普通大米(左）与黄金大米(右)的比较。,2,非,非转基因大豆,转基因大豆,非非转基因大豆转基因大豆,3,转基因食品的检测方法课件,4,五颜六色的玉米！,当香蕉遭遇转基因，太厉害了！,五颜六色的玉米！当香蕉遭遇转基因，太厉害了！,5,转基因食品的安全性越来越受到广泛关注，虽然,迄今 为止尚未发现有证据表明转基因食品对健康和环境存在危害,，但由于转基因食品安全性评价具有,积累性,和,潜在性,特点，并与,社会、文化及伦理,等多方面因素互为影响所以需要多方位长期系统的监测才能对其安全性做出较为客观的评价，其中,转基因食品的检测技术尤为重要,。,对受检产品进行,鉴定,，区别转基因食品与非转基因食品，筛选出在遗传分化过程中已失去转基因特性的产品,对受检产品中导入的基因重组体构成的变异情况进行,检测,转基因食品的安全性,检验,针对,外源,DNA,进行检测（核酸水平的检测）,针对,外源蛋白质,进行检测（蛋白质水平的检测）,国际社会,主要采用,的技术路线,转基因食品的安全性越来越受到广泛关注，虽,6,一、核酸水平的检测,1,、核酸的提取,2,、定性筛选,PCR,技术,3,、实时荧光定量,PCR,法,4,、基因芯片检测法,5,、多重连接依赖的探针扩增（,MLPA,）,定量检测,定性检测,一、核酸水平的检测1、核酸的提取定量检测定性检测,7,对于食品中转基因成分的核酸检测首先要进行核酸的提取，尤其是,DNA,的提取具有其特殊性。,提取,转基因相关食品中的,DNA,的,2,种方法：,CTAB,法,SDS,沉淀法,1,、核酸的提取,对于食品中转基因成分的核酸检测首先要进行核酸的提取，尤其是D,8,CTAB,法原理,(,植物,DNA,提取经典方法,),CTAB(,十六烷基三甲基溴化铵,),，是,一种阳离,子去污剂,，,可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物,。,该复合物在高盐溶液中（,0.7mol/L NaCl,）是可溶的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。,CTAB法原理(植物DNA提取经典方法),9,CTAB,法实验流程,CTAB法实验流程,10,SDS,沉淀法原理,SDS,是,一种阴离子去垢剂,，在高温（,5565,）条件下能,裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸,。,提高盐（,KAc,或,NH4AC,）浓度并降低温度（冰浴），使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀。,上清液中的,DNA,用酚,/,氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的,DNA,。,注：,SDS,法适用于大部分实验材料基因组,DNA,提取,。如动物组织、细胞、全血、细菌、酵母等。,具有,经济、简便的,特点。,SDS沉淀法原理,11,SDS,沉淀法,实验,流程,（以动物组织为例）,SDS沉淀法实验流程（以动物组织为例）,12,2,、定性筛选,PCR,技术,聚合酶链式反应（,PCR,),复合扩增,PCR,核酸印迹法,2、定性筛选PCR技术聚合酶链式反应（PCR),13,聚合酶链式反应（,PCR,),聚合酶,链式反应（,PCR),是体外酶促合成特异,DNA,片段的一种方法，由,高温,变性、,低温退火、适温延伸,等几步反应组成一个周期,，循环进行，,使目的,DNA,迅速扩展,。,具有,特异性强,、,灵敏度高、操作简便、省时,等特点。,用于,基因分离,、,克隆,、,核酸序列分析,、,疾病的诊断,或,任何有,DNA,、,RNA,的地方,。,注：,每,一次实验均需要设有阴性及阳性对照以确保实验结果可靠性。在样品采集及处理过程中也需要注意防止,污染。,聚合酶链式反应（PCR),14,1,高温变性,（,90-,95,）,：双链,DNA,模板在热作用下，氢键断裂，形成单链,DNA,2,低温退火（,55,-65,）,：系统温度降低，引物与,DNA,模板结合，形成局部双链。,3.,适温延伸,（,70-75,）,：,在,Taq,酶（,在,72,左右，活性最佳）的作用下，,以,dNTP,为,原料，从引物的,5,端,3,端延伸，合成与模板互补的,DNA,链,。,注：,Taq,酶,dNTP,转基因食品的检测方法课件,15,复合扩增,PCR,复合扩增,PCR,是,在同一反应管中含有一对以上引物，可以同时针对几个靶位点进行检测,的,PCR,技术。,该,技术不仅,效率高,，而且因为它是针对多个靶位点进行,同时检测,，所以其检测效果较之,普通,PCR,更为,可信,。,复合扩增PCR,16,核酸印迹,法,以,放射性或荧光标记的外源目的基因的同源序列作为探针与该食品原料农产品的总,DNA,进行杂交。,首先用限制酶消化受体总,DNA,，通过琼脂糖凝胶电泳按大小分离所得的片断，随后使,DNA,在原位发生变性，并从凝胶转移至一固相支持体上。,DNA,转移至固相支持体的过程中，各个,DNA,片断的相对位置保持不变，用放射性或荧光标记的探针与各个,DNA,片断杂交，经放射自显影确定与探针互补的电泳条带的位置,。,核酸印迹法,技术用于食品外源基因的检测可检测出外源基因与内源基因有高度同源性的,DNA,片断，且,准确可靠,，但,对样品的纯度要求较高，费用也较高,。,核酸印迹法,17,转基因食品的检测方法课件,18,3,、,实时荧光定量,PCR,法,实时,荧光定量,PCR,技术最早在,1996,年由美国,Applied Biosysyems,公司推出，,是指在常规,PCR,基础上添加了一条标记了两个荧光基团的探针，利用荧光信号积累实时监测整个,PCR,进程，,最后通过标准曲线对未知模板进行定量的方法。,荧光探针,主要有三种：,分子信标探针,、,TaqMan,探针、杂交双探针,。,灵敏度,很高,，,对,加工,、,未加工,和,样品,都可,进行检测,。,3、实时荧光定量PCR法,19,转基因食品的检测方法课件,20,4,、基因芯片检测法,其实质就是高度集成化的反向斑点杂交技术。,探针分子固定在载体上，待测基因经过,PCR,、,末端标记等操作，完成标记有荧光染料或同位素的核酸分子，然后与固定的探针杂交,。,进行,筛查、定性、定量，具有,高通量,、,集成化,和,自动化,的特点,。,我国,开发的转基因产品检测芯片基本上能实现：确定是否是源基因食品、是哪一种源基因食品、是否是我国已批准的源基因食品。,目前研制的芯片能检测国内外已批准商品化转基因作物物种：大豆、玉米、油菜、棉花、马铃薯、烟草、西红柿、木瓜、西葫芦、甜椒,等,。,4、基因芯片检测法 其实质就是高度集成化的反向斑点杂交技,21,转基因食品的检测方法课件,22,5,、多重连接依赖的探针扩增（,MLPA,）,是,一种高通量、针对待测核酸中靶序列进行定性和定量分析的新技术，,它利用简单的杂合、连接、及,PCR,扩增反应，于单一反应管内可同时检测,40,个不同的核苷酸序列的拷贝数变化。,广泛,应用于,基因检测、基因诊断,等多个领域。,灵敏度,高、操作简便、高通量检测,不,用于单个细胞检测,、,不能检测染色体平衡易位,5、多重连接依赖的探针扩增（MLPA）,23,二、蛋白质水平,的检测,1,、酶联免疫吸附实验（,ELISA,）,2,、蛋白质印迹法,(Western Blotting),二、蛋白质水平的检测1、酶联免疫吸附实验（ELISA）,24,1,、酶联免疫吸附实验（,ELISA,）,酶联免疫吸附是一种,酶联免疫技术,。用于,检测包被于固相板孔中的待测抗原（或抗体）即：用酶标记抗体并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。,可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，,颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。,ELISA,分析法,特异性高、操作简单、成本低、稳定性好,，但如果食品中被检测蛋白浓度较低时会出现假阴性。,该法,只适用于原料性食品，难应用于加工品,（因为外源基因表达的蛋白会因加工而失活、分解或消失）。,1、酶联免疫吸附实验（ELISA）酶联免疫吸附是一种,25,转基因食品的检测方法课件,26,蛋白质印迹法是一种,分析和鉴定特定蛋白质,的技术。,将经过凝胶电泳分离的蛋白质转移到膜上,，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分再,对转移膜上的蛋白质进行检测的技术。,该法将电泳较高的,分离能力,、抗体的,特异性,和放射性自显影的,灵敏性,结合起来，,对分析不溶性蛋白有较好的效果。,2,、,蛋白质印迹法,(,Western Blotting),蛋白质印迹法是一种分析和鉴定特定蛋白质的技术。将经过凝,27,转基因食品的检测方法课件,28,Thank you,Thank you,29,