5.培养基配制技术解析

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,回忆复习,一、微生物根本学问,1、微生物的定义：构造简洁、微小、生物,2、微生物的分类：细菌、放线菌、酵母菌、,霉菌、病毒,二、微生物试验根本条件和设备,1、试验室的留意事项：试验安全、无菌操作,环境的无菌、操作的无菌、器皿的无菌,2、无菌室的消毒方法：紫外灯照射、甲醛熏,蒸、酒精擦拭等,回忆复习,3、玻璃器皿的洗涤、包扎、灭菌：,1洗涤剂：洗洁精、铬酸洗液等,2包扎：锥形瓶、培育皿、移液管、试管,3灭菌：烘箱枯燥灭菌、高压蒸汽灭菌,4、常用设备,1显微镜：酵母的形态观看,简洁染色美兰,2培育箱、烘箱、高压蒸汽灭菌锅,回忆复习,三、常用试剂的配制方法第一学期,1液体配液体稀释配制,2固体配液体直接称量配制,今日内容,解决三个问题：是什么？什么是培育基？,为什么？为何起培育作用？,怎么做？怎么配制培育基？,培养基配制技术,一、培育基的概念和作用,1、为什么有“培育基”的诞生？,历史背景：,一、培育基的概念和作用,2、什么是培育基？,培育基是人工配制的，适合微生物生长生殖或产生代谢产物的养分基质。,3、渗透压,当两种不同成分的溶液或不同浓度的溶液放在一起时，即引起集中作用，直至成为均一溶液为止。如将两种溶液用羊皮纸或其他类似的半渗透膜隔开，则两种溶液因性质不同可由一方渗透到另一方，结果产生一种压力称为渗透压，这种现象称为渗透现象。渗透压的大小依溶液中溶质的分子数目而定，分子数目越多则压力越大如细胞质壁分别现象。在同一重量百分浓度的溶液中，具有小分子溶质较具有大分子溶质的渗透压要大，离子溶液较分子溶液的渗透压大，所以盐类溶液的渗透压大于糖类溶液的渗透压。,渗透压对微生物有很大影响，微生物的生活环境必需具有与其细胞大致相等的渗透压，超过肯定限度或突然转变渗透压对微生物是有害的，甚至引起微生物死亡。微生物在高渗透压溶液中引起细胞脱水，原生质收缩，细胞质变稠，发生质壁分别，影响微生物的活动或使之死亡。一般微生物在高渗透压溶液中不能生长生殖，所以，常用腌渍530的食盐或蜜饯3080糖来保存食品。微生物在低渗透压溶液中水分向细胞内渗透，细胞吸水膨胀，甚至裂开，细胞质从细胞内排出.,培育基,种 类,成 分,灭菌,技术,配制,技术,其次节培育基及其配制,教学内容,二、培育基的成分及其作用,任何培育基都应当具备微生物生长所需要五大养分要素：,水、碳源、氮源、矿物质、生长因子,二、培育基的成分及其作用,1、水,存在状态：游离态溶媒自由水,结合态构造组成结合水,生理作用：组成成分；反响介质；物质运输媒体；热的良导体,二、培育基的成分及其作用,2、碳源,定义：凡能供给微生物养分所需碳元素的营,养源。,功能：供给合成细胞物质及代谢物的原料；,能源。,常用碳源,1试验室：葡萄糖、蔗糖、淀粉,2发酵工业：玉米粉、米糠、麸皮、糖蜜,二、培育基的成分及其作用,3、氮源,定义：凡能供给微生物养分所需氮元素的营,养源。,功能：供给合成细胞中含氮物蛋白质等；,一般不作能源。,常用氮源,1试验室：铵盐、硝酸盐、尿素、蛋白胨、,牛肉膏,2发酵工业：麦芽汁、酵母膏,4、矿物质无机盐,定义：为微生物细胞生长供给碳、氮源以外的多种重要元素的物质。,主要功能：构成菌体成分；酶活性基组成或维持酶活性；调整渗透压、pH。,主要元素：磷P、钾K、钙Ca、镁Mg、硫S、钠Na,微量元素：铁、锌,二、培育基的成分及其作用,5、生长因子,定义：一类对微生物正常代谢必不行少且又不能从简洁的碳、氮源自行合成的所需极微量的有机物。,种类：维生素、氨基酸、嘌呤或嘧啶碱基等。,来源：酵母膏、玉米浆、麦芽汁、复合维生素、动植物组织或细胞浸液以及微生物生长环境的提取液等。,培养基成分,提供的主要营养要素,牛肉膏,5g,碳源、氮源、维生素、磷酸盐,蛋白胨,10g,氮源、维生素,NaCl 5g,矿物质,琼脂,？,H2O,定容至,1000mL,1000mL牛肉膏蛋白胨培育基的养分构成,二、培育基的成分及其作用,6、其他非养分成分,1凝固剂：琼脂、明胶,2指示剂：伊红、美蓝、孔雀绿,3抑制剂：抗生素,三、培育基的类型,1、依据培育基的物理状态来区分琼脂作用？,液体培育基 固体培育基 半固体培育基,三、培育基的类型,2、依据所培育微生物的微生物类群来分：,细菌培育基；放线菌培育基；霉菌培育基,3、依据培育目的来分：,种子培育基；发酵培育基,4、依据培育基成分是否明确来分：,自然培育基；合成培育基；半组合培育基,5、依据特殊用途划分：,选择性培育基；鉴别性培育基；增殖培育基,标准,培养基类型,配制特点,主要应用,物,理,性,质,固体培养基,加入琼脂较多,菌种分离,鉴定,计数,半固体培养基,加入琼脂较少,菌种保存,液体培养基,不加入琼脂,工业生产，连续培养,化,学,组,成,合成培养基,由已知成分配制而成，培养基成分明确,菌种分类、鉴定,天然培养基,由天然成分配制而成，培养基成分不明确,工业生，产降低成本,半合成培养基,由天然成分和已知成分相互混合而成,用途广泛,目,的,用,途,鉴别培养基,添加某种指示剂或化学药剂,菌种的鉴别,选择培养基,添加（或缺少）某种化学成分,菌种的分离,称量,溶解,(,过滤,),分装、包扎,调,PH,倒平板或摆斜面,定容,消毒灭菌,无菌检查,四、培育基的配制步骤,思考：你能自己配制一份牛肉膏蛋白胨培育基吗？,培养基成分,提供的主要营养要素,牛肉膏,5.0g,碳源、氮源、维生素、磷酸盐,蛋白胨,10.0g,氮源、维生素,NaCl 5.0g,矿物质,琼脂,20.0g,（不提供营养，只用于凝固）,pH 7.6,利用,1mol/L,的,NaOH,或,1mol/L,的,HCl,调整,将上述物质溶解后，加水定容至,1000mL,。,牛肉膏蛋白胨固体培育基配方,在配制固体培育基时还要参加肯定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培育基中琼脂的含量依据琼脂的质量和气温的不同而有所不同,由于这种培育基多用于培育细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长生殖。,仪器和试剂,烧杯(500 mL、50mL),三角烧瓶(250 mL),量筒,玻璃棒,玻璃漏斗,酒精灯,培育皿,牛皮纸,纱绳,托盘天平,灭菌锅,牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂,10NaOH,10盐酸,周密pH试纸,超净工作台,五、培育基配制器材,培育基、玻璃器皿、天平秤、烧杯或锥形瓶、药匙、玻璃棒、电炉、pH试纸等。,五、培育基配制过程 1、称量,1.在天平上放上称量纸，并把天平归零。,2.用药勺取出培育基，按配方称量。,留意事项 称量完毕,清理桌面和天平,清洗药勺，擦干放回原处,药品放回药品柜,五、培育基配制过程 2、溶解,倾倒培育基时，留神不要沾到玻璃瓶或烧杯壁上。,假设有必要，需要利用电炉加热帮助溶解。,煮溶后要补加足水份，不能把培育基煮焦，焦化的不能使用,五、培育基配制过程 3、分装,分装过程中，留意不要使培育基沾在管瓶口上以免引起污染。,留意：装入试管中的量不宜超过试管高度的1/3，装入三角烧瓶中的量以烧瓶总体积的一半为限。,培育基分装完毕后，在试管口或三角瓶上塞好棉塞，以阻挡外界微生物污染培育基，并保证有良好的通气性能。,五、培育基配制过程 3、分装,调整分注器 刻度，按量分装,分装试管,盖上试管,半自动分装器,五、培育基配制过程 6、摆斜面,灭菌的试管培育基冷却至50左右，将试管一端倾斜搁在玻璃棒或其他适宜高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管长的一半为宜。,五、培育基配制过程 6、倒平板,按无菌要求，在火焰旁操作，取溶化并冷却至不烫手的固化培育基约50，倒入无菌培育皿中，倒量以铺满皿底为限，不超过培育皿高度的1/2。,如觉察裂开、水分浸入、色泽特别、棉塞被培育基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。,将全部培育基放入361恒温箱培育过夜，如觉察有菌生长，即弃去。,用有关的标准菌株接种12管或瓶培育基，培育2448小时，如无菌生长或生长不好。应追查缘由并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培育基即应弃去，不能使用。,五、培育基配制过程 7、培育基质量检验,五、培育基配制过程 培育基保存,1根底培育基不能超过两周,2生化试验培育基不宜超过一周,3选择性或鉴别性培育最好当天使用，倾注的平板培育基不宜超过3天。,培育基灭菌后，可依据需要进展接种和纯培育,接种至斜面,接种至平板,争论,1、什么时候可以倒平板？,2、倒平板时需要留意哪些要点？,争论,用手触摸盛有培育基的锥形瓶，感觉刚刚,不烫手时，就可以进展倒平板了。,争论,用手触摸盛有培育基的锥形瓶，感觉刚刚,不烫手时，就可以进展倒平板了。,通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染,培育基。,争论,空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的,培育基上滋生，因此最好不要用这个平板,培育微生物。,平板冷凝后，皿盖上会分散水珠，将平板倒置，既可以防止培育基中水分的蒸发，又可以防止皿盖上的水珠落入培育基，造成污染。,