分离以尿素为氮源的微生物(上课)

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,试验2,分别以尿素为氮源的微生物,此试验课题意义何在？,1,、尿素,尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸取。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。,2,、脲酶,土壤中的某些细菌能够合成,脲酶，,并且,向胞外分泌。,CO(NH,2,),脲酶,+CO,2,NH,3,+H,2,O,分别以尿素为氮源的微生物,怎么分别出能分解尿素的微生物呢？,菌种可能在什么环境中较多？,试验室中微生物的筛选原理：,人为供给促进目的菌株生长的条件(包括,养分、温度、pH等)，同时抑制或阻挡其他微,生物生长。,选择性培育基,15.0g,琼脂,1.0g,尿素,10.0g,葡萄糖,0.2g,MgSO,4,7H,2,O,2.1g,NaH,2,PO,4,1.4g,KH,2,PO,4,分别能够分解尿素的选择性培育基成分：,从物理性质看此培育基属于哪类？,固体培育基,在此培育基中哪些作为碳源、氮源？,碳源：,葡萄糖、尿素,氮源：,尿素,培育基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育生殖，而受到抑制，所以用此培育基就能够选择出分解尿素的微生物。,培育基选择分解尿素的微生物的原理?,15.0g,琼脂,1.0g,尿素,10.0g,葡萄糖,0.2g,MgSO,4,7H,2,O,2.1g,NaH,2,PO,4,1.4g,KH,2,PO,4,分别能够分解尿素的选择性培育基成分：,氮源真的唯一吗？,1、琼脂作为微生物固体培育基不行缺少的组成,成分，其优点是：,其主要成分不能被微生物利用；,可使培育基固化；,不影响培育基中其他养分物质被微生物吸取。,2、琼脂的成分,琼脂是一种未被纯化的混合物，主要成分为琼脂糖和琼脂果胶，还含有少量的含氮化合物，及其它有机杂质和不溶性杂质。,用琼脂糖代替琼脂作为微生物培育基的固化剂.,尽可能使培育基中只含尿素一种含氮化合,物，以防止琼脂中的含氮化合物被以尿素为氮,源的细菌利用，有利于对这类细菌的筛选。,15.0g,琼脂,糖,1.0g,尿素,10.0g,葡萄糖,0.2g,MgSO,4,7H,2,O,2.1g,NaH,2,PO,4,1.4g,KH,2,PO,4,分别能够分解尿素的选择性培育基成分：,对培育基的灭菌方法？,G6,玻璃砂漏斗过滤,怎样证明此培育基具有选择性呢？,以尿素为,唯一氮源,的培育基,牛肉膏,蛋白胨,培育基,是,分别,尿素,细菌,推断该,培育基,有无选,择性,实验组,对照组,培养基类型,是否,接种,目的,结果,只生长尿素细菌,生长多种微生物,是,选择培育基,分别土壤中分解尿素的微生物并计数,.,筛选菌株,.分别出单个菌落并统计菌落数目,.设置比照,平板划线法,稀释涂布法,稀释涂布平板法,原理：,将样品进展稀释，在稀释度足够高时，,微生物在固体培育基上能形成单个菌落。,所形成的一个菌落是由一个单细胞生殖而成,的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。,试验的具体操作,.土壤取样,从肥沃、潮湿的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先灭菌好的信封中。,取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。,.制备培育基：,制备以尿素为唯一氮源的选择性培育基。,制备根底培育基。,应在火焰旁称取土壤10g。,在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进展,三,样品的稀释,移液枪微量可调移液管,留意事项,为使结果接近真实值将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培育计算出菌落平均数。,为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板上进展计数。假设得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进展菌落的计数，假犹如一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，说明试验不准确，需要重新试验。,统计的菌落往往比活菌的实际数目低。,分别不同的微生物承受不同的稀释度,稀释倍数,目的,细菌,10,4,、10,5,、10,6,保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板,放线菌,10,3,、10,4,、10,5,真菌,10,2,、10,3,、10,4,缘由：不同微生物在土壤中含量不同,试验中供给的选择培育基的配方中，尿素是培育基中的惟一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。但实际上，微生物的培育是一个特别简单的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长生殖，因此能够在选择培育基上生长的微生物不肯定是所需要的微生物，还需要进一步的验证。,在试验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到了培育基中，其变色范围是pH6.48.2，在酸性状况下呈黄色，碱性状况下呈红色，这种添加了酸碱指示剂的培育既可以鉴别和分别出能够产生脲酶分解尿素的微生物，称为鉴别培育基。,尿素在被脲酶催化分解前是,中性,的，由于尿素在脲酶的催化下分解产生了NH3，溶液会呈,碱,性。,15.0g,琼脂,糖,1.0g,尿素,10.0g,葡萄糖,0.2g,MgSO,4,7H,2,O,2.1g,NaH,2,PO,4,1.4g,KH,2,PO,4,分别能够分解尿素的选择性培育基成分：,鉴别培育基,酚红,选择培育基,鉴别培育基,在以尿素为唯一氮源的培育基中参加酚红指示剂。培育某种细菌后，假设PH上升，指示剂将变红，培育基中将消失红色环带的菌落，说明该细菌能够分解尿素。,测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将肯定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培育基上培育，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。,大肠杆菌呈 黑色中心,有或无金属光泽,大肠杆菌在,伊红美蓝琼脂,(EMB),上典型特征,显微镜直接,计数,：,利用血球计数板，在显微镜下计算肯定容,积里样品中微生物的数量。,显微镜直接计数：,不能区分死菌与活菌；,不适于对运动细菌的计数；,需要相对高的细菌浓度；,个体小的细菌在显微镜下难以观看；,缺点,设置比照的主要目的是排解试验组中非测试因素对试验结果的影响，提高试验结果的可信度。,设置比照：,实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌,落数目的试验时，A同学从对应的106,倍稀释的培育基中筛选出大约150个菌,落，但是其他同学在同样的稀释度下,只选择出大约50个菌落。分析其缘由。,缘由：土样不同，,培育基污染或操作失误,(或者是混入了其他的含氮物质),小结：通过这个事例可以看出，试验结果要有说服力，比照的设置是必不行少的。,方案一：由其他同学用与A同学一样土样进展试验,方案二：将A同学配制的培育基在不加土样的状况下进展培育，作为空白比照，以证明培育基是否受到污染。,结果猜测：假设结果与A同学全都，则证明A无误；假设结果不同，则证明A同学存在操作失误或培育基的配制有问题。,结果分析与评价,1.通过比照试验，假设培育物有杂菌污染，菌落数偏高；假设培育物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。,2.提示：选择每个平板上长有30300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最适宜。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示试验不准确。,六、例题解析,例1对细菌群体生长规律测定的正确的表述是,A在液体培育基上进展 B至少接种一种细菌,C接种一个细菌 D准时补充消耗的养分物质,解析：细菌群体生长规律的测定是人们在肯定条件下进展的。这些条件是：一种细菌、恒定容积的培育基，液体培育基、定时测定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长；恒定容积是给微生物供给肯定的生存环境；液体培育基才能通过样品推想细菌总数。假设接种多种细菌，则会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证肯定的接种量。,答案：,A,例2在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最剧烈的时期是,A调整期 B对数期,C稳定期 D衰亡期,解析：种内斗争是一种生态因素。种内斗争反响了种内生物对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间充裕，养分充分的时候，种内斗争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的增加，每个个体的生存空间越来越少，养分物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源的争夺也越来越剧烈，种内斗争就越来越剧烈。由此可知，在稳定期的种内斗争最剧烈。在衰亡期，微生物的数目已经开头削减，pH已经极度不适于微生物的生存，次级代谢产物积存到很高的程度，这时的微生物的生存斗争主要是与无机环境的斗争。,答案：,C,1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是,A.在液体培育基上进展 B.至少接种一种细菌,C.接种一个细菌 D.准时补充消耗的养分物质,2.使用选择培育基的目的是,A.培育细菌,B.培育真菌,C.使需要的微生物大量生殖,D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区分,3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是(),A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3,C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素,实践训练,A,C,D,4.以下说法不正确的选项是,A.科学家从7080度热泉中分别到耐高温的TaqDNA聚合酶,B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估量值,C.设置比照试验的主要目的是排解试验组中非测试因素对试验结果的影响，提高试验结果的可信度,D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。,5.为培育和分别出酵母菌并淘汰杂菌，常在培育基中参加,A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质,C.青霉素类药物 D.高浓度食盐,B,C,例32023年江苏抗生素作为治疗细菌感染的药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素的觉察和应用具有划时代的意义。,青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型是 ，青霉素是青霉菌的 代谢产物。,在生产和科研中，常选用处于 期的青霉菌作为菌种或争论材料，由于此时的青霉菌代谢旺盛，和 比较稳定。,对青霉菌菌体生长状况的测定：取肯定体积的发酵液，经离心分别、反复洗涤后，再计算发酵罐中菌体的总重量。,异养需氧型,次级,对数,个体的形态,生理特性,称菌体的湿重,称烘干后的重量,四、操作提示,无菌操作,做好标记,规划时间,本课题学问小结:,