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单击此处编辑母版标题样式,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,厌氧性细菌及检验,1,一定义,有氧条件下不能生长，无氧条件(不是绝对）下才可以生长的一类细菌,1836年Pasteur提出,临床上日益受到重视，60%临床标本存在厌氧菌感染-需要重视,2,3,二 分类,1 有芽孢厌氧性细菌,一个梭菌属包括83个种,2 无芽孢厌氧性细菌,40多个菌属，300多个菌,种和亚种,4,三 感染,分布,原因,临床表现,5,厌氧菌在正常人体内的分布,厌氧菌,皮肤,上呼吸道,口腔,肠道,尿道,阴道,一芽孢菌,G+杆菌,梭状芽孢杆菌属,二无芽孢菌,（一）G+的杆菌,双歧杆菌,（二）G-的杆菌,类杆菌属,（三）G+的球菌,消化球菌属,（四）G-的球菌,韦荣氏菌属,0,0,0,+,0,0,0,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,0,+,+,+,+,6,致病的原因,1 组织缺氧或氧化复原电势降低,穿刺伤等封闭性伤口，血管压迫，肿,瘤压迫等等,2 机体免疫力低下,7,临床的表现,1 感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏,死，皮下有捻发音，是产气夹膜梭菌感,染的特征,2分泌物有恶臭，或为暗红色，分泌物涂,片经革兰氏染色，发现细菌，而培养阴,性的,3 其它等等,8,厌氧菌标本的采集和送检,标本的采集和送检-,1 标本决不能被正常菌群污染；,2 应尽量防止空气,9,标本的采集,标本来源,收集的方法,封闭性脓肿,妇女生殖道,下呼吸道分泌物,胸腔,窦道，子宫腔，深部创伤,组织,尿道,针管抽取,后穹隆穿刺抽取,肺穿刺术,胸腔穿刺术,静脉注射的塑料导管穿入,无菌外科切开,上阴部膀胱穿刺,10,标本的送运与处理,针筒送运法,无菌小瓶送运法,棉拭送运法,大量标本送运法,组织块送运法,厌氧袋送运法,11,别离和鉴定,12,13,检验的方法,1 直接镜检,一些特殊的特点，临床工作中的总结,可对初步判断及临床应用做早一步的,指 导作用,14,2 别离培养,1 初步培养,1）培养基的选择,强化血琼脂平板,卡那万古霉素冻溶血琼脂平板,七叶苷胆汁平板等等,15,2）标本的接种,每份标本应接种3个培养平板，分别放置于有氧，无氧和含5%10%的CO2的容器中，有时需要专用的培养基,16,3）厌氧培养法,a 厌氧罐培养法,b 气袋法,c 气体喷射法,d 厌氧手套箱法,e 其它等等,17,2 次代培养和厌氧菌确实定,18,3 别离培养中可能失败的原因,1）培养前为做标本的直接涂片和染色镜检,2）标本在空气中放置太久或接种时时间过长,3）未用新鲜配制的培养基,19,4）未用选择性培养基,5）无适宜的厌氧罐或装备出现问题,6）培养时间缺乏,7）.,20,鉴定实验,1 形态和染色,重要的是为下一步的鉴定提供参考，,时间,破伤风梭菌革兰氏染色改变,拉丝实验 加KOH30g/l一滴，能拉丝为阴性不能为阳性,21,PH,痤疮丙酸杆菌7.0时阴性及多型性,6.0及以下革兰氏阳性杆菌,22,2 菌落性状,1）色素 产黑色素类杆菌210天可产生黑色素；溶齿放线菌培养34天产生粉红色色素,2）溶血 产气夹膜梭菌在新鲜的血琼脂平板上可产生双溶血环,3）荧光,23,3 抗生素敏感实验,4一些特殊的敏感实验,聚茴香脑磺酸 钠敏感实验,5生化特性,6气液相色扑,7 PCR等等,24,有芽孢的厌氧菌,简介,梭菌属 G+陈旧性培养基G-,25,四 破伤风梭菌,大量存在于人和动物的肠道,粪便污染,伤口被污染导致-注意消毒清洁,芽孢为于顶部，呈鼓槌壮，直径比菌体粗，呈梭状,可以被用来生物技术，,外毒素致毒,26,一）生物学性状,染色，培养 生化,对我们实验诊断来说最重要,27,破伤风梭菌菌体细长，长48um，宽0.3 0.5um，周身鞭毛，芽胞呈圆形，位于菌体顶端，直径比菌体宽大，似鼓槌状，是本菌形态上的特征。繁殖体为革兰氏阳性，带上芽胞的菌体易转为革兰氏阴性。破伤风梭菌为专性厌氧菌，最适生长温度为37pH7.07.5，,28,营养要求不高，在普通琼脂平板上培养2448小时后，可形成直径1mm 以上不规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状菌落，易在培养基外表迁徒扩散。在血液琼脂平板上有明显溶血环，在疱肉培养基中培养，肉汤浑浊，肉渣局部被消化，微变黑，产生气体，生成甲基硫醇（有腐败臭味）及硫化氢。,29,30,一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，形成吲哚，不能复原硝酸盐为亚硝酸盐。对蛋白质有微弱消化作用。本菌繁殖体抵抗力与其他细菌相似，但芽胞抵抗力强大。在土壤中可存活数十年，能耐煮沸4050分钟。对青霉素敏感，磺胺类有抑菌作用。,31,二）致病性与免疫性,破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中可由伤口侵入人体，发芽繁殖而致病，但破伤风梭菌是厌氧菌，在一般伤口中不能生长，伤口的厌氧环境是破伤风梭菌感染的重要条件。窄而深的伤口（如剌伤），有泥土或异物污染，或大面积创伤、烧伤、坏死组织多，局部组织缺血或同时有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染，均易造成厌氧环境，局部氧化复原电势降低。有利于破伤风杆菌生长,32,破伤风梭菌能产生强烈的外毒素，即破伤风痉挛毒素（Tetanospasmin）或称神经毒素(Neurotoxin)。破伤风毒痉挛毒素是一种神经毒素，为蛋白质，由十余种氨基酸组成不耐热，可被肠道蛋白酶破坏，故口服毒素不起作用。在菌体内的痉挛毒素是单一和一条多肽链，分子量15万。破伤风毒素的毒性非常强烈，仅次于肉毒毒素。破伤风梭菌没有侵袭力,33,三）微生物学检验,标本采集,检验程序,检验方法和鉴定,34,五 气性坏疽病原菌,以组织坏死，水肿，产气及全身中毒的严重的急性外伤感染,包括很多-重点,产气夹膜梭菌,35,产气夹膜梭菌,生物学性状,形态和染色,培养特性,生化反应,致病性,36,为革兰氏阳性粗大梭菌，3411.5um。单独或成双排列，有时也可成短链排列。芽胞呈卵圆形，芽胞宽度不比菌体大，位于中央或末次端。培养时芽胞少见，须在无糖培养基中才能生成芽胞。在脓汁、坏死组织或感染动物脏器的涂片上，可见有明显的荚膜，无鞭毛，不能运动。,37,厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。在血液琼脂平板上菌落较大、灰白色、不透明，边缘呈锯齿状，多数菌株有双层溶血环，内环是毒素的作用，而外环不完全溶血是a毒素所致。不能消化已凝固的蛋白质和血清。,38,在疱肉培养基中肉渣不被消化，有时呈肉红色。在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时生成大量气体，将凝固的酪蛋白冲成海棉状碎块。管内气体常将覆盖在液体上的凡士林层向上推挤，这种现象称为“汹涌发酵，是本菌的特点之一。,39,40,能分解多种糖类，如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖，产酸产气，不发酵甘露糖或水杨苷，能液化明胶，产生硫化氢，,41,致病条件与破伤风梭菌相似。产气荚膜梭菌既能产生强烈的外毒素，又有多种侵袭性酶，并有荚膜，构成其强大的侵袭力，引起感染致病。,42,1气性坏疽,2食物中毒,3急性坏死性肠炎,43,1直接涂片镜检 从伤口深部取材涂片，革兰氏染色镜检，可见革兰氏阳性大杆菌，并有荚膜，常伴有其他杂菌，白细胞甚少，形态不规则，这是气性坏疽标本涂片的特点。,44,2别离培养与鉴定 取坏死组织制成悬液，接种于血球脂平板上或疱肉培养基中，厌氧培养，观察生长情况。取细菌培养物涂片镜检，并进一步用生化反应鉴定。,45,3动物实验 取培养液0.51ml给小鼠或家兔静脉内注射，10分钟后杀死动物，置3758小时。如动物躯体膨胀，即行解剖，可见脏器和肌肉内有大量气泡，尤以肝脏最为明显，称“泡沫肝。取内脏或心血涂片镜检或别离培养，可发现有革兰氏阳性大杆菌，并有明显荚膜。,46,无芽孢的厌氧菌,革兰氏阴性的杆菌,革兰氏阳性的杆菌,革兰氏阴性的球菌,革兰氏阳性的球菌,47,革兰氏阴性的杆菌 -正常菌群的组成局部,类杆菌属,48,
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