维生素C含量测定方法PPT资料

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,#,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,维生素C含量(hnling)测定方法,第一页，共30页。,维生素C（Vitamin C，Ascorbic Acid）又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素。食物中的维生素C被人体小肠上段吸收。一旦吸收，就分布到体内所有的水溶性结构中，正常成人体内的维生素C代谢(dixi)活性池中约有1500mg维生素C，最高储存峰值为3000mg维生素C。,第二页，共30页。,胶原蛋白的合成：胶原蛋白的合成需要维生素C参加，,治疗坏血病,预防牙龈萎缩、出血：牙龈是软组织，当缺乏蛋白质、钙、VC时易产生牙龈萎缩、出血。,预防动脉硬化：可促进胆固醇的排泄，防止胆固醇在动脉内壁沉积，甚至可以使沉积的粥样斑块溶解。,抗氧化剂：可以保护其它抗氧化剂，如维生素A、维生素E、不饱和脂肪酸，防止自由基对人体的伤害。,治疗贫血：使难以吸收利用的三价铁还原成二价铁，促进肠道对铁的吸收，提高肝脏对铁的利用率，有助于治疗缺铁性贫血。,防癌：丰富的胶原蛋白有助于防止癌细胞的扩散；VC的抗氧化作用可以抵御自由基对细胞的伤害防止细胞的变异；阻断亚硝酸盐和仲胺形成强致癌物亚硝胺。,保护作用：在人的生命活动(hu dng)中，谷胱甘肽和酶保证细胞的完整性和新陈代谢的正常进行至关重要。,功效(gngxio),第三页，共30页。,酶：谷胱甘肽是由谷氨酸、胱氨酸和甘氨酸组成的短肽，在体内有氧化还原作用。它有两种存在形式，即氧化型和还原型，还原型对保证细胞膜的完整性起重要作用。VC是一种强抗氧化剂，其本身被氧化，而使氧化型谷胱甘肽还原为还原型谷胱甘肽，从而发挥抗氧化作用。,提高人体的免疫力：白细胞含有丰富的VC，当机体(jt)感染时白细胞内的VC急剧减少。VC可增强中性粒细胞的趋化性和变形能力，提高杀菌能力。促进淋巴母细胞的生成，提高机体(jt)对外来和恶变细胞的识别和杀灭。参与免疫球蛋白的合成。提高CI补体酯酶活性，增加补体CI的产生。,促进干扰素的产生，干扰病毒mRNA的转录，抑制病毒的增生。,提高机体(jt)的应急能力：人体受到异常的刺激，如剧痛、寒冷、缺氧、精神强刺激，会引发抵御异常刺激的紧张状态。该状态伴有一系列身体，包括交感神经兴奋、肾上腺髓质和皮质激素分泌增多。肾上腺髓质所分泌的肾上腺素和去甲肾上腺素是有酪氨酸转化而来，在此过程需要VC的参与。,功效(gngxio),第四页，共30页。,维生素C在抗病毒和预防病毒性传染病方面具有很高的应用价值。如果我们普遍(pbin)认识到维生素C预防和治疗病毒传染病症的原理并且按量服用，就可以预防很多病毒的传播。,第五页，共30页。,目前研究(ynji)维生素C测定方法的报道较多，如滴定法、光度分析法、高效液相色谱法等，各种方法各有特点。特别是高效液相色谱法是近年来发展较快的一种方法。,第六页，共30页。,测定方法,滴定法测定,维生素,C,分光光度测,定维生素,C,高效液相色谱法,测定维生素,C,第七页，共30页。,2,6-二氯酚靛酚滴定法测定(cdng)维生素C含量,维生素C能还原2,6-二氯酚靛酚染料。,维生素C具有还原性的烯二醇基，我们(w men)通过氧化还原滴定来测定维生素C,第八页，共30页。,2，6-二氯靛酚法原理(yunl),2,，,6-,二氯靛酚是一种染料，其氧化型在,酸性,介质中为,红色,，,碱性,介质中为,蓝色,，与,Vc,反应后，生成无色的还原型酚亚胺，因此，在酸性条件下，用,2,，,6-,二氯靛酚滴定至溶液显,玫瑰红色,，即为终点；无需另加指示剂。,第九页，共30页。,取本品适量（约相当于Vc50mg），用适量水溶解，置100ml量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液20ml,再用水稀释置刻度，摇匀；,精密量取稀释液适量（约相当于Vc2mg）置50ml的锥形瓶中,加偏磷酸-醋酸试液5ml,用2,6-二氯靛酚滴定液滴定,至溶液(rngy)显玫瑰红色,并持续5s不褪；,空白试验：取偏磷酸-醋酸试液5.5ml，加水15ml，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定。,计算：(V-V0)F T W,W 标示(bio sh)量,标示(bio sh)量%=,反应摩尔比,100,测定方法,第十页，共30页。,维生素C 2,6-二氯酚靛酚 维生素C 2,6-二氯酚靛酚,（还原型）（氧化(ynghu)型，粉红色）（氧化(ynghu)型）（还原型）,+,+,=,2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液(rngy)中显蓝色，在酸性溶液(rngy)中呈红色，被还原后红色消失。,第十一页，共30页。,碘量法,原理：由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的还原性，能被碘氧化(ynghu)，用碘滴定VC,EC6H6O6/C6H8O6=0.18 ,EI2/I-=0.535,终点：淀粉为指示剂，溶液出现稳定的蓝色即为终点,反应式：,第十二页，共30页。,注意！,测定时：加HAC使溶液呈弱酸性,原因:,(1)Vc还原性很强，在空气中很容易被氧化，在碱性介质(jizh)中更甚,(2)I2在碱性介质(jizh)中会发生歧化反应,加HAC可减少VC的副反应，避免实验误差,第十三页，共30页。,电位(din wi)滴定法,原理：根据滴定过程中电池电动势的变化来确定反应终点.,Pt为指示电极，甘汞(n n)作参比电极,E池E+-E-+E液接电位EI2/I-+k(常数),第十四页，共30页。,电位(din wi)滴定法,右图：电位滴定法基本(jbn)仪器装置,计算式：(与碘量法相同),Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%,优点：,解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法指示终点的问题,第十五页，共30页。,2，4一二硝基苯肼分光(fn un)光度法,原理：,维生素C在空气中尤其(yuq)在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸,反应式：,第十六页，共30页。,pH5,脱氢抗坏血酸内环开裂(ki li)，形成二酮古洛糖酸,二酮古洛糖酸,第十七页，共30页。,脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4二硝基苯肼生成可溶于硫酸(li sun)的脎,脎在500nm波长有最大吸收,脎的结构：,第十八页，共30页。,分光(fn un)光度法,样品溶液与VC标准溶液按上述方法同样(tngyng)处理,500nm处测吸光度,下图：721型分光光度计,第十九页，共30页。,差示旋光法,维生素,C,片在不同,PH,值的溶液中旋光度有显著差异，而片剂辅料旋光度保持不变,差示旋光法消除辅料的影响，直接测出该制剂的含量,第二十页，共30页。,差示旋光法,1,）标准溶液的配制,准确称取维生素,C,精制品,5.0g,，乙二胺四乙酸钠,0.37g,置于,100mL,容量瓶中,用新沸冷却的蒸馏水溶解,加水到指定刻度,配制成,50mg/mL,的维生素,C,标准溶液。,2,）比旋光度与溶液,pH,值的关系,量取,10.0mL,维生素,C,标准液于,50mL,量瓶中,用水稀释至,50mL,。测定溶液的,pH,及旋光度,然后逐次分批加入氢氧化钠固体,(,每次约,50mg),每次溶解后,测定一次溶液的,pH,及其旋光度,得到维生素,C,溶液的,pH,及旋光度关系,第二十一页，共30页。,差示旋光法,选定(xun dn)pH为和,第二十二页，共30页。,2）差示旋光度与溶液浓度关系,吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的维生素C标准液各两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用,pH2.2的盐酸盐缓冲液,定容；一份用,pH6.2的磷酸盐缓冲液,定容，静置3min后,用220mm测定管，以前者为空白，测定后者的差示旋光度(a)。,文献结果,：线性方程为,a=0 205*C+005，r=09964,3）辅料干扰试验,取混合辅料20mg(淀粉、硬脂酸镁、E,D,TA、糊精等按处方比例混匀)两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用,pH2.2的盐酸盐缓冲液,定容,一份用,pH6.2的磷酸盐缓冲液,定容,滤去不溶物,滤液在两种pH值测定差示旋光度。,文献结果,：辅料的差示旋光度为零，说明辅料对维生素C含量的测定不干扰。,第二十三页，共30页。,4）稳定性试验,同一测试样品，在120min内，每隔3min测定一次差示旋光度。,文献结果,：差示旋光度基本不变,5,）回收率试验,精密称取维生素,C,精制品,500.0mg,两份，分别置于,50mL,容量瓶中，各加入,20mg,辅料，分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成,50mL,溶液，测定差示旋光度。,文献结果,：平均回收率为,97.8,，,变异系数,cv,为,1.03,第二十四页，共30页。,6,）样品测定,取维生素,C,片剂,10,片，称重研碎后分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成,50mL,溶液,(,相当于含,Vc 20mg/mL),，滤去不溶物，测定滤液的差示旋光度，根据回归方程计算其含量。,第二十五页，共30页。,薄层(bo cn)扫描法,维生素C具有 较强还原性，可使蓝色染料2，6-二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺，而本身(bnshn)被氧化成去氢抗坏血酸，利用此特征进行薄层扫描法测定含量。,第二十六页，共30页。,2，6-二氯靛酚是一种染料，其氧化型在酸性介质中为红色，碱性介质中为蓝色，与Vc反应后，生成无色的还原型酚亚胺，因此，在酸性条件下，用2，6-二氯靛酚滴定至溶液显玫瑰红色，即为终点；,维生素C 2,6-二氯酚靛酚 维生素C 2,6-二氯酚靛酚,一旦吸收，就分布到体内所有的水溶性结构中，正常成人体内的维生素C代谢(dixi)活性池中约有1500mg维生素C，最高储存峰值为3000mg维生素C。,0mg两份，分别置于50mL容量瓶中，各加入20mg辅料，分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液，测定差示旋光度。,（还原型）（氧化(ynghu)型，粉红色）（氧化(ynghu)型）（还原型）,VC可增强中性粒细胞的趋化性和变形能力，提高杀菌能力。,促进干扰素的产生，干扰病毒mRNA的转录，抑制病毒的增生。,标示(bio sh)量%=,肾上腺髓质所分泌的肾上腺素和去甲肾上腺素是有酪氨酸转化而来，在此过程需要VC的参与。,食物中的维生素C被人体小肠上段吸收。,维生素C在空气中尤其(yuq)在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸,第二十三页，共30页。,提高机体(jt)的应急能力：人体受到异常的刺激，如剧痛、寒冷、缺氧、精神强刺激，会引发抵御异常刺激的紧张状态。,原理：由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的还原性，能被碘氧化(ynghu)，用碘滴定VC,维生素C能还原2,6-二氯酚靛酚染料。,如果我们普遍(pbin)认识到维生素C预防和治疗病毒传染病症的原理并且按量服用，就可以预防很多病毒的传播。,（,1,）试纸的制备,2,6-,二氯靛酚钠,(DCP-Na),溶于无水乙醇配成,0.05%,的,DCP-Na,乙醇溶液，,滤纸在盛有,DCP-Na,乙醇溶液的展开缸中浸渍,3min,，边浸边摇展开缸，使滤纸均匀着色，充分被染料溶液所饱和。取出悬挂于暗处，晾干后，立即放入干燥器中避光保存，备用。,操作方法与结果(ji gu),第二十七页，共30页。,（,2,）缓冲溶液的配制,称取柠檬酸水合物,10g,，放入,1000ml,容量瓶中，加入,1M,氢氧化钠,420ml,，并用蒸馏水稀释至刻度，此溶液的,pH,应为,3.5,。否则，用酸或碱调整,pH,值，保存于冰箱中。,3,）扫描条件确定,在制备的染料试纸上定量点上维生素,C,对照品进行扫描，维 生素,C,在,290nm,处有最大吸收，,420nm,处无吸收,，故选择,1,=290nm,，,2,=420nm,双波长反射式锯齿扫描。,第二十八页，共30页。,4,