国内外奶牛胚胎移植技术研究及产业化进展

,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Company Logo,*,Click to edit Master title style,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,LOGO,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,LOGO,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,国内外奶牛胚胎移植技术研究及产业化进展,北京安伯胚胎生物技术中心,余文莉,第一局部,奶牛胚胎移植及相关技术的,研究进展,奶牛胚胎移植技术,定义,是指对生产性能优良和遗传性稳定的母牛经过超数排卵处理后，将多出自然排卵数几倍的受精卵取出，或者将通过体外受精方式获得的胚胎，分别移植到生理状态相同的受体母牛体内，使之产出优良后代的技术。,奶牛胚胎移植技术的意义,1,充分发挥优良母畜的繁殖潜力，成倍提高繁殖效率,2,用MOET技术培育种公牛，加大选择强度，缩短世代间隔,3,代替活畜进行洲际、国际引种,4,建立基因库，保存品种资源,奶牛胚胎移植技术的关键技术环节,超数排卵技术,非手术胚胎采集技术,胚胎冷冻/解冻技术,受体牛同期发情技术,非手术胚胎移植技术,以胚胎移植为根底的相关胚胎生物技术,胚胎移植,A,D,B,C,E,其它,体外受精技术,胚胎性别,鉴定技术,胚胎分割技术,胚胎性别,控制技术,国内外胚胎移植及主要相关生物技术的研究成果时间表,技术名称,国内,国际,时间差,牛超数排卵,1978 中科院遗传所和上海市奶牛公司,1940 Casida,38年,牛非手术冲胚,1978中科院遗传所和上海市奶牛公司,1972 Sugie,6年,胚胎程序化冷冻,1982中科院遗传所和上海市奶牛公司,1972 Whittingham,10年,胚胎玻璃化冷冻,1993 朱士恩,1985 Rall,8年,胚胎分割,1987 窦忠英,1981 Willadsen,6年,胚胎嵌合体,1989 丛笑倩,1984 Bradley,5年,牛体外受精,1989 旭日干,1978 Brackett,11年,PCR胚胎性别鉴定,1992 曾溢滔等,1990 Herr,2年,牛活体采卵,1999 刘云海,1982 Sirard,17年,体细胞克隆,2000 张涌,1997 Wilmut,3年,牛胚胎移植主要专项技术国内外水平比较,技术名称,美国、加拿大,国内,超数排卵获可用胚*,5.56.5枚,56枚,鲜常规胚胎移植妊娠率*,55%65%,50%60%,冷冻常规胚胎移植妊娠率*,50%60%,40%50%,PCR性别鉴定准确率,98%2%,98%2%,性控胚胎雌性率,85%95%,85%95%,取样后鲜胚移植妊娠率*,55%65%,50%55%,取样后冻胚移植妊娠率*,55%65%,40%50%,性控胚胎妊娠率*,55%65%,40%50%,*饲养管理水平对技术指标影响较大,奶牛胚胎移植及相关技术,研究进展,1.超数排卵技术,牛超数排卵的目的：最大限度地获得受精卵和可用胚胎,牛的超排反响和胚胎质量变异性很大,促性腺激素种类、批号、处理时间、剂量、年龄、季节、品种,处理时卵巢生理状态、营养状况、繁殖状态和重复超排次数等,牛的超排方法：CIDR+FSH+PG(16天),目前的研究重点：提高超排效率,1、重复超排：间隔；超排次数,2、抑制素免疫提高牛超排效率,3、与超排有关的基因位点的研究,重复超排效果的比较(数据来自北京安伯胚胎生物技术中心),次别,处理牛数,超排有效,n%,平均,回收胚数,平均,可用胚数,平均,退化胚数,平均,未受精数,第一次,84,78,92.9%,10.764.51,a,7.263.65,a,2.382.47,a,1.121.51,a,第二次,32,29,90.6%,10.595.94,a,7.795.04,a,2.001.73,a,0.790.94,A,第三次,29,28,96.6%,10.364.86,a,6.254.06,a,2.572.65,a,1.542.53,ABab,第四次,20,19,95.0%,12.266.66,a,7.264.27,a,2.533.67,a,2.473.76,Bb,第五次,13,12,92.3%,11.427.57,a,7.085.71,a,2.252.01,a,2.082.15,ABab,注：同列上标大写字母相同者表示差异不显著P0.05,2.同期发情技术,不同牛同期发情方案的效果比较*李树静等，2002年,*牛同期发情的目的是便于人工受精和胚胎移植，更适于集约化管理。,受体牛营养状况对同期发情效果有显著影响。,方法,1次或2次PG肌注,CIDR+PG,CIDR+E2+PG,备注,原理,溶黄体,延长黄体期,延长黄体期,外周血液孕酮水平迅速下降,发情率,53.1%（1次PG）；,81.0%（2次PG）,83.2%,88.4%,发情时间,注射后4896h,撤栓后3672h,撤栓后3648h,同期化程度,发情率均匀分布在注射后4896h,85%以上在撤栓后48h内发情,95%以上在撤栓后48h内发情,黄体合格率,86.3%,93.8%,82.5%,移植妊娠率,43.7%,58.3%,48.8%,优点,成本低,发情较集中，可精确安排工作量；受体牛利用率高,发情高度集中，可精确安排工作量,缺点,发情分散，不易精确安排工作量,成本高,成本高,3.胚胎冷冻技术,胚胎程序化冷冻(植冰):,1.5M乙二醇0.1M蔗糖，直接解冻移植,进口胚胎检疫条例要求：,透明带完整；,0.1%胰蛋白酶洗10次；,在全封闭的细管中冷冻。,胚胎玻璃化冷冻(玻璃化溶液、提高降温速度)：,OPS玻璃化冷冻,细管法,冷冻环法,滴冻法,微细玻璃管法、,封闭式拉长塑料细管法,4.胚胎性别鉴定及控制技术,胚胎性别鉴定技术：,PCR法电泳和非电泳鉴定：,双引物一步法PCR扩增，耗时65分钟。灵敏度、准确率高、污染率和不反响率低，适于在生产现场应用。,2002年，Hasler对7-8日龄的3,964枚体内胚胎及1181枚体外胚胎进行了性别鉴定，在妊娠后经B超测试获得的准确率为雄性为98.7%、雌性为94.4%。,LAMP法：,环-媒恒温扩增法，比PCR法更为快速简便，无需电泳，肉眼即可区分，但鉴定准确率不高，容易产生非特异性扩增。,胚胎性别控制技术：,用别离后的X或Y精子生产体内或体外受精胚胎,PCR胚胎性别鉴定与X精子胚胎性别控制技术在奶牛中的应用效果比较 体内受精冷冻胚胎，20022021年，李树静等,胚胎类型,常规胚胎,PCR性别鉴定胚胎,X精子性别控制胚胎,特点,对受精后67天的早期胚胎进行取样，分析DNA,用分离后的精子输精，获得近90性别一致的后代,超排获得的可用胚胎数量,56枚,(育成牛、经产牛),56枚,(非鉴定，育成牛、经产牛),35枚,(育成牛),得到一头母牛犊所需胚胎数量,5枚,5枚(非鉴定),3枚(X性控胚胎),得到一头母牛犊所需受体母牛数量,6头,3头,4头,移植妊娠率,45%50%,45%50%,3545%,产母犊率,4550%,9599%,7585%,获得1头6月龄母牛犊的成本,14260元,8140元人民币,6480元,优点,操作简便，可任意选择种公牛,准确率高，可任意选择种公牛,操作简便，雌性率较高,缺点,成本高，效率低,操作较烦琐，耗时长，成本高,对种公牛的选择有局限性,不同类型胚胎移植后对妊娠率和产犊情况的影响,注：i.同一列数值中具有相同字母上标示差异不显著(P0.05)；,ii.同一列数值中具有不同字母上标示差异极显著(P0.05),。,同一列数值中具有不同字母上标表示差异极显著,(,p,0.05)。,同一列数值中具有不同字母上标表示差异极显著(,p,0.01)。,同一列数值中具有相同字母不同大小写之间表示差异显著(p0.05),*表示胚胎移植结合人工授精的繁育技术路线。,奶牛胚胎移植技术的效益表达在哪儿？,开展模式,高产奶牛,优秀种公牛,超数排卵,常规冻精,X,冻,精,性控雌性体内胚胎,性鉴雌性体内胚胎,性鉴雄性体内胚胎,常规胚胎,性别鉴定,胚胎组织块,移植到各地区同期发情的合格受体牛,对应的胚胎冷冻解冻技术,高 产 优 质 母 牛 犊,计算机管理系统,Thank You!,SJRnJ$phWk%D4MJcC(M*-2aoVlFsCRUuuCBacqyjA(qA90$DRhUaq6PyIq-NQoSg+fb7V0A2ph+OEWOwn(9AVUgE%CLBp6FrhBhH#iz9&KtGDEKYkPASTZRfvDV4VT-CX#!PcDN8eh+bDKcmK1-8U45tiheDoH59ag47(HHTdlgjK$l7mQ620tHG)#FI(3C-F1wZR&XbVwSPPFCH8*pKdJ0$lBkt3yMJeOFJWOMn)GU6DHPiak8mtF4K51BtJZxc1o&ICUHx1xguqX)hPLbGYNHl8lqQ1-r-CXG$!6TcB41LmJE!oNOaN8Z8am0gPe$1M*3OJ49ZxcDwK4-eu6azq2OpyAFupHgVxXzcXL4clLJ+98%&3nIiP%-h)8fd7c-rOrtmMKZQ-rI0o$)Fx1lusqDh#E5bGr+G4IA)gDbekrgGgC40KlGzOl1tScQ&B7mPOsuBkcitC9j20lecQSzauvtNr1g(HfhpdYOIXz*U+HfYvPZQ!ZqlsKl#OuUDyoHGregJm+xxTm8pgzGl2U!Q0-D6Q#z8eQh)r$#xRZqitlU2sFcvz1NCxH)nR)sc$5piZHqbgKn022RthAuhfDAmf3hI(w*d4EFFhr6pieOTTRpp&M-UdSANWM1U48MNiJbtG&7qvCTptTwqNGClJluWF(e(j0&Vq3TB+AlnO-xt+BE4WIm%0O5llUGhZT0+C4!OZsXY#x1zmcay3#CMCooU$%5KX!2)!)0PBsVAZFBdGdGu*yHsdTrzjy*#-Iz6Dhgkb!5d2tctG7d6udu$6#984ePxkzf&O6UvokRQBarCh(0BHl%t#D7DnBXNjWsV0)BoMl-xC&uTQ5EAx+bS3JJZZHty9j(ZxUEbc5fIFFmB$&PH-!otH)Rj*yKd$BWCw9CxoLQ9icDi#lrBLfBk3JocyY%-W5$)aNs(dDUXD8SOfAY3&4fn#rcKwGgQ$3sMEG0kLW5blM#v6eMsZF9F81(JiFpoavgShBo-UR79v4y+mgzc$*x!tiV*aM4&r6(jtN#O)tW%yjsZW0p*hkr8%JHV6q(H7Z31GinsS0*nEG(uSQ5G07Io12bwE1IEkJ)3)o9PhWQj#0NDD(fy+BKTFmfBxliF0iuc#9HKDz0f)5ScjFurqTdHWlZA#UPLXz#fSQsCWNBaICGtYyH2hNXox$egenHv9m#2tn&(drlO7w2uLAsTME$-y!IcsU&Hc*FBH2ijLTV+GW&aTHHBmhBMNkuXp1YcFxV+lwfGILiUnGonl3m#-FHdGJT(a!BHtG3UDty6xItUZAC)306BEvsX0rPKuhrQGoIdroU$RAoJ%BA2k+DH%WmYd5aYWFS+aBd!*AwmZlhtKXjs+T8XKoMsj4%+IO(LqDi6huxv)AYpigaRSDsDgNb#uAH*yUK8NonXm%LK