项目五TLC技术教案课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,项目五,TLC,技术,在色谱法中，静止不动的一相（固体或液体）称为固定相（,stationary phase,）；运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相（,mobile phase,）,.,第1页/共21页,二、薄层色谱构成,1,、固定相,硅胶,为使用最广泛的薄层材料,氧化铝,有碱性、中性、酸性,硅藻土,为化学中性吸附剂,纤维素,天然多糖类,聚酰胺,为特殊类型有机薄层材料，对能形成氢键的物质有特别的选择性,。,第2页/共21页,2,、载板玻璃板,放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净，干燥，置干燥器中备用。要求光滑、平整、洗净后不附水珠。,第3页/共21页,3,、黏结剂,无机黏结剂石膏（硫酸钙），添加石膏的吸附剂以字母,“,G,”,表示。没有黏结剂的吸附剂以字母,“,H,”,表示。,有机黏结剂,羧甲基纤维素钠（,CMC,）、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸作显色剂。,第4页/共21页,4,、荧光黏结剂,在吸附剂中添加某种荧光指示剂，常用的荧光指示剂,在,254nm,紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、硫化镉、阴极绿等。,在,366nm,有荧光的指示剂如彩蓝等。,含有荧光指示剂的商品吸附剂以,“,F,”,表示，并以下标注明其激发光波长。例 硅胶,HF,254,第5页/共21页,薄层板活化（可直接用商品,TLC,，不需活化）,涂布后的薄层先在室温下晒干，在使用前置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有不同，如：,硅胶,110 1h,氧化铝,110 30min,三、,TLC,操作步骤,第6页/共21页,制样,选择溶剂，并加热溶解少量样品（约,0.01g,即可）,要求选择溶解样品的溶剂有高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。,第7页/共21页,点样,用酒精灯拉细的毛细管蘸取少量样品溶液点在硅胶板上，,样品点应尽可能小。,点样量应适中，过浓会引起斑点拖尾，分离度变差，以最小检测量的几倍几十倍为宜。,采用多次点样法，第二次点加样应待前一次点样的溶剂挥发后再进行。,同一快硅胶板上同时点多个样时，每个样需点在同一高度,手工点样工具：定容玻璃毛细管（,1,5ul,）。,第8页/共21页,展开,多数采用直线形上行展开，薄层板水平角度以,75,为最佳。展开距离一般为,10-15cm,。,直立式层析缸示意图,1-,层析缸；,2-,薄层板,3-,展开剂饱和蒸气；,4-,展开剂,第9页/共21页,检测,物理方法,紫外光下显示荧光或荧光淬灭,第10页/共21页,检测,化学方法,加化学试剂显色，要求显色稳定、持久、专属、灵敏、线性良好。,斑点定位方法,碘蒸气法,灵敏、简便，为通用显色法。将碘结晶放在密封的展开缸中，碘的升华，使缸内充满紫色的碘蒸气。将展开后的板挥干溶剂置碘缸中至薄层色谱上出现棕色斑点。,第11页/共21页,保留参数（,Rf,值）计算,概念：用来表征斑点位置的基本参数是保留因子，通常称作,比移值，,用,Rf,表示。,计算方法：,R,f,=Ls/L,原点,S,参比,样品,Ls,L,（前沿）,Lr,原点,参比,样品,前沿,第12页/共21页,四、流动相与展开体系选择,液,-,固吸附 在该色谱中，溶质的保留和分离选择性决定于三个因素：,溶,解,能,力,流动相,溶质,吸附,剂,相互作用,竞争,第13页/共21页,1,、溶剂强度参数及溶剂选择,溶剂的强度参数,定义：溶剂强度参数用,表示。流动相强度越高，表示它与吸附剂相互作用力强。溶质的,Rf,值就越大。为得到满意的分离，选用的流动相使溶质的,Rf,值在,0.3,0.7,之间为宜。,溶剂强度也可用其在水中的溶解度参数,来表示。,第14页/共21页,一些常用溶剂的溶剂强度与溶解度参数,溶剂,溶剂,正己烷,0.01 7.3,石油醚,0.02 8.2,苯,0.32 9.2,乙醚,0.38 7.4,二氯甲烷,0.42 9.6,正丙醇,0.82 10.2,正丁醇,0.70 /,四氢呋喃,0.57 9.1,乙酸乙酯,0.58 8.6,氯仿,0.40 9.1,甲乙酮,0.51 /,二氧六环,0.56 9.8,吡啶,0.71 10.4,丙酮,0.50 9.4,乙醇,0.88 /,乙酸,1.00 12.4,二甲亚砜,0.75 12.8,甲醇,0.95 12.9,乙二醇,1.11 14.7,甲酰胺,/17.9,第15页/共21页,2,、溶剂选择原则,增加溶剂强度，则,Rf,值增大，但可能降低分离能力,流动相中较强组分的体积比小于,5%,或大于,50%,，选择性最大。,用乙醚或甲醇代替流动相中的一种较强组分，由于形成氢键可改善选择性。,若出现斑点拖尾，可向流动相中加少量水，或降低薄层活性，有利于改善分离。,第16页/共21页,药物鉴别采用标准对照法,含量测定主要用于中药有效成分的分析,杂质检查,杂质对照品法,高低浓度法,药物标准品对照法,五、应用,第17页/共21页,杂质检查方法,杂质对照品法（,A,）,供试品自身对照法（高低浓度法）（,B,）,对照物质法（,C,）,样 对,样 对,样 对,A B C,第18页/共21页,第19页/共21页,任务,1,、检验某样品的纯度,样品,1,：溶解少量样品,1,进行薄层检测并计算,Rf,值,溶剂：乙醇,展开剂：,石油醚,：乙酸乙酯,=4,：,6,（体积比）,任务,2,、混合物的分离,样品,2,：,溶解少量样品,2,进行薄层检测并计算,Rf,值,溶剂：,95%,乙醇,展开剂：石油醚：,乙酸乙酯,=3,：,7,（体积比）,任务,3,、选择最佳,Rf,值（,0.3,0.7,）,样品,3,：,溶解少量样品,2,进行薄层检测并计算,Rf,值,溶剂,：,95%,乙醇,展开剂：自己配置,第20页/共21页,