微生物的无菌操作及接种技术课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,完整版课件,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,完整版课件,*,微生物无菌操作技术,接种技术,工业生产中的微生物接种,微生物无菌操作及接种技术,1,完整版课件,微生物无菌操作技术微生物无菌操作及接种技术1完整版课件,一、,微生物无菌操作技术,无菌操作,目的：,保证待检物品不被环境中微生物污染；,防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。,无菌操作技术：,指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。,2,完整版课件,一、微生物无菌操作技术无菌操作目的：无菌操作技术：指在微生物,1接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒,6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀,一、,微生物无菌操作技术,无菌操作材料,：,接种工具,3,完整版课件,1接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 一、微,一、,微生物无菌操作技术,无菌操作材料,：,材料,器械和用品：酒精灯、记号笔、标签、火柴、灭菌培养皿、无菌水、试管架,菌种,培养基：,4,完整版课件,一、微生物无菌操作技术无菌操作材料：4完整版课件,二、原理：,无菌技术：,指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。,接种：,将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程。,微生物无菌操作技术与接种技术,5,完整版课件,二、原理：微生物无菌操作技术与接种技术5完整版课件,接种的准备工作,无菌环境的要求与保持,进入无菌室前的准备,无菌操作的要求,接种的操作方法,二、微生物接种技术,6,完整版课件,接种的准备工作二、微生物接种技术6完整版课件,无菌环境,无菌室,超净工作台,无菌环境的要求与保持,（一）接种的准备工作,7,完整版课件,无菌环境无菌室无菌环境的要求与保持（一）接种的准备工作7完整,（1）无菌室的结构：,应有更衣间、缓冲间、操作间,应有良好的通风条件，安装空调设备及过滤设备,无菌环境的要求与保持,1、无菌室,8,完整版课件,（1）无菌室的结构：无菌环境的要求与保持1、无菌室8完整版课,无菌室的结构,9,完整版课件,无菌室的结构9完整版课件,（2）无菌室的消毒和防污染,无菌室内空气测试应基本达到无菌。,每日（使用前）紫外线照射（12小时）.,每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）.,每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。,定期作实验室沉降菌计数，以检查无菌室微生物生长繁殖动态。,无菌环境的要求与保持,10,完整版课件,（2）无菌室的消毒和防污染无菌环境的要求与保持10完整版课件,2、超净工作台,超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程度的保护以防污染并保护操作者。,原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分，现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。,无菌环境的要求与保持,11,完整版课件,2、超净工作台 超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的,垂直流超净工作台,水平流超净工作台,垂直流超净工作台,12,完整版课件,垂直流超净工作台 水平流超净工作台 垂直流超净工作台 12完,超净台的使用与维护,风速保持在0.32-0.48米/秒,使用前打开紫外灯照射4060min,开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用,75%,的酒精或,0.5%,过氧乙酸喷洒擦拭消毒工作台面。,使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭；,请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物；,使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯；,使用完毕后，,用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照射,15min,.,定期做无菌试验，以测定净化台是否符合无菌要求。,无菌环境的要求与保持,13,完整版课件,超净台的使用与维护风速保持在0.32-0.48米/秒无菌环境,3、无菌器材准备,灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等,.,消毒器材：接种试管、无菌室内的凳子、试管架、天平、工作台等,无菌环境的要求与保持,14,完整版课件,3、无菌器材准备灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等.无菌,（1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定；,（2）用紫外线灭菌处理3060min；,（3）检查无菌器材是否完备；,（4）实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用75酒精棉球将手擦干净。,（5）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、鞋。,进入无菌室前的准备,15,完整版课件,（1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定；进入无菌室前的准备,（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作；,（2）使用玻璃器皿应轻取轻放。,（3）在火焰上方操作；,（4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌；,（5）在接种培养物时，协作应轻、准,。,（6）不能用嘴直接吸吹吸管。,（7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。,无菌操作要求,16,完整版课件,（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作；无菌操作要求16完整,无菌操作要求,17,完整版课件,无菌操作要求17完整版课件,无菌操作要求,18,完整版课件,无菌操作要求18完整版课件,接种的基本程序,常用接种方法,斜面接种,划线接种,液体接种,穿刺接种,（二）接种的操作方法,19,完整版课件,接种的基本程序（二）接种的操作方法19完整版课件,1、接种的基本程序,灭菌接种环,沾取标本,接种,灭菌接种环,杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本,杀灭接种环沾染的微生物，以免污染环境,操作需在无菌室或超净工作台内进行,无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。,实验使用的物品使用前后需严格灭菌,（二）接种的操作方法,20,完整版课件,1、接种的基本程序灭菌接种环沾取标本接种灭菌接种环杀灭接种环,2、常用的接种方法,斜面接种,划线接种,液体接种,穿刺接种,（二）接种的操作方法,21,完整版课件,2、常用的接种方法斜面接种（二）接种的操作方法21完整版课件,斜面接种：,从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的接种方法。,用于,好气性微生物,的接种。,2、常用的接种方法,22,完整版课件,斜面接种：2、常用的接种方法22完整版课件,标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名,点燃酒精灯。,接种：,（1）手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，,尽量放平,。,（2）旋松管塞,（3）接种环灼烧灭菌,斜面接种,23,完整版课件,标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名 斜面接,斜面接种,（4）拔管塞：用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫),24,完整版课件,斜面接种（4）拔管塞：用右手的无名指、小指和手掌边先,斜面接种,（5）取菌:接种环冷却，轻沾取少量菌体或胞子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环碰到管壁，取出后带菌接种环不可通过火焰。,25,完整版课件,斜面接种25完整版课件,斜面接种,（6）接种:,在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。从斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培养基。,有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。,26,完整版课件,斜面接种26完整版课件,斜面接种,(7)塞管塞：取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。,(8)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。,27,完整版课件,斜面接种 (7)塞管塞：取出接种环，灼烧试,斜面接种示意图,28,完整版课件,斜面接种示意图28完整版课件,由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。,操作方法：,与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉塞再轻轻摇匀。,如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种,2、常用的接种方法,液体接种,29,完整版课件,由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。2、常,2、常用的接种方法,划线,接种,目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌、活菌计数。,方法：,分区划线法：适用于含菌量较多的标本,连续划线法：适用于含菌量较少的标本,30,完整版课件,2、常用的接种方法划线接种目的：使混合的细菌呈单个分散生长,2、常用的接种方法,划线,接种,31,完整版课件,2、常用的接种方法划线接种31完整版课件,分区划线法,第一区划线,灭菌接种环,第二区划线,灭菌接种环,第三区划线,灭菌接种环,2、常用的接种方法,划线,接种,32,完整版课件,分区划线法第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线,连续划线法,2、常用的接种方法,划线,接种,33,完整版课件,连续划线法2、常用的接种方法划线接种33完整版课件,用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。,用于,厌气性,细菌培养、检查细菌的,运动能力、,保藏菌种,。,只适宜于细菌和酵母的接种培养,2、常用的接种方法,穿刺,接种,34,完整版课件,用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深,穿刺接种方法：,1)标记,2)点燃酒精灯,3）接种,（1）手持试管,（2）旋松棉塞,（3）接种针灼烧灭菌，把在穿刺中可能伸入试管的其他部位也灼烧灭菌,2、常用的接种方法,穿刺,接种,35,完整版课件,穿刺接种方法：2、常用的接种方法穿刺接种35完整版课件,（4）拔出棉塞,（5）取菌：用冷却接种针的针尖沾取少量菌种,（6）穿刺：将接种针自培养基中心平稳、快速垂直刺入培养基，至接近试管底部，然后沿接种线拔出,（7）塞上棉塞,（8）接种针灼烧灭菌,2、常用的接种方法,穿刺,接种,36,完整版课件,（4）拔出棉塞2、常用的接种方法穿刺接种36完整版课件,1、什么是无菌技术？,2、如何做好无菌室的消毒和防污染工作？,3、如何做好超净台的使用与保养？,4、无菌操作的目的是什么？,5、进入无菌室前要做好哪些准备工作？,6、验操作过程的无菌操作要求包括哪些内容？,7、,接种时，为何要尽量使试管平放？,8、穿刺接种时能否将接种针直接穿透培养基？,问题和讨论,37,完整版课件,1、什么是无菌技术？问题和讨论37完整版课件,工业生产中培养的菌种接入种子罐时，一般先制成菌悬液。,常用的方法有压差法、火焰封口法等。,1、火焰封口法,种子罐的接种口周围设有沟槽，接种时先在沟槽里注入少,量酒精，然后用火焰点燃酒精，使接种口被包围在一堆火,焰之中，接着将菌悬液倒入种子罐中即可。,工业生产中的微生物接种,38,完整版课件,工业生产中培养的菌种接入种子罐时，一般先制成菌悬液。,2、压差法,先用棉花球蘸消毒剂覆盖在种子罐接种口的橡皮塞上，消毒5 10min，将连接在盛有菌悬液的容器上的接种针头迅速插入接种口的橡皮小孔中，然后平衡种子罐与盛菌悬液的容器之间的压力，接着降低种子罐的压力，菌悬液就会注入到种子罐里。接种完后，再用消毒剂拭净接种口的小孔。,工业生产中的微生物接种,39,完整版课件,2、压差法 工业生产中的微生物接种39完整版课件,感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络，,如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！,感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络，,