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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2015/7/3,文献,阅读,1,Impeding Macrophage Entry into Hypoxic Tumor Are,as,by Sema3A/Nrp1 Signaling Blockade Inhibits Angiogenesis and Restores Antitumor Immunity,（,通过阻断Sema3A/Nrp1信号通路抑制巨噬细胞进入肿瘤低氧区,以抗血管生成并恢复抗肿瘤免疫,）,Andrea Casazza,Damya Laoui,Mathias Wenes,et al.,Cancer Cell,24,695709,December,9,2013,2024/11/13,1,文献阅读,Impeding Macrophage Entry into,2024/11/13,2,文献阅读,2023/8/62文献阅读,研究背景,肿瘤相关巨噬细胞,(,TAM）：浸润至肿瘤组织中的巨噬细胞，通常与肿瘤的不良预后相关。大多数情况下，,TAM,，预后越差；少数情况，则相反。,TAM,具有促肿瘤（,M2,型）和抗肿瘤（,M1,型）的双重作用。,M2,促血管生成、抑制免疫反应；,M1,促炎症反应，杀伤肿瘤细胞。,功能相反的,TAM,占据肿瘤组织的不同位置。,低氧区,TAM,促肿瘤，常氧区,TAM,抗肿瘤,巨噬细胞受到微环境中,特殊信号,的,“,训导,”,？,2024/11/13,3,文献阅读,研究背景肿瘤相关巨噬细胞(TAM）：浸润至肿瘤组织中的巨噬细,研究背景,Nrp1是Sema3A的受体，,已有研究,表明阻断Nrp1可抑制肿瘤生长，通过抑制多种癌细胞的血管生成及增殖。,前期研究,表明，,Nrp1,可作为促血管生成的巨噬细胞（,M2,）标记物。,2024/11/13,4,文献阅读,研究背景Nrp1是Sema3A的受体，已有研究表明阻断Nrp,研究思路,2024/11/13,文献阅读,5,Nrp1,作为,Sema3A,受体,Nrp1,作为促血管生成巨噬细胞标记物，低氧区的巨噬细胞促血管生成,通过,阻断Sema3A/Nrp1信号,是否可以,抑制巨噬细胞进入,肿瘤,低氧区,，从而起到,抗,血管生成并恢复抗,肿瘤,免疫的作用？,阻断,Nrp1,，抑制血管生成，抗肿瘤生长,研究思路2023/8/6文献阅读5Nrp1作为Sema3A受,1.,巨噬细胞中,NRP1,缺失抑制肿瘤生长,2.NRP1,缺失阻止巨噬细胞进入低氧区,8.Sema3A,限制了,TAM,在肿瘤组织中位置,5.,低氧区巨噬细胞的,NRP1,的转录,受到抑制,7.NRP1,表达与否,Sema3A,活化相反信号途径,3.NRP1,缺失导致,TAM,再分布抑制肿瘤生长,6.,低氧调节,NRP1,限制巨噬细胞对,Sema3A,的应答,4.NRP1,缺失导致,TAM,再分布恢复抗肿瘤免疫,/,减少血管生成,阻断Sema3A/Nrp1信号抑制巨噬细胞进入低氧区,抗,肿瘤,的作用机制,研究内容,2024/11/13,6,文献阅读,表型,机制,1.巨噬细胞中NRP1缺失抑制肿瘤生长2.NRP1缺失阻止巨,研究结果：,1.,巨噬细胞中,NRP1,的缺失抑制肿瘤生长,建立,LysM-Cre;Nrp1,L/L,转基因小鼠（简称,L/L,），,特征,：,TAM,中,Nrp1,的表达下降,92%,，单核细胞中,Nrp1,下降,81%,，,TAN,或,DC,中,Nrp1,下降,60%,。,对照组,LysM-Cre;Nrp1,+/+,简称野生型,WT,，基本正常。,2024/11/13,7,文献阅读,研究结果：1.巨噬细胞中NRP1的缺失抑制肿瘤生长建立Lys,研究结果：,1.,巨噬细胞中,NRP1,的缺失抑制肿瘤生长,2024/11/13,8,文献阅读,研究结果：1.巨噬细胞中NRP1的缺失抑制肿瘤生长2023/,研究结果：,1.,巨噬细胞中,NRP1,的缺失抑制肿瘤生长,建立,iCSF1R-Cre;Nrp1,L/L,转基因小鼠，,特异性删失,TAM,中,Nrp1,，其他骨髓细胞中,Nrp1,的表达不受影响。,对照组,iCSF1R-Cre;Nrp1,+/+,简称野生型,WT,，基本正常。,2024/11/13,9,文献阅读,研究结果：1.巨噬细胞中NRP1的缺失抑制肿瘤生长建立iCS,研究结果：,2.,巨噬细胞中,NRP1,的缺失阻止其进入低氧区,对比,WT,组，,Nrp1,缺失组（即,L/L,），,TAM,总的数量增加；,且,低氧区的面积扩大,2024/11/13,10,文献阅读,研究结果：2.巨噬细胞中NRP1的缺失阻止其进入低氧区对比W,研究结果：,2.,巨噬细胞中,NRP1,的缺失阻止其进入低氧区,对比,WT,组，,Nrp1,缺失组（即,L/L,），,TAM,主要集中在常氧区，而在低氧区中的数量减少,在,iCSF1R-Cre;Nrp1,L/L,转基因小鼠观察到相同的结果,2024/11/13,11,文献阅读,研究结果：2.巨噬细胞中NRP1的缺失阻止其进入低氧区对比W,研究结果：,3.NRP1,缺失导致,TAM,再分布抑制原位和自发性肿瘤生长,建立两种原位肿瘤模型（,LLC,原位肺癌模型、,Panc02,原位胰腺癌模型）和,PyMT,自发性乳腺癌模型，同样证实,Nrp1,缺失可以导致,TAM,再分布，并抑制肿瘤生长，说明,Nrp1,缺失效应与肿瘤组织来源无关,2024/11/13,12,文献阅读,研究结果：3.NRP1缺失导致TAM再分布抑制原位和自发性肿,研究结果：,3.NRP1,缺失导致,TAM,再分布抑制原位和自发性肿瘤生长,2024/11/13,13,文献阅读,研究结果：3.NRP1缺失导致TAM再分布抑制原位和自发性肿,研究结果：,3.NRP1,缺失导致,TAM,再分布抑制原位和自发性肿瘤生长,2024/11/13,14,文献阅读,研究结果：3.NRP1缺失导致TAM再分布抑制原位和自发性肿,研究结果：,4.NRP1,缺失导致,TAM,再分布恢复免疫功能及减少血管生成,前面观察到,LysM-Cre;Nrp1,L/L,转基因小鼠,TAM,不能进入肿瘤低氧区，那么这将对,TAM,功能表型有何影响？,方法：将分离自转基因小鼠的,TAM,与,EC,共培养,2024/11/13,15,文献阅读,研究结果：4.NRP1缺失导致TAM再分布恢复免疫功能及减少,研究结果：,4.NRP1,缺失导致,TAM,再分布恢复免疫功能及减少血管生成,来自,L/L,组,TAM,促,EC,迁移和毛细血管网形成减少,释放更多,NO,、对肿瘤细胞更具细胞毒性，促进,T,细胞增殖,2024/11/13,16,文献阅读,研究结果：4.NRP1缺失导致TAM再分布恢复免疫功能及减少,研究结果：,4.NRP1,缺失导致,TAM,再分布恢复免疫功能及减少血管生成,促进,CD8,+,CTL,增殖,2024/11/13,17,文献阅读,研究结果：4.NRP1缺失导致TAM再分布恢复免疫功能及减少,研究结果：,4.NRP1,缺失导致,TAM,再分布恢复免疫功能及减少血管生成,Th1,因子增多,2024/11/13,18,文献阅读,研究结果：4.NRP1缺失导致TAM再分布恢复免疫功能及减少,研究结果：,4.NRP1,缺失导致,TAM,再分布恢复免疫功能及减少血管生成,呈现,M1,型增多、,M2,型减少（,M1,表达,NOS2/Cxcl9/Il-12/Cxcl10,，,M2,表达,Arg1/Ym1/Il-10/Ccl22,）,2024/11/13,19,文献阅读,研究结果：4.NRP1缺失导致TAM再分布恢复免疫功能及减少,研究结果：,5.,缺氧巨噬细胞的,NRP1,的转录受到抑制,明确,Nrp1,的效应之后，进一步研究了,Nrp1,调控,TAM,在缺氧区域的定位机制,2024/11/13,20,文献阅读,研究结果：5.缺氧巨噬细胞的NRP1的转录受到抑制明确Nrp,研究结果：,5.,缺氧巨噬细胞的,NRP1,的转录受到抑制,进一步探索缺氧抑制巨噬细胞中Nrp1表达的分子机制,，,HIF-2,可以抑制,Nrp1,表达,过表达NF-kB的亚基p50/p65，在Hif2a-KO或Ikbkb-KO巨噬细胞中将恢复,Nrp1,转录,抑制,2024/11/13,23,文献阅读,研究结果：5.缺氧巨噬细胞的NRP1的转录受到抑制进一步探索,研究结果：,5.,缺氧巨噬细胞的,NRP1,的转录受到抑制,HIF-2在巨噬细胞中的低氧稳定作用解开了经由IKK介导的NF-kB经典途径。因此，释放活化的p50/p65异质二聚体可以阻断Nrp1的表达。,2024/11/13,24,文献阅读,研究结果：5.缺氧巨噬细胞的NRP1的转录受到抑制HIF-2,研究结果：,5.,缺氧巨噬细胞的,NRP1,的转录受到抑制,与常氧区的,BMDM,或者,TAM,比较，缺氧区中的缺氧应答基因,Flt1,（编码,VEGFR1,）上调，而Nrp1的缺失并不影响这种调节作用,2024/11/13,21,文献阅读,研究结果：5.缺氧巨噬细胞的NRP1的转录受到抑制与常氧区的,研究结果：,5.,缺氧巨噬细胞的,NRP1,的转录受到抑制,肿瘤的缺氧,区域,，,Sema3a/Vegfa,的表达都上调了（F,i,g,F/G）。,2024/11/13,22,文献阅读,研究结果：5.缺氧巨噬细胞的NRP1的转录受到抑制肿瘤的缺氧,研究结果：,6.,受缺氧调节的Nrp1限定了巨噬细胞对Sema3A的应答,Sema3A趋化巨噬细胞必需Nrp1，但VEGF164不是。VEGF120(不能有效绑定Nrp1)与VEGF164一样具有趋化WT和Nrp1-KO BMDMs的作用(FA)。,Nrp1的缺失导致对Sema3A,、,VEGF164对巨噬细胞趋化能力减,弱，,而VEGF120的能力没有变化。,2024/11/13,25,文献阅读,研究结果：6.受缺氧调节的Nrp1限定了巨噬细胞对Sema3,研究结果：,6.,受缺氧调节的Nrp1限定了巨噬细胞对Sema3A的应答,联合应用,VEGF164/Sema3A,比单用,VEGF164,效应低，,NRP1,缺失时，,Sema3A,拮抗,VEGF,的趋化效应。,2024/11/13,26,文献阅读,研究结果：6.受缺氧调节的Nrp1限定了巨噬细胞对Sema3,研究结果：,6.,受缺氧调节的Nrp1限定了巨噬细胞对Sema3A的应答,通过细胞的绑定实验证实，,显示Sema3A可以非常明显的绑定在Nrp1-KO细胞上,。,因此，Sema3A能与Nrp1-KO巨噬细胞发生相互作用,。,2024/11/13,27,文献阅读,研究结果：6.受缺氧调节的Nrp1限定了巨噬细胞对Sema3,研究结果：,6.,受缺氧调节的Nrp1限定了巨噬细胞对Sema3A的应答,CCL21,具有将巨噬细胞从缺氧区域吸引出来。,Sema3A,降低,Nrp1-KO,或者缺氧,WT,小鼠中巨噬细胞对,CCL21,的诱使活动。,2024/11/13,28,文献阅读,研究结果：6.受缺氧调节的Nrp1限定了巨噬细胞对Sema3,研究结果：,7.,根据Nrp1表达与否Sema3A活化相反的信号,Sema3A,诱导,VEGFR1 Tyr1213,磷酸化。,Nrp1,缺失的巨噬细胞完全废除,Sema3A,依赖的,VEGFR1,的活化，导致对,VEGF,的应答没有明显影响。,2024/11/13,29,文献阅读,研究结果：7.根据Nrp1表达与否Sema3A活化相反的信号,研究结果：,7.,根据Nrp1表达与否Sema3A活化相反的信号,敲低,VEGFR1,将抑制,Sema3A,或者,VEGF164,对,WT,和,Nrp-KO,巨噬细胞的趋化活动，提示,Nrp1,需要,VEGFR1,去转化,Sema3A,介导的吸引性信号。,2024/11/13,30,文献阅读,研究结果：7.根据Nrp1表达与否Se
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