新一代测序技术的引入-ThermoFisherScientificppt课件

,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,/11,*,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,/11,*,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,/11,*,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,/11,*,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,/11,*,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,/11,*,Add title here,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,/11,*,Add title here,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,/11,*,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,*,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,*,Add title here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,Add text here,*,新一代测序技术在疑难案件中的应用,新一代测序技术在疑难案件中的应用,CE,法庭,DNA,检测技术金标准,三十年的法庭科学,DNA,技术发展过程中,CE,技术屡立奇功,目前大多数案件能够用,CE+STR,的方法解决,数据可靠、工作简单、快速、经济、数据库系统,DNA,扩增片段长度多态性,人类重复序列,DNA,探针,复合扩增,STR,位点的,DNA,分型,新一代技术的融入,？,CE法庭DNA检测技术金标准三十年的法庭科学DNA技术发展,DNA,检验技术,1985,年才开始运用于法庭科学检验鉴定中，但由于可以到达个人认定的作用发展迅速。,20,多年的发展，,DNA,从,DNA,指纹图发展到,STR,检验。,DNA,实验室检验灵敏度得到了提高，可以检测到,ng(10,6g,),级,STRs,英国第一起移民纠纷案的,DNA,指纹图,高降解识别率,高识别率,能自动分型结果数字化,快速分型,检验时间缩短,基于,PCR,方法,微量,DNA,等位基因不连锁,费用较贵,信息量大,DNA检验技术1985年才开始运用于法庭科学检验鉴定中，但,主要有以下几方面的作用,1,、同一认定：除同卵双生的双胞胎、骨髓移植的患者外，两个人基因分型相同的概率只有,100,亿分之一（,10,10,）。,主要有以下几方面的作用1、同一认定：除同卵双生的双胞胎、骨髓,2,、亲缘认定（遗传关系）,2、亲缘认定（遗传关系）,母系遗传,（,mtDNA,）,母系遗传（mtDNA）,父系遗传（,Y,染色体）,?,uncle,3,rd,cousin,Thomas Jefferson II,Field Jefferson,Peter Jefferson,President,Thomas Jefferson,Eston Hemings,Thomas Woodson,Different Y Haplotype,Same Y,Haplotype,Jefferson,Y Haplotype,Jefferson,Y Haplotype,?,父系遗传（Y染色体）?uncle3rd cousinThom,3,、现场重建,3、现场重建,1,of,6,样本高度降解，仅能得到部分、甚至得不到,STR,图谱,复杂混合样本解释,复杂亲缘关系鉴定,未知来源的组织、体液溯源,表型推断,始祖推断,当前法医,DNA,实验室的挑战,更高的要求，更多的挑战,1of6 样本高度降解，仅能得到部分、甚至得不到STR图谱当,疑难案件的检测有待新技术的融入,10,混合检测,降解,/,痕量检材,数据库无记录,疑难复杂家系,但,CE,本身技术上的局限性,无法在一些疑难案件上取得实质性的突破,领域中需要有新技术的融入,疑难案件的检测有待新技术的融入10混合检测降解/痕量检材数据,新一代测序技术的引入,新一代测序技术,(,Next Generation Sequencing,),也称高通量测序,同时能测几千到几百万的,DNA,片段，后续通过组装和对比完成。,下一代测序平台能测到,200-400bp,，甚至更长。,高通量；全基因组；高覆盖度,新一代测序技术的引入新一代测序技术(Next Generat,广东省厅,NGS,平台一览,1,of,6,广东省厅NGS平台一览1of6,124 SNP,位点（含,90,个常染色体位点和,34,个,Y,染色体位点）,Pi ranges from 1x10-31 6x10-35,扩增长度短,(,平均,132,141nts,),适合降解,DNA,推荐,1ng,起始,DNA,对于,43 Ken Kidd SNPs，,有,99.99%,的一致性,微量、高度降解检材,复杂亲缘关系辅助鉴定,HID-Ion AmpliSeq,身份鉴定试剂盒,124 SNP位点（含90个常染色体位点和34个Y染色体位点,Coverage,%Positive,Genotype,Major,Allele,每个,SNP,位点信息,样本间的比对,Y,单倍型预测,HID-Ion AmpliSeq,身份鉴定试剂盒,Coverage%PositiveGenotypeMajo,因祖坟迁移事件，,80,余岁的事主无法确定祖坟内究竟是否是自己的祖坟。故需要做相关亲缘鉴定。但由于严重降解,毛细管电泳技术无法得到有效的分型。故通过二代测序技术进行进一步的检测,NGS,案例应用,(1):,高度降解检材,检材状况：,案件背景,检材状况,因祖坟迁移事件，80余岁的事主无法确定祖坟,NGS,案例应用,(1):,高度降解检材,牙齿检材,:,参照血卡,:,牙齿检材已经严重降解,无法得到有效分型,并进行下一步的鉴定,NGS案例应用(1):高度降解检材牙齿检材:参照血卡:牙齿,NGS,案例应用,(1):,高度降解检材,NGS,结果展示,:,NGS案例应用(1):高度降解检材NGS结果展示:,利用,ID panel,进行个体识别身份验证：,牙齿检材,对照检材,符合孟德尔规律位点,不符合孟德尔规律的位点,常染色体位点,79,90,68,11,Y,染色体位点,24,34,23,1,全部位点,103,124,91,12,NGS,测序结果显示，,90,个常染色,SNP,位点中，双方均出齐的位点为,79,个，其中有,11,个位点不符合孟德尔遗传规律。且,Y,位点有一个位点不一致，故排除坟墓中的故人是事主的生父,NGS,案例应用,(1):,高度降解检材,利用ID panel进行个体识别身份验证：牙齿检材,最终信息,常染色体位点,Y,染色体位点,共出位点,无名尸结果,74,19,93,因无相关数据库和对照样本，所以无法进行相关比对。但是可建议放入宗卷，以便将来数据库或其他参照样本可以进行对比,利用,ID panel,进行个体识别身份验证,：,CE,结果显示无名尸骨高度降解：,NGS,案例应用,(2):,高度降解无名尸,最终信息常染色体位点Y染色体位点共出位点无名尸结果7,鉴定莫,XX,和莫,XX,的丈夫是否为孩子,A,和孩子,B,的亲身父母。,莫,XX,为骨髓移植患者，且移植已多年，效果不错，考虑其血液可能表现为供体基因分型，遂要求采其口腔拭子、血拭子、指甲和头发；要求提供骨髓移植供体的血拭子；其丈夫、孩子,A,、孩子,B,的口腔拭子共,8,份检材，使用,Identity SNP Panel,在,PGM,平台上检测。,同时使用,Global Filer,试剂盒结果作为参照,.,NGS,案例应用,(3):,移植患者亲子鉴定,鉴定莫XX和莫XX的丈夫是否为孩子A和孩子B的亲身父母。N,莫,XX,、莫,XX,丈夫、两个孩子的,SNP,分型符合孟德尔遗传；该结果与使用,Global Filer,做出来的结果完全一致。,莫,XX,血液与骨髓供体的,SNP,分型完全一致；与自身头发分型不一致。,莫,XX,头发、指甲的,SNP,分型完全一致；,Samples,莫,-,口腔,莫丈夫,-,口腔,孩子,B-,口腔,莫,-,血,骨髓供体,-,血,孩子,A-,口腔,莫,-,头发,莫,-,指甲,莫,-,口腔,67,79,88,88,81,91,91,莫丈夫,-,口腔,67,68,65,65,68,62,62,孩子,B-,口腔,79,68,73,73,86,82,82,莫,-,血,88,65,73,100,76,79,79,骨髓供体,-,血,88,65,73,100,76,79,79,孩子,A-,口腔,81,68,86,76,76,82,82,莫,-,头发,91,62,82,79,79,82,100,莫,-,指甲,91,62,82,79,79,82,100,NGS,案例应用,(3):,移植患者亲子鉴定,莫XX、莫XX丈夫、两个孩子的SNP分型符合孟德尔遗传；该结,Bone,teeth,and hai