第10章抗原抗体反应

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第十章 抗原抗体反应,免疫测定,Immunoassay,IA,一、抗原抗体反应的特点,（体外反应）,p176,特异性,交叉性,两种抗原含有共同部分（同抗原决定基）,比例相关性,/,按比性,可逆性,如提取纯化，亲和层析,阶段性,第一阶段,Ag,Ab,特异结合，几分钟,第二阶段 出现肉眼可见变化：凝集、沉淀、溶解、标记放大。几分钟、几小时,二、影响,Ag,Ab,反应的因素,电解质,0.85,NaCl,或其他,Buffer,酸碱度,pH6,8,温度 最适,37,，,低温缓慢，室温也可，不高于,56,三、,Ag,Ab,反应（试验）种类,凝集反应,agglutination test,概念：,颗粒,Ag,与相应,Ab,结合，在,电解质,存在下，经过一定时间（几分几小时）出现肉眼可见的,凝集块,现象称为凝集反应,凝集原,凝集素,凝集试验的类型,直接凝集反应,试管凝集试验,玻片凝集试验 如血型检验、,O,抗原检验,间接凝集试验,将,可溶性,Ag,，或者把,Ab,吸附于不直接参与和干扰,Ag,Ab,反应的,颗粒载体,上，然后使二者混合发生凝集反应。,协同凝集反应,属于,间接凝集反应,间接凝集反应,沉淀反应,概念,指,可溶性,Ag,与相应,Ab,特异结合，形成,免疫复合物,在电解质影响下形成,沉淀现象,。,沉淀原,precipitinogen,可溶,Ag,如 细菌浸出液,沉淀素,precipitin,沉淀试验类型,环状沉淀试验,液体中直接沉淀,凝胶沉淀试验,/,免疫扩散,双向免疫扩散,免疫单扩散,免疫电泳,补体结合反应,/,试验,Ag,Ab,特异结合,后，,补体参与,下，发生,溶菌,、,溶细胞,、,溶血,现象。,溶血素,标记抗原抗体反应,/,技术,免疫标记技术,概念,指用,荧光素,、,放射性同位素,、,酶,、,铁蛋白,、,胶体金,、,生物素亲和素,等标记,Ab,或,Ab,，后进行的,Ab,Ag,反应。,一抗、二抗（抗抗体）、酶标二抗,荧光素,、,放射性同位素,、,酶,标记最为成熟，称为免疫学,三大标记技术,免疫标记技术的优点,a,特异性强,b,敏感性高,c,快速,d,能,定性,、,定量,和,定位,ELISA,测定原理,ELISA,，,e,nzyme-,l,inked,i,mmunoadsorbent,a,ssay,酶联免疫吸附试验,一种标记 抗体,/,抗原 的 分析技术,ELISA,种类,夹心法,间接法,竞争法,双抗体夹心法（,HBsAg、HBeAg,等）示意图,固相载体,抗体,抗原,酶,抗体,酶标记抗体,1.将抗体包被在固相载体上。,2.,如样品中含有抗原，则结合,为抗原抗体复合物。,3.再加入酶标记抗体，则结合,为抗体-抗原-酶标记抗体复合,物。,4.酶催化底物并显色。,双抗原夹心法（抗-,HBs,等）示意图,1.将抗原包被在固相载体上。,2.,如样品中含有抗体，则结合,为抗原抗体复合物。,3.再加入酶标记抗原，则结合,为抗原-抗体-酶标记抗原复合,物。,4.酶催化底物并显色。,酶,抗原,酶标记,抗原,抗体,抗原,固相载体,酶,抗抗体,酶标记,抗抗体,抗体,抗原,固相载体,1.将抗原包被在固相载体上。,2.,如样品中含有抗体，则结合,为抗原抗体复合物。,3.再加入酶标记抗抗体，则结合,为抗原-抗体-酶标记抗抗体复合物。,4.酶催化底物并显色。,间接法（抗-,HCV,等）示意图,捕捉法（抗-,HAV IgM、,抗-,HDV IgM,等）示意图,酶,抗体,酶标记,抗体,抗原,抗抗体,固相载体,抗体,1.将抗抗体包被在固相载体上。,2.,如样品中含有抗体，则结合,为抗抗体-抗体复合物。,3.加入抗原及酶标记抗体，则结合为抗抗体-抗体-抗原-酶标记抗体复合物。,4.酶催化底物并显色。,免疫胶体金技术,简介,胶体金作为示踪标志物标记抗原（半抗原）或抗体,目前发展为一种常用的,标记技术,各种,生物学研究中,广泛使用。,各种,食品卫生、安全,指标的,最快速检测,几乎都用免疫胶体金技术。,医学诊断,使用的,免疫印迹技术,几乎都使用其标记。同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能用到。,免疫胶体金技术的基本原理：,还原剂 弱碱性 蛋白质阳离子基团,氯金酸,金颗粒 阴离子胶体 胶体金蛋白质,HAuCl,4,胶体金标记物：,抗原、半抗原、抗体均可标记,多种,生物大分子,，如,SPA,、,PHA,、,ConA,等。,免疫金标记技术,Immunogold labelling technique,主要利用了金颗粒具有,高电子密度,的特性，在金标蛋白结合处，在,显微镜,下可见,黑褐色颗粒,，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见,红色,或,粉红色斑点,，因而用于,定性,或,半定量的快速免疫检测,方法中，这一反应也可以通过,银颗粒的沉积,被放大，称之为,免疫金银染色,。,常用的免疫胶体金检测技术：,免疫胶体金光镜染色法,细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色。,免疫胶体金电镜染色法,斑点免疫金渗滤法,应用微孔滤膜（硝酸纤维膜）作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。,胶体金免疫层析法,immunochromatography,免疫层析胶体金测试片,将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。,