制药工程实验实验（精品）

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,2009,级生物技术,制药工程实验,可,见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量,实验,一,一、目的要求,1,、掌握用分光光度法测定,药物,中总黄酮含量。,2,、掌握可见分光光度计的使用方法。,二、基本原理,大山楂丸由山楂、神曲和麦芽组成，主要功能为开胃消食，其中山楂主要成分为有机酸、黄酮类及多种维生素。,黄酮类化合物具有,邻二酚羟基,，或,3,，,5,位羟基,结构，可与,铝盐、铅盐、镁盐,等金属盐类试剂反应，生成,有色配合物,，可用可见分光光度法测定其含量。,本实验利用黄酮类化合物在,亚硝酸钠,的碱性溶液中，与,Al,3+,产生高灵敏度的,橙红色配合物,（,max=510nm,），从而用可见分光光度法（比色法）测定大山楂丸中总黄酮的含量。,三、仪器与试药,1,、可见分光光度计、分析天平、回流提取器。,2,、乙醇（,A.R,）、,5%,亚硝酸钠溶液、,10%,硝酸铝溶液、,1mol/l,氢氧化钠溶液。,3,、芦丁（中国药品生物制品检定所）。,4,、大山楂丸（市售品）。,四、操作步骤,1,、标准液的配制：,精密称取芦丁对照品,20mg,，置,100ml,容量瓶中，加,95%,乙醇,50ml,使溶解，然后加,50%,乙醇稀释至刻度，即得,0.2mg/ml,的对照品溶液。,2,、标准曲线的制备,：,精密量取对照品溶液,0.0,、,1.0,、,2.0,、,3.0,、,4.0,、,5.0ml,，分别置于,10ml,容量瓶中，各加,50%,乙醇溶液使成,5ml,，精密加入,5%,亚硝酸钠溶液,0.3ml,，摇匀，放置,6,分钟，加入,10%,硝酸铝溶液,0.3ml,，摇匀，再放置,6,分钟，加入,1%,氢氧化钠溶液,4ml,，分别用,50%,乙醇稀释至刻度，摇匀，放置,15,分钟。以第一瓶作空白，用可见分光光度计在,510nm,处测其吸收度，作,A-C,标准曲线（或计算其回归方程）。,3,、样品液的制备：,精密称取干燥的大山楂丸,9.0g,，置,回流,提取器中，用,95%,乙醇,125ml,回流提取,1.5,小时，,提取两次，合并两次滤液，减压浓缩至,150ml,即得。,4,、含量测定：,精密量取提取液,1ml,，按上述标准曲线制备方法进行测定，并由标准曲线或回归方程计算样品中总黄酮的含量。,5,、芦丁的定性反应：,取上述,提取,溶液,2ml,，加少许镁粉，再加,5,滴浓盐酸，注意观察颜色变化。,五、注意事项,1,、实验证明，提取时间为,1.5,小时，,提取两次，,基本能提尽样品中黄酮。,2,、实验证明，样品显色后，在,30,分钟内测定总黄酮含量，无明显改变，超过,30,分钟，含量有所改变。,六、思考题,1,、比色法操作的注意事项是什么？,2,、总黄酮与单体黄酮的测定方法有何不同？,