流感病毒临床标本的采集方法、运输、保存

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,流感病毒临床标本的采集方法、运输、保存处理,概 述,流感病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节,多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织,一、采样对象和时间,采样对象：流感样病例（没有服用过抗病毒药物）、人禽流感待查病例,流感样病例:,发热（体温38），伴咳嗽或咽痛之一者，而缺乏其它的实验室确定诊断依据,采集时间：病人发病后的头三天,二、采样液要求,常用的采样液有：普通肉汤,（,只用于鸡胚，对细胞有毒性,）,，PH 7.4-7.6的Hanks液，Eagels培养液或水解乳蛋白溶液,采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素,标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存,Eagels基础培养基,抗生素名称,终浓度,庆大霉素,0.1mg/ml,抗真菌素,2Ug/ml,采样液抗生素含量,三、临床标本的采集,常用的标本种类：,咽拭子,鼻拭子,漱口液,鼻咽吸取物,鼻洗液,1、咽拭子,用灭菌棉签,（最好用,塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）,擦拭,双侧咽扁桃体及咽后壁,，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去,采咽拭子的器材和容器,2、鼻拭子,将灭过菌干净的棉签轻轻插入鼻道,内鼻腭,处，停留片刻后缓慢转动退出，以同一拭子擦拭两侧鼻孔。将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去,采鼻拭子的器材和容器,3、鼻咽吸取物,用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次,内有,HEPA膜,进风道,鼻咽吸取装置,出风道,吸取过程,正确,错误,错误,不要触摸病人的脸,!,4、漱口液,用10 ml生理盐水漱喉。漱时让患者,头部微后仰,，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。然后，用平皿或烧杯收集洗液,5、鼻洗液,患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。重复此过程洗两侧鼻孔,四、标本收集注意事项,操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护,采集标本要有一定力度,标本采集后应迅速至于冰上或者4 以下保存，因为流感病毒对热很敏感,标本管上写明：医院名称，标本号，患者姓名，性别，采样日期,标本采集后尽量在24小时内送到实验室进行病毒分离。24小时内未能进行病毒分离的标本应放-70 或以下,新鲜的临床采集标本,应在,4,条件下，,24小时,内运送至全国流感监测网络实验室；未能24小时内送至实验室的，应置,-70,或以下保存,冻存的临床采集标本,应在冻存的条件下，低温送至实验室,五、临床标本的运送要求,六、临床标本的处理原则,新鲜,的标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4保存，如未能接种应置-70或以下保存,冻存,的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4保存。如未能分离的标本应置-70或以下保存,七、临床标本的处理方法,含聚丙烯纤维的拭子的采集标本,:,先将含聚丙烯纤维的拭子在管壁,反复挤压,后取出,鼻洗液标本,:,充分振荡,标本管，将粘液打碎。置,4,待其自然沉淀,5,10,分钟，取上清,5,ml,。,上清液可直接接种或低温保存,鼻咽吸取液：,用干净灭菌过的毛细吸管，在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同样置,4,待其自然沉淀,5,10,分钟，取上清,5,ml,。,上清液可直接接种或低温保存,肺组织材料：,肺组织材料在无菌条件下，用高压灭菌的乳钵研磨后，用生理盐水配成,20%,悬液，,2000,rpm,离心,10,min,，,取上清加入抗生素。接种细胞或鸡胚,八、临床标本的的处理原则,临床标本处理后，将原始标本分为,三份,:一份（40）用于鸡胚接种，一份（30）用于MDCK细胞接种，一份（30）保存待复核用。对于病毒分离阳性的标本70保存6个月,流感病毒株的运输,寄送流感毒株标本的包装要求,病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本,直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关信息填在“流感/人禽流感毒株送检单”内，送检单应单独放在防水的袋子里,将装标本的密封袋放入专用运输箱内（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的材料,标本运输：异地运输可以采用邮寄或快递的方法,九、禽流感标本采集的生物安全防护,1,采集人禽流感临床样本时，采集人员需要做好个人防护，戴防护口罩、帽子、护目镜、手套、防护衣、鞋套。,2.,人禽流感标本的运送、接收和保藏应当符合我国病原微生物实验室生物安全管理条例（国务院424号令）的有关要求。,3人禽流感临床标本的处理、分装在生物安全二级的实验室里进行，采用生物安全三级防护。,4人禽流感病毒分离、培养、纯化，微量中和试验等实验必须在生物安全三级（BSL-3级）实验室里操作。,5,临床标本病毒核酸提取在生物安全二级（BSL-2级）实验室的二级生物安全柜里进行，采用生物安全三级防护。,6,用灭活的抗原进行红细胞凝集抑制（HI）实验、RT-PCR病毒核酸检测可以在生物安全二级（BSL-2级）实验室里操作。,谢 谢!,