DNA的粗提取和鉴定市级公开课课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,5.1 DNA,的粗提取与鉴定,一、基础知识,（一）提取,DNA,的方法,1.,提取,DNA,的基本思路,利用,DNA,与,RNA,、,蛋白质,和,脂质,等,在物理和化学性质方面的差异,提取,DNA,，去除其他成分,（,1,）,DNA,的溶解性,思考,1,：图中,DNA,溶解度最小的浓度是多少？,2.DNA,的理化性质,（,2,）,DNA,不溶于酒精溶液,DNA,不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将,DNA,与蛋白质进一步分离。,思考,2,：如何控制浓度达到让,DNA,析出的目的？,0.14 mol/L,向,NaCl,溶液中加入蒸馏水，使其溶液浓度从,2mol/L,下降到,0.14 mol/L,（,3,）,DNA,对酶、高温和洗涤剂的耐受性,蛋白酶,水解蛋白质，,对,DNA,没有影响,高 温,大多数蛋白质不能忍受,60,80,而,DNA,在,80,以上才会变性,洗涤剂,溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对,DNA,没有影响,（,4,）特定的颜色反应,鉴定,DNA,沸水浴条件下，,DNA,与二苯胺反应呈现,蓝色。,二、实验设计,问题导学,问题讨论,1,：什么样的材料更适合提取,DNA,？,对植物和动物细胞处理的方法是否相同？,问题讨论,2,：去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取,DNA,有,哪几种方案，有什么不同？,问题讨论,3,：,DNA,在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得,到白色丝状物？,问题讨论,4,：鉴定,DNA,的具体方法是什么？在必修,1,教材实,验中还用到哪种试剂来观察,DNA,在细胞中的分布,二、问题导学,问题讨论,1,：什么样的材料更适合提取,DNA,？,对植物和动物细胞处理的方法是否相同？,选用,DNA,含量相对较高的组织，易得易破裂如鸡血,(,加柠檬酸钠防止凝固,),；,或植物细胞如菜花需要加洗涤剂和食盐并充分搅拌和研磨。,对应训练,1,：,你认为下列提供的材料中哪些不适合提取,DNA,？洋葱、猕猴桃、大肠杆菌、猪血、鸡血。,答案：,大肠杆菌、猪血。,大肠杆菌,1,条,DNA,，哺乳动物血红细胞不,含细胞核和从多细胞器，没有,DNA,问题讨论,2,：去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取,DNA,有哪几种方案，有什么不同？,方案一：向滤液中加入,2mol/l,的,NaCl,充分溶解,DNA,，过滤去除杂质，加入蒸馏水，使,DNA,析出直至析出物不再增加，过滤得到,DNA,析出物，去除溶液中的杂质。可反复多次溶解,DNA,去除杂质。再将析出物溶解到,2mol/l,的,NaCl,，用纱布过滤去杂质后，再向滤液中加入等体积的冷酒精进一步提纯,方案二：直接向滤液中加入嫩肉粉，即木瓜蛋白酶，将滤液中的蛋白质分解。,方案三：将滤液放在,60,75,度的恒温水浴箱中保温,10,15min,严格控制温度。,问题讨论,3,：,DNA,在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得到白色丝状物？,问题讨论,4,：鉴定,DNA,的具体方法是什么？在必修,1,教材实验中还用到什么别的试剂用来鉴定,DNA,呢？,加入与滤液等体积、冷却的酒精，体积分数为,95%,，用玻璃棒轻缓地沿一个方向搅拌，卷起白色丝状物。,先将丝状物溶解于,2mol/l,的,NaCl,溶液中溶解，再加入,4ml,二苯胺试剂，沸水浴中加热，与空白对照组对照比较颜色变化。,三、书写,DNA,粗提取和鉴定的主要步骤,要求：先写一句概括性话语，具体细节只写相关试剂和关键操作方法，要求写出此步骤中,DNA,在哪里？,1,、,材料的选择,2,、破碎细胞释放,DNA,3,、去除滤液中的杂质,4,、,DNA,的析出,与鉴定,DNA,含量丰富的细胞,含核物质,DNA,的滤液,DNA,再溶解在,2mol/lNaCl,中,向,2mol/lNaCl,中加入冷酒精，让,DNA,析出物在,沸水浴下与二苯胺反应,显蓝色,1,填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。,提取鸡血细胞中核物质,：,溶解核内,DNA,：,析出,2mol/LNaCl,溶液中的,DNA,：,DNA,白色丝状物的析出：,DNA,的鉴定,：,四、典型例题,蒸馏水,2mol/L,NaCl,加入蒸馏水,95%,冷酒精,沸水浴中与二苯胺反应,2,、某同学在做,DNA,的粗提取与鉴定实验中，加入二苯胺鉴定的结果是有,DNA,的试管中溶液颜色很淡，其原因不可能是（）,A,经蒸馏水处理的红细胞，在用玻璃棒搅拌时，时间偏少，,使红细胞破裂数量少,B,未进行沸水浴或沸水浴时间短，导致,DNA,含量少，染色,时间不够,C,选择鸡血液时，选用鸡血细胞液，,D,用,NaCl,溶液进行盐析时，所配制的,NaCl,溶液浓度达不到,0.14moL/L,，使析出的,DNA,少,C,3,、,本实验中有三次过滤：,过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液,过滤含粘稠物的,0.14mol/LNaCl,溶液,过滤溶解有,DNA,的,2mol/LNaCl,溶液,以上三次过滤分别为了获得（,）,A,、,含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含,DNA,的滤液,B,、,含核物质的滤液、滤液中,DNA,粘稠物、含,DNA,的滤液,C,、,含核物质的滤液、滤液中,DNA,粘稠物、纱布上的,DNA,D,、,含较纯的,DNA,滤液、纱布上的粘稠物、含,DNA,的滤液,A,