碱性磷酸酶Km值的(精品)

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,碱性磷酸酶,Km,值的测定,底物浓度,酶浓度,pH,温度,激活剂,抑制剂,研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。,影响 酶促反应的因素,底物浓度对反应速率影响,在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速率的影响呈,矩形双曲线,关系。,S,V,S,：,底物浓度,V,：,不同,S,时的反应初速度,V,max,：,最大反应速度,(maximum velocity),m,：,米氏常数,(,Michaelis,constant),V,max,S,K,m,+S,K,m,值,K,m,等于,酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度,。,意义：,a),K,m,是酶的,特征性,常数之一；,b),K,m,可近似表示酶对底物的,亲和力,；,c),同一酶对于不同底物有不同的,K,m,值。,K,m,K,m,S,2,K,m,+S,V,max,V,max,S,V,max,V,S,K,m,V,max,/2,双倒数作图法,V,max,S,K,m,+S,V=,（林贝氏方程）,+,1/V=,K,m,V,max,1/V,max,1/S,两边同取倒数,m,值与,max,值的测定,注意事项,1,底物和酶取样准确,2,保温时间准确,1,2,3,4,5,6,7,加入酶的时间,加入碱性溶液,终止反应的,时间,9:00:00,9:00:30,9:01:30,9:02:00,9:02:30,9:03:00,9:01:00,9:15:00,9:15:30,9:16:00,9:16:30,9:17:00,9:17:30,9:18:00,保证每个试管的反应时间为,15,分钟,实验报告,1,绘制矩形双曲线图,2,绘制双倒数图，并通过双倒数图读出碱性磷酸酶对磷酸本二钠的,Km,值,注意事项,1,做如下表格,2,可电脑作图,3,若人工作图，在坐标轴上禁止出现分数,(1/2,1/16),4,实验的最终目的是测得,Km,值，因此实验报告最终必须得出结论：,Km,值等于多少,1,2,3,4,5,6,7,Abs,S,1/ABS,1/S,